هذا البروتوكول هو الأول الذي يصف كيف يمكن إعطاء العلاجات بفعالية لمجموعة كاملة من الألوغراف القلبي في النموذج الحيواني الكبير لزراعة القلب. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هي أنه يسمح للمحققين باختبار آثار العلاج على مجموعة كاملة من الألوغراف القلبي على مدى فترات طويلة من الزمن بعد الزرع. يمكن استخدام هذه التقنية للتحقيق في التدخلات التي تمنع رفض اللوغراف القلبي ، أو خلل الكسب غير المشروع الأولي ، أو تقليل الحاجة إلى تثبيط المناعة بعد العملية الجراحية أو إطالة عمر اللوغراف القلبي.
يعد تحسين التعرض للعدوى هو الجزء الأكثر تحديا في عملية الزرع ويتطلب عدة أعضاء في الفريق لإكماله. وبالمثل ، هناك حاجة إلى أخصائيي التروية ذوي الخبرة لتنسيق ومراقبة التروية خارج الجسم الحي. للبدء ، قم بعمل شق طوله 20 إلى 30 سم باستخدام الشفرة رقم 10 من manubrium وصولا إلى xiphoid ، اعتمادا على حجم الخنزير.
استخدم الكي الكهربائي لتقسيم الصدر الرئيسي من القص إلى الخناق مع الحرص على الانقسام على طول خط الوسط من القص. بمجرد النزول إلى القص ، سجل خط الوسط وابدأ بضع القص من الخناق عن طريق تقسيمه بمقص ثقيل. ثم قم بتمديد بضع القص بعد كل قطعة.
افصل القلب بصراحة عن القص باستخدام مسحات الأصابع وأكمل عملية استئصال القص من خلال التصنيع. بعد تحسين التعرض للمجال الجراحي باستخدام تراجع قصي ، حدد الغدة الصعترية وأزلها باستخدام الكي الكهربائي عن طريق إدخال التامور طوليا من الحجاب الحاجز إلى الشريان الأورطي وإنشاء مهد التامور باستخدام خيوط الحرير. قسم الأنسجة بالكامل بين الشريان الأورطي والشريان الرئوي وتصور موقع قوس الأبهر والجذع العضدي الرأسي لتسهيل الوضع الصحيح للمشبك المتقاطع الأبهري.
باستخدام المقص والتشريح الحاد ، حرر الوريد الأجوف العلوي محيطيا واربط غرطتين حريريتين بحجم صفر حول الوريد الأجوف العلوي. ضع خياطة البولي بروبيلين بحجم 4-0 على الشريان الأورطي الصاعد بطريقة U-stitch وعلى الأذين الأيمن بطريقة سلسلة محفظة. أدخل قنية جذر الأبهر للأطفال المثبتة بواسطة غرزة U الموضوعة مسبقا.
ثم بعد إزالة بث القنية ، قم بتثبيتها في مكانها باستخدام عاصبة روميل. قم بتوصيل قنية جذر الأبهر بأنبوب شلل القلب بعد أن يتم مسح الأنابيب بشلل القلب ديل نيدو. قم بإنشاء عملية استئصال الأذيان اليمنى داخل سلسلة المحفظة الموضوعة مسبقا.
أدخل قنية وريدية في الأذين الأيمن وقم بتأمينها بعاصبة روميل. قم بتوصيل القنية الوريدية بخط شفط معقم متصل باستئصال القلب الموفر للخلايا وجمع ما يقرب من 1 إلى 1.3 لتر من الدم. ثم قم بتطبيق المشبك المتقاطع الأبهري ، مع التأكد بعناية من أن المشبك يسد الشريان الأورطي الصاعد تماما.
بعد وضع طين ثلجي معقم على القلب ، قم بتقسيم الوريد الأجوف السفلي والعلوي بالقرب من الوريد الأزيغوس. الشريان الأورطي على مستوى القوس بعيد فقط إلى الشريان المرشح والشريان الرئوي الرئيسي عند التشعب. تحديد الأوردة الرئوية وربطها ، ثم إزالة القلب من الصدر ووضعه في وعاء به ثلج معقم.
لإعداد الشريان الأورطي لوضع موصل الأبهر ، ضع أربعة خيوط من البولي بروبيلين بحجم 4-0 في شكل مرتبة أفقية بسيطة حول الجزء الداخلي من الشريان الأورطي البعيد على عمق خمسة ملليمترات تحت الحافة المقطوعة ، ثم اربطها. أثناء رفع خيوط الأبهر المتعهد بها، أدخل موصل الأبهر في الشريان الأورطي واربط شريطا سريا حول الشريان الأورطي لتأمين الموصل. ضع سلسلة محفظة من البولي بروبيلين بحجم 4-0 حول الحافة المقطوعة البعيدة للشريان الرئوي الرئيسي.
أدخل قنية الشريان الرئوي واربط نهايات سلسلة المحفظة لتأمين الكانيولا. ثم قم بتوصيل قنية الشريان الرئوي بموصل الشريان الرئوي الموجود على الجهاز وقم بتثبيته بربطة العنق. خذ الطعم المحضر من الطاولة الخلفية إلى جهاز التروية خارج الجسم الحي وقم بتوصيل موصل الأبهر بمكان الجهاز.
تستنزف فتحة البطين الأيسر من خلال الوريد الرئوي غير المقيد إلى الأذين الأيسر وعبر الصمام التاجي إلى البطين الأيسر. باستخدام الشفرة رقم 10 ، قم بعمل شق جلدي بطول 20 إلى 30 سم ثم استمر في التشريح وصولا إلى اللفافة باستخدام الكي الكهربائي. بعد رفع اللفافة والصفاق باستخدام اثنين من مشابك Kocher ، قم بعمل شق صغير بعناية في التجويف البريتوني باستخدام مقص Metzenbum.
قم بتمديد الفتحة البريتونية لكامل طول الشق باستخدام الكي الكهربائي. وضع إصبع تحته لحماية الأحشاء الأساسية. ضع منسحبا من بلفور لتحسين التعرض والتراجع إلى الأمعاء الدقيقة في الجمجمة باستخدام منشفة مبللة.
احمل التشريح إلى الشريان الأورطي البطني في الوريد الأجوف السفلي ، ثم قم بربط اللمفاويات بمقاطع متوسطة وكبيرة. على الطاولة الخلفية ، عندما يكون الوريد الرئوي الأيسر لاستئصال الأذن حيث تم إدخال فتحة البطين الأيسر مخيطا ، قم بتقليم الجانب البعيد من الشريان الأورطي والشريان الرئوي حيث قد يكون الارتباط بالقنية قد سحق الأنسجة. ضع مشبك ساتينسكي على الوريد الأجوف السفلي وقم بإنشاء بضع الوريد الطولي بقياس حوالي 1.5 سم باستخدام الشفرة رقم 11 ومقص بوت.
مفاغرة طعم الشريان الرئوي إلى الوريد الأجوف السفلي الرقيق للمتلقي بطريقة شاملة إلى جانبية باستخدام خياطة البولي بروبيلين بحجم 4-0. ثم مفاغرة طعم الشريان الأورطي إلى الشريان الأورطي اللدود للمستلم بطريقة شاملة إلى جانبية باستخدام خياطة البولي بروبيلين بحجم 4-0. ضع القلب بعناية في الفضاء خلف الصفاق الأيمن ، مما يمنع التوتر على المفاغرة وتحريك الأوعية.
ثم استبدال الأمعاء الصغيرة. أغلق اللفافة بخيط ماكسون بحجم حلقة صفر بطريقة الجري بدءا من طرفي الشق والربط في الوسط ، وتجنب أي إصابة في الأمعاء. أغلق طبقة الجلد العميقة بحجم 2-0 Vicryl بطريقة الجري والجلد بحجم 4-0 Monocryl بطريقة جارية.
تم الحصول على العديد من معلمات التروية المختلفة. تم قياس معدلات تدفق الدورة الدموية من الشريان الرئوي والشريان الأورطي والشرايين التاجية. كما تم قياس الضغط الأبهري بما في ذلك متوسط الضغط والضغط الانقباضي والضغط الانبساطي.
أثناء التروية خارج الجسم الحي ، تم أيضا قياس معدل ضربات القلب ودرجة حرارة اللوغراف القلبي. خلال فترة التروية ، تم قياس تشبع الأكسجين الوريدي المختلط وقيم الهيماتوكريت من البيرفوسات. تشير صلاحية القلب غير المتجانس داخل البدومين في الموقع لمدة 35 يوما إلى نجاح عملية الزرع باستخدام هذا البروتوكول.
أهم شيء يجب تذكره هو اختيار موقع للوغراف يقلل من احتمال التوتر والالتفاف في المفاغرة. من خلال اتباع هذا الإجراء ، سيتمكن الباحث من اختبار عدة أنواع مختلفة من العلاجات لتحديد آثارها على الاستجابات المناعية ضد allograft ، وكذلك تحديد طول عمر تأثير العلاجات على allograft. بعد تطوير هذا البروتوكول ، تمكنت مجموعتنا من اختبار مركبات ناقلات فيروسية مختلفة لتوصيل الجينات ، بالإضافة إلى نموذج لرفض الوغراف الحاد لفهم الفيزيولوجيا المرضية للرفض وفعالية توصيل الجينات باستخدام النواقل الفيروسية.
