Memeliler gibi, kas lifi sayısı, kümes hayvanı embriyogenezi sırasında nihai kas kütlesinin önemli bir belirleyicisi olarak belirlenir. Bu yöntem, araştırmacıların kümes hayvanlarını ovo miyogenezinde ve kas lifi hiperplazisinin manipülasyonunda incelemelerini sağlar. Bu teknik, ekipmana çok az yatırım gerektirir ve miyogenez manipülasyonunu incelemek için kolay ve nispeten düşük maliyetli bir yöntemdir.
Bu teknikte yeni olan araştırmacılar, yumurtaları düzgün bir şekilde kuluçkaya yatırmak için mücadele edebilirler. Bu tekniği gösteren, laboratuvarımızdaki her ikisi de Yüksek Lisans yüksek lisans öğrencileri olan ben ve Morgan Gravely olacak. Deneye başlamadan önce, düşük kaliteli yumurtaları inceleyin ve atın.
Seçilen yumurtalara bireysel yumurta numaraları atayın ve kaydedin ve ardından yumurtaları tartın. Daha sonra, yumurtaları uygun kuluçka tepsilerine yerleştirin ve altı saat boyunca% 40 bağıl nem ile 26.6 santigrat derecede önceden inkübe edin. Kuluçkadan sonra, inkübatör sıcaklığını 18. inkübasyon gününe kadar% 40 bağıl nem ile 37 santigrat derecede artırın ve koruyun.
Yumurtaların yüzey sıcaklığının 37 santigrat derece olmasını sağlamak için inkübatördeki birkaç yumurtanın yüzey sıcaklığını günde iki kez termal yüzey termometresi ile ölçün. Her saat başı döndürerek yumurtaları yeniden konumlandırmaya devam edin. % 10 ila% 12.5 yumurta ağırlığı kaybını sağlamak için, kuluçkanın ilk 18.5 günü boyunca yumurta ağırlıklarını günlük olarak kaydedin.
Kuluçkanın 10. gününde, makalede açıklandığı gibi ovo enjeksiyon işleminde her 100 mikrolitre için gerekli nikotinamid ribozid çözeltisini hazırlayın ve çözeltileri bir su banyosunda 37 santigrat derecede tutun. Yumurtaları inkübatörden birer birer çıkardıktan ve ılık bir havluyla kapladıktan sonra, yumurta sarısı kesesini bulmak için her yumurtayı mumlayın. Yumurta sarısı kesesine 100 mikrolitre steril salin ile verilen nikotinamid ribozid tedavisi dozunu enjekte etmek için yumurta kabuğunun bir santimetre derinliğine steril 20 gauge 2.54 santimetre hipodermik iğne sokmadan önce enjeksiyon alanını% 70 etanol ile temizleyin.
Aşırı nem kaybını önlemek için enjeksiyon bölgesini hemen küçük bir parça mutlak su geçirmez bant ile kaplayın. Tüm yumurtalar tedavilerini aldıktan sonra, tepsiyi tekrar inkübatöre yerleştirin. Kuluçka günü 18'de, yumurtaları tedavilerine göre atanan kuluçka kutularına yerleştirmek için tepsilerden çıkarın, ardından kuluçka kutularını, tüm yumurtalar yumurtadan çıkana kadar veya inkübasyonun 23. gününe kadar nem% 60'a yükselecek şekilde inkübatöre yerleştirin.
Örnek toplamadan önce, civcivi başı aşağı ve bacakları vücudun altına sıkışmış olarak yan tarafına koyarak ve başın üstünden kuyruğa kadar olan uzunluğu ölçerek ötenazi civcivlerin uzunluğunu yumruklamak için tacı belirleyin, ardından baş genişliğini bir kulak deliğinden diğer kulak deliğine kadar ölçün. gaganın arkasından kafatasının arkasına kadar. Baş çevresini değerlendirmek için, kafatasının etrafına bir kulak deliğinden diğerine elastik olmayan bir ip sarın ve ardından ipin ölçümünü metrik bir cetvelle elde edin. Aynı şekilde, ölçümü elde etmek için ipi metrik bir cetvel üzerine yerleştirmeden önce, kanatların vücuda temas ettiği yerin altına göğsün etrafına bir ip sararak göğüs çevresini belirleyin.
Civcivin göğüslerine% 70 etanol püskürtün ve parmaklarınızla, pektoralis majör kaslarını ortaya çıkarmak için tüyleri ve cildi çekin, ardından dijital kumpaslarla ölçümler yapın. Kanatların vücuda temas ettiği göğüs boyunca göğüs genişliğini ve klavikulanın altından yağ yastığının üstüne kadar göğüs uzunluğunu ölçün. Sağ pektoralis majör kasını çıkarmak için, kası vücut duvarından serbest bırakmadan önce omurga kemiği boyunca kesmek için cerrahi makas veya neşter ve forseps kullanın.
Pektoralis majör kasını çıkardıktan sonra, dijital kumpaslar kullanarak ölçümleri toplamak için kası bir Popsicle çubuğu üzerine düz bir şekilde yerleştirin. Kraniyalden kasın kaudal kısmına kadar olan kas uzunluğunu ve kasın kranial kısmının en geniş kısmındaki kas genişliğini öğrenin. Kas kalınlığını belirlemek için, forseps ile memeyi alın ve kasın kraniyal bölümünün en kalın kısmında ölçün.
Ölçümler yapıldığında, sağ ve sol pektoralis majör kasları, bir yıla kadar eksi 80 santigrat derecede daha ileri analizler için saklanabilir. Embriyolara, in ovo beslemenin etkisini incelemek için dört nikotinamid ribozid dozu veya dozu enjekte edildi. 18. gün embriyolarının ve yumurtadan çıkmış civcivlerin vücut ağırlığı üzerinde herhangi bir doz etkisi olmadığı gözlendi.
Benzer şekilde, tüm gün 18 embriyo için pektoralis majör kas ölçümlerinde doz etkisi tespit edilmedi. Yumurtadan çıkan civcivler için, pektorallerin majör kas uzunluğu ve genişliği ölçümleri üzerinde doz etkisi yoktu. Bununla birlikte, doz kas ağırlığını ve derinliğini etkiledi.
Nikotinamid ribozid enjekte edilmeyen embriyolardan geliştirilen civcivler, 501.000 milimolar nikotinamid ribozid enjekte edilen embriyolardan gelen civcivlerden daha az ağırlığa sahip pektoralis majör kaslarına sahipti. Sıfır ve 250 milimolar nikotinamid ribozid enjekte edilen embriyolardan elde edilen civcivler, 501.000 milimolar nikotinamid ribozid ile enjekte edilen embriyolardan elde edilen civcivlerden daha az pektoralis majör derinliğine sahipti. Sağlam bir deney yürütmenin anahtarı, hatasız ve düzgün yumurtaları seçmektir.
Bu, tüm etkilerin tedavi katalizörlü olmasını sağlayacaktır. Pektoralis majör kasının toplanmasıyla birlikte, kas lifi morfometriklerini ölçmek için histoloji kullanılabilir ve gen ve protein ekspresyon analizi için toplam RNA ve protein ekstrakte edilebilir. Şu anda bu teknolojinin işlenmiş kuşların taze et kalitesindeki büyüme performansı üzerindeki etkilerini inceliyoruz.
