使用晶体紫改善使用 TCID50 检测法进行病毒滴定的基于视觉细胞病变效应的读数

该协议的目标是产生病毒储备滴定并使用结晶紫染色将其可视化。为此，将演示一般的病毒滴定，然后进行染色。该滴定将在生物安全2级实验室的生物安全柜中在96孔板中进行，为期七天。

为此，将使用相应的培养基接种首选细胞系的96孔板并使其生长直至汇合。将病毒原液稀释后使用十倍稀释液，通过混合900微升培养基和100微升病毒，或相应稀释。确保涡旋每个管子，以确保培养基和病毒的适当混合，并避免稀释液的错误。

在导联物中写下您的板的布局以及每次稀释，以帮助感染过程。感染前，使用200微升PBS洗涤。在相应的孔中加入50微升的接种物。

然后，在5%CO2培养箱中以37摄氏度孵育7天。孵育七天后，使用200微升PBS洗涤。通过在PBS中加入每孔50微升PFA以4%固定细胞，并在室温下孵育15分钟。

孵育后，再次用200微升PBS洗涤细胞两次，然后在水中加入每孔50微升结晶紫，并在室温下孵育五分钟。最后，从孔中吸取结晶紫，并任选地，将板在室温下风干两到五分钟，或用200微升水洗涤，以在可视化之前去除多余的污渍。结果，在重新染色后，阴性细胞将被染色。

阳性井将被清除。此信息将用于两个描述的公式之一，以计算您的最终病毒滴度。当比较每种方法获得的滴度时，它表明在单核细胞化学中，与结晶紫相比，在某些情况下，染色可以检测到额外的阳性孔，同样，两种染色方法都可以检测到比通过显微镜进行视觉评估更多的阳性孔。