심장 동종이식편에 치료제를 전달하기 위한 돼지 이질성 심장 이식 프로토콜

이 프로토콜은 심장 이식의 대형 동물 모델에서 치료제가 전체 심장 동종이식편에 효과적으로 투여될 수 있는 방법을 설명하는 최초의 프로토콜이다. 이 프로토콜의 가장 큰 장점은 연구자가 이식 후 장기간에 걸쳐 전체 심장 동종 이식편에 대한 치료의 효과를 테스트 할 수 있다는 것입니다. 이 기술은 심장 동종이식편 거부반응, 원발성 이식편 기능장애를 예방하고, 수술 후 면역억제의 필요성을 최소화하거나, 심장 동종이식편의 수명을 연장시키는 중재를 조사하는 데 사용될 수 있다.

노출을 최적화하는 것은 이식 절차에서 가장 어려운 부분이며 여러 팀 구성원이 완료해야합니다. 마찬가지로, 경험있는 관류 학자들은 생체 외 관류를 조정하고 모니터링하기 위해 필요합니다. 시작하려면 돼지의 크기에 따라 제조소에서 xiphoid까지 10 개의 블레이드를 사용하여 20 ~ 30cm 길이의 절개를하십시오.

전기 소작술을 사용하여 흉골에서 xiphoid로 주요 가슴을 나누고 흉골의 중간 선을 따라 나뉘어지도록주의하십시오. 일단 흉골까지 내려 가면 중간 선을 채점하고 무거운 가위로 나누어 xiphoid에서 흉골 절제술을 시작하십시오. 그런 다음 각 절단 후 흉골 절제술 두개골을 연장하십시오.

손가락 스윕을 사용하여 흉골에서 심장을 무뚝뚝하게 분리하고 manubrium을 통해 흉골 절제술을 완료하십시오. 흉골 리트랙터를 사용하여 수술 현장 노출을 최적화한 후, 횡격막에서 대동맥까지 세로 심낭을 입력하고 실크 봉합사를 사용하여 심낭 요람을 만들어 전기 소작으로 흉선을 확인하고 제거합니다. 대동맥과 폐동맥 사이의 조직을 완전히 나누고 대동맥 아치와 상완 줄기의 위치를 시각화하여 대동맥 교차 클램프의 적절한 배치를 용이하게합니다.

가위와 무딘 해부를 사용하여 우수한 베나 카바를 원주적으로 풀고 우수한 베나 카바 주위에 제로 크기의 두 개의 실크 봉합사를 묶습니다. 크기 4-0 폴리프로필렌 봉합사를 U-스티치 방식으로 오름차순 대동맥에 바르고 지갑 끈 방식으로 오른쪽 아트리움에 바릅니다. 이전에 배치 된 U-stitch로 확보 된 소아 대동맥 뿌리 캐뉼라를 삽입하십시오.

그리고 캐뉼라를 방영 한 후 Rummel 지혈대로 제자리에 고정하십시오. 튜브가 del Nido 심흉막으로 플러시 된 후 대동맥 뿌리 캐뉼라를 심흉막 튜브에 연결하십시오. 이전에 배치 된 지갑 문자열 내에 오른쪽 동맥 절제술을 만듭니다.

정맥 캐뉼라를 오른쪽 심방에 삽입하고 Rummel 지혈대로 고정하십시오. 정맥 캐뉼라를 세포 보호기 심장 절제술에 연결된 멸균 흡입 라인에 연결하고 약 1 ~ 1.3 리터의 혈액을 수집하십시오. 그런 다음 대동맥 크로스 클램프를 적용하여 클램프가 오름차순 대동맥을 완전히 막도록주의 깊게 확인하십시오.

심장에 멸균 얼음 슬러시를 놓은 후, 열등하고 우수한 베나 카바를 azygos 정맥에 바로 근접하게 나눕니다. 아치 수준의 대동맥은 비지명 동맥과 분기의 주요 폐동맥에 원위 위치합니다. 폐정맥을 확인하고 라이게이트한 다음 가슴에서 심장을 제거하고 멸균 얼음이 있는 용기에 넣습니다.

대동맥 커넥터의 배치를 위해 대동맥을 준비하려면 절단 가장자리 아래 5 밀리미터 깊이의 원위 대동맥 안쪽에 간단한 수평 매트리스 방식으로 4 개의 약속 된 크기의 4-0 폴리 프로필렌 봉합사를 놓은 다음 묶으십시오. 서약된 대동맥 봉합사를 들고 대동맥 커넥터를 대동맥에 삽입하고 대동맥 주위에 탯줄 테이프를 묶어 커넥터를 고정시킵니다. 크기 4-0 폴리프로필렌 지갑 끈을 주 폐동맥의 원위 절단 가장자리 주위에 놓습니다.

폐동맥 캐뉼라를 삽입하고 지갑 끈의 끝을 묶어 캐뉼라를 고정시킵니다. 그런 다음 폐동맥 캐뉼라를 장치의 폐동맥 커넥터에 연결하고 넥타이로 고정하십시오. 준비된 이식편을 뒷 테이블에서 생체외 관류 장치로 가져 와서 대동맥 커넥터를 장치 장소에 연결하십시오.

좌심실 통풍구는 묶이지 않은 폐정맥을 통해 좌심방으로 흘러 들어가고 승모판 밸브를 가로 질러 좌심실로 배출됩니다. 숫자 10 블레이드를 사용하여 20 ~ 30cm 길이의 피부 절개를 한 다음 전기 소작을 사용하여 근막까지 해부를 계속하십시오. 두 개의 Kocher 클램프로 근막과 복막을 들어 올린 후 Metzenbaum 가위를 사용하여 복강으로 조심스럽게 작은 절개를 만듭니다.

전기 소작을 사용하여 절개의 전체 길이에 대한 복막 개구부를 연장하십시오. 기본 내장을 보호하기 위해 손가락을 아래에 놓습니다. Balfour 리트랙터를 배치하여 노출을 최적화하고 젖은 수건을 사용하여 작은 창자로 조심스럽게 후퇴하십시오.

해부를 열등한 정맥 카바의 복부 대동맥으로 운반 한 다음 중간 및 대형 클립으로 림프원을 절개하십시오. 뒷 테이블에서 좌심실 심실 통풍구가 삽입 된 폐정맥 좌측 절제술이 과대 봉제 될 때, 대마초에 부착되어 조직을 분쇄했을 수있는 대동맥과 폐동맥의 원위 측면을 다듬습니다. 열등한 베나 카바에 Satinsky 클램프를 놓고 숫자 11 블레이드와 Pott의 가위를 사용하여 약 1.5 센티미터 크기의 세로 정맥 절제술을 만듭니다.

폐동맥 이식편을 실행 크기 4-0 폴리프로필렌 봉합사를 사용하여 말단 투 사이드 방식으로 수용자의 infrarenal infrainor vena cava에 아나스토모스. 그런 다음 달리기 크기 4-0 폴리프로필렌 봉합사를 사용하여 수용자의 infrarenal 대동맥에 이식편을 종단 투 사이드 방식으로 해부학적으로 분석한다. 조심스럽게 심장을 오른쪽 복막 공간에 배치하여 해부학에 긴장과 혈관의 꼬임을 방지하십시오.

그런 다음 작은 장을 교체하십시오. 루프 크기 제로 Maxon 봉합사로 근막을 절개의 양쪽 끝에서 시작하여 중간에 묶어서 장의 부상을 피하십시오. 달리기 방식으로 크기 2-0 Vicryl과 크기 4-0 Monocryl의 피부를 달리기 방식으로 깊은 진피 층을 닫으십시오.

몇 가지 상이한 관류 파라미터가 획득되었다. 순환 유속은 폐동맥, 대동맥 및 관상동맥으로부터 측정되었다. 평균 압력, 수축기 압력, 이완기 압력을 포함하는 대동맥 압력이 또한 측정되었다.

생체외 관류 동안, 심장 동종이식편의 심박수 및 온도를 또한 측정하였다. 관류 기간 동안, 혼합 정맥 산소 포화도 및 헤마토크릿 값을 퍼퓨세이트로부터 측정하였다. 계내 35일째에 복강내 이종토픽 심장의 생존능은 이 프로토콜을 이용한 성공적인 이식을 나타낸다.

기억해야 할 가장 중요한 것은 해부학의 긴장과 꼬임에 대한 가능성을 최소화하는 동종 이식편을위한 부위를 선택하는 것입니다. 이 절차에 따라 연구자는 동종 이식편에 대한 면역 학적 반응에 대한 효과를 확인하고 동종 이식편에 대한 치료 효과의 수명을 결정하기 위해 여러 가지 유형의 치료제를 테스트 할 수 있습니다. 이 프로토콜을 개발 한 후, 우리 그룹은 바이러스 벡터를 사용하여 유전자 전달의 거부 및 효능의 병태 생리학에 대한 이해를 얻기 위해 급성 동종 사진 거부 모델뿐만 아니라 유전자 전달을위한 다양한 바이러스 벡터 비히클을 테스트 할 수있었습니다.