小型猪载体上 RPE 的视网膜下植入：术前准备、手术技术和术后护理指南

年龄相关性黄斑变性被认为是中央视力丧失的主要原因之一。RPE层的进行性退化和功能障碍是AMD早期形式的标志。尽管视网膜疾病的治疗取得了进展，但开发有效的治疗方式仍然具有挑战性。

最有前途的治疗概念之一是用不同来源的体外培养的RPE细胞替换RPE。RPE通常以细胞悬液，自支撑细胞片或由人工载体支撑的细胞单层的形式输送到视网膜下空间。两种晚期方法的主要优点是植入后，细胞在视网膜下空间中处于分化的单层状态。

在体内进行的临床前动物研究旨在在大型眼科动物模型上建立可重复和安全的外科手术，以获得可能对人类有用且可能适用的数据。通过该协议，我们旨在报告用于大型动物模型中细胞载体体内视网膜下植入的视网膜下手术技术的原理，该技术可用于植入不同类型细胞和细胞载体的体内实验研究。通过这段视频，我们想介绍在Libechov迷你猪眼中细胞载体视网膜下植入手术程序的分步方案。

插入盖子窥器。在距角膜缘两到三毫米处打开鼻侧的结膜，以暴露巩膜进行菌核切除术。将三个 25 号穿刺器插入距角缘 3 毫米处的扁平区域。

在整个手术过程中保持角膜湿润，或涂上甲基纤维素，以防止渗透性角膜水肿。用标准的三端口扁平部玻璃体切除术切除玻璃体的中间部分。小心地去除晶状体后面的玻璃体在未来大硬化切开术区域。

使用玻璃体内曲安奈德注射液对玻璃体后部进行染色，玻璃体后部通常仍粘附在视网膜上，以便进行受控的玻璃体后脱离。之后，用41号套管更中心缓慢地进行BSS的视网膜下注射，避免向外围形成泡。在视网膜下注射期间，将冲洗系统的眼内压设置降低到15毫米汞柱，以防止短暂的视网膜血管阻塞。

在鼻泡基部附近使用27号内渗热探头进行视网膜的线性大内窥镜。之后，使用 25 号的 MVR 刀片或垂直剪刀将冲洗系统的眼内压设置升高至 60 毫米汞柱进行 3 毫米大的视网膜切开术，持续 3 到 5 分钟。然后使用2.75毫米的phaco刀在距离角膜缘3毫米处进行3毫米大的硬骨切开术。

注意大硬化切开术内巩膜血管和睫状体可能出血的外渗热。用玻璃体切除大硬体切开术一侧脱垂的玻璃体。然后用占主导地位的手轻轻地将注射器通过大硬膜切开术插入玻璃体腔。

通过视网膜切开术将细胞载体植入视网膜下空间。从眼睛中取出注射器，并以 8-0 关闭大硬化术Vicryl缝合以避免与眼内张力低下相关的并发症。与硅胶尖端套管进行完整的流体-空气交换。

之后，将硅油注入玻璃体腔，直到眼内压正常。手术结束时，取出穿刺器，并以8-0关闭三个菌核切除术和结膜维克林缝合线。有关更多详细信息，请参阅外科手术部分。

清洁眼周区域。使用镊子和剪刀去除上下眼睑。取下第三眼睑。

切开结膜。用剪刀剪断眼部肌肉。从表面到深度进行圆形切割。

切断视神经。将眼睛从眼眶上移开。充满硅油的玻璃体腔的清晰度使人们可以在术后的任何时间点用视网膜下细胞载体可视化视网膜的状况。

无红色图像显示细胞载体框架内培养的人RPE细胞的反射率与本地猪RPE层的反射率没有区别。体内OCT成像显示，植入视网膜下空间的细胞载体不会显着增加整个视网膜厚度。布鲁赫的膜似乎也没有受损。

细胞载体的框架仅导致OCT信号的轻微阴影。视网膜死后冷冻切片的组织学研究表明，在植入的原代人RPE区域形成了连续和不规则的色素细胞层，这证明了培养在细胞载体细胞上的存活。组织切片的免疫组织化学分析显示了存在于植入区域中的人RPE细胞，并表达类似于本地迷你猪RPE细胞的典型RPE标志物。

尽管如此，植入的RPE细胞不会显示为细胞单层。尽管如此，这些细胞仍位于定义的视网膜下空间内。迷你猪的大眼动物模型，在这种情况下，Libechov 迷你猪，我们认为是未来应用新概念治疗退行性视网膜疾病的最合适的模型之一，因为它们与人眼解剖学和生理学相似。

这些相似性允许开发用于细胞载体视网膜下植入的手术技术和仪器，并且该技术可以很容易地转移到治疗人眼疾病。重要的是要确保对迷你猪的手术使用相同的仪器进行，包括植入输送工具，这些工具也将用于人类手术，从而使获得的经验和专有技术毫无困难地应用于人类。术前手术和术后护理程序的详细描述可以通过提高高效和标准化的数据生成来帮助未来的研究。