加齢黄斑変性症は、中心視力喪失の主な原因の1つと考えられています。RPE層の進行性の変性と機能不全は、AMDの初期形態の特徴です。網膜疾患の治療が進歩しているにもかかわらず、効果的な治療法の開発は依然として困難です。

最も有望な治療コンセプトの1つは、異なる起源のin vitro培養RPE細胞によるRPEの置換です。RPEは通常、細胞懸濁液、自立性細胞シート、または人工担体によって支持された細胞単層の形態で網膜下腔に送達されている。2つの後期方法の主な利点は、移植後、細胞が網膜下腔において分化した単層状態で見出されることである。

in vivoで実施される前臨床動物試験は、ヒトに有用で潜在的に適用できる可能性のあるデータを得るために、大眼動物モデルで再現性のある安全な外科的処置を確立することを目的としています。このプロトコルにより、さまざまな種類の細胞や細胞キャリアの移植を伴うin vivo実験研究に使用できる大型動物モデルにおける細胞キャリアのin vivo網膜下移植に使用される網膜下手術技術の原理を報告することを目指しています。このビデオでは、Libechovミニブタの目に細胞キャリアの網膜下移植の外科的処置の段階的なプロトコルを提示したいと思います。

蓋の検鏡を挿入します。強膜を硬化のために露出させるために、辺縁部から2〜3ミリメートルの鼻側の結膜を開きます。リンバスから3ミリメートル離れた3つの25ゲージトロカールを、平面の領域に挿入します。

角膜を湿らせておくか、浸透圧性角膜浮腫を防ぐために、手術中はメチルセルロースでコーティングしてください。標準的な3ポートパープラナ硝子体切除アプローチで硝子体の中央部分を取り除きます。将来の大硬化切開術の領域でレンズの後ろの硝子体を慎重に取り除きます。

硝子体内トリアムシノロンアセトニド注射を使用して、制御された後部硝子体剥離を行うために通常は網膜に付着したままである後部硝子体を染色します。.その後、41ゲージのカニューレでBSSの網膜下注射をより中央にゆっくりと行い、末梢へのブレブの形成を避けます。一過性の網膜血管閉塞を防ぐために、網膜下注射中に灌漑システムの眼圧設定を15ミリメートル水銀柱に下げます。.

鼻ブレブ基部近くの27ゲージのエンドジアテルミープローブを使用して、網膜の線形の大きなエンドジアテルミーを実行します。その後、25ゲージのMVRブレードを使用して3ミリメートルの大きな網膜切開術を行うか、灌漑システムの眼圧を最大60ミリメートル水銀柱まで3〜5分間上昇させた垂直ハサミを行います。次に、2.75ミリメートルのファコナイフを使用して、リンバスから3ミリメートルの3ミリメートルの大きな硬化切開を行います。

大硬化切開術内の強膜血管および毛様体の出血の可能性の外ジアテルミーに注意を払う。硝子体で大きな強膜切開の側面にある脱出した硝子体を取り除きます。次に、支配的な手でインジェクターを大きな強膜切開術を通して硝子体腔にそっと挿入します。

網膜切開術を通して細胞キャリアを網膜下腔に移植する。インジェクターを目から引き出し、8-0で大硬化切開を閉じます眼内低張に関連する合併症を回避するためのVicryl縫合糸。先端がシリコンのカニューレで完全な流体と空気の交換を行います。

その後、眼圧が正常になるまでシリコーンオイルを硝子体腔に注入します。手術の最後に、トロカールを取り除き、3つの硬化切開と結膜を8-0で閉じますビクリル縫合糸。詳細については、外科的処置のセクションを参照してください。

眼周囲を清掃します。鉗子とはさみを使用して、上まぶたと下まぶたを取り除きます。3番目のまぶたを取り外します。

結膜を切ります。ハサミで目の筋肉を切ります。表面から深さまで円形に切断を進めます。

視神経を切断します。眼窩から目を取り除きます。シリコーンオイルで満たされた硝子体腔の明瞭さは、術後の期間の任意の時点で網膜下細胞キャリアを有する網膜の状態を視覚化することを可能にする。

赤くない画像は、細胞キャリアフレーム内で培養されたヒトRPE細胞の反射率が、固有のブタRPE層の反射率と変わらないことを示しています。in vivoOCTイメージングは、網膜下腔に移植された細胞キャリアが網膜全体の厚さを有意に増加させないことを示しています。ブルッフの膜も損傷を受けていないようです。

セルキャリアのフレームは、OCT信号のわずかなシャドウイングのみを引き起こします。網膜の死後凍結切片の組織学的研究は、移植された初代ヒトRPEの領域における連続的で不規則な色素沈着細胞層の形成を示し、これは細胞キャリア細胞上で培養された細胞の生存を証明している。組織切片の免疫組織化学的分析は、移植の領域に存在し、固有のミニブタRPE細胞と同様の典型的なRPEマーカーを発現するヒトRPE細胞を示しています。

それにもかかわらず、移植されたRPE細胞は細胞単層として現れません。それでも、これらの細胞は定義された網膜下腔内に位置しています。ミニブタの大きな目の動物モデル、この場合はLibechovミニブタは、人間の目の解剖学と生理学との類似性のために、変性網膜疾患の治療のための新しい概念の将来の適用のための最も適切なモデルの1つであると考えています。

これらの類似性は、細胞キャリアの網膜下移植のための外科的技術と器具を開発することを可能にし、この技術はヒトの眼疾患の治療に容易に移転することができる。ミニブタの手術は、人間の手術でも利用される着床送達ツールを含め、同じ器具で行われ、得られた経験とノウハウを人間に問題なく適用できるようにすることが重要です。術前および術後のケア手順の詳細な説明は、効率的で標準化されたデータ生成を増やすことにより、将来の研究に役立つ可能性があります。