Bu protokol, kardiyak transplantasyonun büyük hayvan modelinde terapötiklerin bütün bir kardiyak allogrefte nasıl etkili bir şekilde uygulanabileceğini açıklayan ilk protokoldür. Bu protokolün temel avantajı, araştırmacıların transplantasyonu takiben uzun süreler boyunca bir terapinin tüm kardiyak allogreft üzerindeki etkilerini test etmelerine izin vermesidir. Bu teknik, kardiyak allogreft reddini, primer greft disfonksiyonunu önleyen, postoperatif immünsüpresyon ihtiyacını en aza indiren veya kardiyak allogreftin ömrünü uzatan müdahaleleri araştırmak için kullanılabilir.
Maruziyeti optimize etmek, nakil prosedürünün en zorlu kısmıdır ve birden fazla ekip üyesinin tamamlamasını gerektirir. Benzer şekilde, ex vivo perfüzyonu koordine etmek ve izlemek için deneyimli perfüzyonistlere ihtiyaç vardır. Başlamak için, domuzun büyüklüğüne bağlı olarak, manubriyumdan ksifoide kadar 10 numaralı bıçağı kullanarak 20 ila 30 santimetre uzunluğunda bir kesi yapın.
Pektoralis majörünü sternumdan ksifoide bölmek için elektrokoter kullanın, sternumun orta çizgisi boyunca bölünmeye dikkat edin. Sternuma indikten sonra, orta çizgiyi puanlayın ve sternotomiye ağır makasla bölerek ksifoidden başlayın. Daha sonra her kesimden sonra sternotomi sefaladını uzatın.
Parmak süpürmelerini kullanarak kalbi sternumdan açıkça ayırın ve sternotomiyi manubrium boyunca tamamlayın. Sternal bir retraktör kullanarak cerrahi alan maruziyetini optimize ettikten sonra, perikarda diyaframdan aort uzunlamasına girerek ve ipek sütürler kullanarak perikardiyal bir beşik oluşturarak timusu elektrokoter ile tanımlayın ve çıkarın. Dokuyu aort ve pulmoner arter arasında tamamen bölün ve aort çapraz kelepçesinin uygun şekilde yerleştirilmesini kolaylaştırmak için aort arkının ve brakisefalik gövdenin yerini görselleştirin.
Makas ve künt diseksiyon kullanarak, superior vena kava'yı çevresel olarak serbest bırakın ve superior vena kava'nın etrafına sıfır büyüklüğünde iki ipek sütür bağlayın. Boyut 4-0 polipropilen sütürü yükselen aort bölgesine U-dikiş şeklinde, sağ atriyuma ise kese ipi şeklinde uygulayın. Daha önce yerleştirilmiş U-dikiş ile sabitlenmiş bir pediatrik aort kök kanülü yerleştirin.
Ve sonra kanülü havasızlaştırdıktan sonra, bir Rummel turnikesi ile yerine oturtun. Aort kökü kanülünü, tüp del Nido kardiyoplejisi ile yıkandıktan sonra kardiyopleji tüpüne bağlayın. Önceden yerleştirilmiş çanta ipi içinde doğru bir atriotomi oluşturun.
Sağ atriyuma venöz bir kanül yerleştirin ve bir Rummel turnikesi ile sabitleyin. Venöz kanülü hücre koruyucu kardiyotomiye bağlı steril bir emme hattına bağlayın ve yaklaşık 1 ila 1.3 litre kan toplayın. Daha sonra aort çapraz kelepçesini uygulayın ve kelepçenin yükselen aortu tamamen tıkadığından emin olun.
Kalbe steril buz rüşveti yerleştirdikten sonra, aşağı ve üstün vena kavayı azigos damarına sadece proksimal olarak bölün. Kemer seviyesindeki aort, bifurkasyondaki innominat artere ve ana pulmoner artere distaldir. Pulmoner damarları tanımlayın ve yaslanın, ardından kalbi göğüsten çıkarın ve steril buzlu bir kaba koyun.
Aortu aort konektörünün yerleştirilmesine hazırlamak için, dört adet rehinli boyut 4-0 polipropilen sütürü, distal aortun iç kısmına, kesilmiş kenarın beş milimetre derinliğinde basit bir yatay yatak şeklinde yerleştirin ve ardından bağlayın. Rehin verilen aort sütürlerini tutarken, aort konektörünü aort içine yerleştirin ve konektörü sabitlemek için aortun etrafına göbek bandı bağlayın. Ana pulmoner arterin distal kesim kenarının etrafına 4-0 büyüklüğünde bir polipropilen çanta ipi yerleştirin.
Pulmoner arter kanülünü yerleştirin ve kanülü sabitlemek için çanta ipinin uçlarını bağlayın. Daha sonra pulmoner arter kanülüne cihazdaki pulmoner arter konektörüne bağlayın ve bağla ile sabitleyin. Hazırlanan grefti arka masadan ex vivo perfüzyon cihazına alın ve aort konnektörünü cihaz yerine bağlayın.
Sol ventrikül venti, bağlanmamış pulmoner venden sol atriyuma ve mitral kapak boyunca sol ventriküle drene girer. 10 numaralı bıçağı kullanarak, 20 ila 30 santimetre uzunluğunda bir cilt kesisi yapın ve ardından elektrokoter kullanarak fasyaya kadar diseksiyona devam edin. Fasya ve peritonu, iki Kocher kelepçesiyle kaldırdıktan sonra, Metzenbaum makası kullanarak periton boşluğuna dikkatlice küçük bir kesi yapın.
Elektrokoter kullanarak peritoneal açıklığı insizyonun tam uzunluğu boyunca uzatın. Altta yatan iç organları korumak için parmağınızı altına yerleştirmek. Pozlamayı optimize etmek için bir Balfour retraktörü yerleştirin ve ıslak bir havlu kullanarak ince bağırsağa kafatası olarak geri çekin.
Diseksiyonu inferior vena kavada abdominal aort'a doğru taşıyın, ardından lenfatikleri orta ve büyük klipslerle yağlayın. Arka masada, sol ventrikül ventrikül ventrinin yerleştirildiği pulmoner ven sol atriotomi aşıldığında, kanüllere bağlanmanın dokuyu ezmiş olabileceği aort ve pulmoner arterin distal yönünü kesin. İnferior vena kava üzerine bir Satinsky kelepçesi yerleştirin ve 11 numaralı bıçak ve Pott'un makası kullanılarak yaklaşık 1,5 santimetre uzunluğunda uzunlamasına bir venotomi oluşturun.
Anastomoz, pulmoner arter greftini alıcının infrarenal inferior vena kavasına 4-0 polipropilen sütür kullanılarak uçtan uca bir şekilde eğlendirir. Daha sonra aort greftini alıcının infrarenal aortuna 4-0 polipropilen sütür kullanılarak uçtan uca bir şekilde anastomoz yapın. Kalbi dikkatlice sağ retroperitoneal boşluğa yerleştirin, anastomozda gerginliği ve damarların bükülmesini önleyin.
Sonra ince bağırsağı değiştirin. Fasyayı ilmek boyutu sıfır Maxon sütür ile kesinin her iki ucundan başlayarak ve ortada bağlayarak bağırsakta herhangi bir yaralanmayı önleyerek koşu tarzında kapatın. Derin dermal tabakayı 2-0 Vicryl boyutunda koşu tarzında ve cildi 4-0 Monocryl boyutunda koşu tarzında kapatın.
Birkaç farklı perfüzyon parametresi elde edildi. Dolaşım akım hızları pulmoner arter, aort ve koroner arterlerden ölçüldü. Ortalama basınç, sistolik basınç, diyastolik basınç dahil olmak üzere aort basıncı da ölçüldü.
Ex vivo perfüzyon sırasında kardiyak allogreftin kalp hızı ve sıcaklığı da ölçüldü. Perfüzyon döneminde perfüzyondan mikst venöz oksijen satürasyonu ve hematokrit değerleri ölçüldü. İntrabdominal heterotopik kalbin in situ 35 gün yaşayabilirliği, bu protokol kullanılarak başarılı transplantasyona işaret eder.
Hatırlanması gereken en önemli şey, anastomozların gerginlik ve bükülme potansiyelini en aza indirgeyen allogreft için bir yer seçmektir. Bu prosedürü izleyerek, araştırmacı allogreftlere karşı immünolojik yanıtlar üzerindeki etkilerini belirlemek ve ayrıca allogreft üzerindeki terapötik etkinin ömrünü belirlemek için birkaç farklı terapötik tipini test edebilecektir. Bu protokolü geliştirdikten sonra, grubumuz gen dağıtımı için farklı viral vektör araçlarını test edebildi ve ayrıca viral vektörleri kullanarak rejeksiyonun patofizyolojisini ve gen iletiminin etkinliğini anlamak için akut allograf reddi için bir model test edebildi.
