菌根图谱作为探索红费斯图卡和玉米根部定植模式和真菌策略的工具

MycoPatt方法允许深入探索根系丛枝菌根定植。菌根图指向真菌扩张，并将每个结构的真实位置呈现为特定模式。以1%的分辨率客观分析菌根定植。

每个根段都自动转换为数字矩阵，并生成一个广泛的定植参数数据库。首先，从冰箱中取出根部并将它们放在工作平台上以在室温下解冻。要进行根部清理，请将一株植物的所有根放入 30 至 50 毫升的罐子中，然后用自来水准备 10% 氢氧化钠溶液并将其倒入罐中，直到完全覆盖根部。

用力摇晃罐子一到两分钟，使清除溶液均匀分散在根部。让根在澄清溶液中保留 48 小时。对于根冲洗，将罐子的内容物通过筛子。

用自来水冲洗根部几次，直到完全去除清除溶液。接下来，将冲洗过的根放入干净的罐子中进行染色。然后用自来水准备百分之五到百分之五的墨水醋溶液。

将其倒入罐中，直到覆盖根部并摇晃一到两分钟。部分脱色 48 小时后，用自来水冲洗染色的根部一到两分钟。用力摇晃罐子以去除多余的染色溶液。

重复该过程，直到根部清除以进行显微镜评估。对于根分割，将染色的根放在有比例的砧板上。将根切成一厘米的段。

为每个款式/规格选择 15 个细分。接下来，将根部铺在载玻片上进行分段准备，使用层压袋覆盖根部并从边缘开始轻轻压碎它们。使用软塑料工具在幻灯片上显示根部。

小心地取出层压袋，并用盖玻片盖住样品。用移液管将水添加到载玻片的一角，让水慢慢扩散到载玻片上。用纸巾擦去多余的水。

对于显微分析，请使用配备良好分辨率相机的显微镜。从四肢开始分析幻灯片。捕获每个微观场。

粗根使用 10 或 40 倍放大倍率，细根使用 40 倍放大倍率。捕获后，使用允许根部分的真正后组装的代码重命名每个图像。使用演示软件设计用于图像组合的绘图板，将宽度设置为比图像宽度宽两到三厘米。

捕获 15 张照片后，按捕获顺序（从 1 到 15）将一个段中的所有捕获图像相加，并重建根段的整个长度。接下来，使用垂直对齐将图像对齐到中心，并确保每个图像都遵循前一个图像。在所有图片上放置一个 10 x 150 个单元格的网格以覆盖整个根段。

此外，在每张图片上和此网格的每个单元格中放置一个 10 x 10 的网格，如果可见丛枝菌根或 AM 结构，则插入一个从 1 到 6 的数字，如果没有 AM 结构，则留空。为宽度为 10 个单元格、长度为 150 个单元格的网格添加一个表格。将带有尺寸的表格更改为图像的宽度，然后更改表格的长度以包含所有图像。

要对菌根定植进行评分，请使用唯一编号对每种类型的结构进行评分，如菌根模式方法中所述。菌丝用一个，丛枝用两个，囊泡用三个，孢子用四个，辅助细胞用五个，入口点用六个。对先前应用的网格的每个单元格的每个观察到的菌根结构进行评分。

评分后，将所有获得的分数插入MycoPatt电子表格。使用复制粘贴功能将所有分数从演示文稿传输到名为“原始数据”的第一张工作表中。对于主要分析，请使用名为“参数”的第三个工作表以三种形式分别以百分比形式将结果可视化。

使用 A 到 K 列分析定植的水平图像，使用 M 到 W 列分析定植的垂直图像，使用 Y 到 AI 列分析 15 个 10 x 10 方块中每个方块的横向定植和最终平均定植。接下来，应用特定于每个参数的定义和公式。对于菌根图的生成和提取，请在名为 Graph 的第二张工作表中可视化通过菌根结构代码转换为颜色获得的图像。

然后将图表中的结果图像导出为图像，并使用图例中的颜色代码分析菌根模式。对于菌根图谱分析，请确定最重要的结构及其组合。然后描述在分析的根中观察到的菌根定植模式，然后根据观察到的根结构发育、分支模式和丛枝囊泡发育的定植策略。

该协议提供了菌根结构的详细信息，菌根结构和根细胞之间的良好对比，用于Zea mays和Festal rubra。不成功的清除和染色程序导致红节和Zea mays中菌根结构的显微图像不清晰。菌根定植模式允许对定植机制进行完整的探索，该方法为Zea mays和Festuca rubra的定植模式和策略提供了深入，小规模的探索，并增加了定植参数的视觉表达。

在Zea中，观察到根据植物的发育阶段高度波动的定植潜力，然而，在Festuca rubra中，定植过程发生在根部内部，菌丝网络的发育与根的低发育速度相关。MycoPatt适用于绘制任何植物丛枝菌根定植的图谱。充分探索定植机制和评估沿根的真菌策略也是有帮助的。