大鼠背部机械敏感性评估用于慢性背痛的机制研究

该协议可用于测试背部的机械灵敏度。对于慢性背痛大鼠模型中的纵向设计特别有趣，其目标是检查干预措施的有效性，以降低对有害刺激的背部敏感性。该方法简单易用，并且在训练有素的实验人员中产生可重复的结果。

它主要基于冯弗雷测试，该测试通常用于评估后爪的机械敏感性。至于任何其他行为测试，实验者应该练习标准化细丝的应用，直到机械刺激产生的行为很容易与其他行为区分开来。测试很简单，否则，使用它应该没有大的困难。

演示该程序的将是我实验室的博士生Nasim Eskandari。为了引起大鼠的慢性背痛，将完全弗氏佐剂或CFA肌内注射到背部肌肉中。使用 27 号针头，单侧或双侧将 150 微升即用型油包油中 CFA 乳液注射到椎旁肌肉中。

将针头固定到位至少三分钟。接下来，通过将两个连续的室安装在四个 33 厘米长的有机玻璃腿上，为两只动物制造一个测试笼，包括每只动物的一个腔室。使用透明有机玻璃作为房间的墙壁，并使用黑色有机玻璃分隔房间以防止动物看到彼此。

然后使用由一毫米线制成的不锈钢网制作测试笼的地板和天花板，线间距离为八毫米。在第一次测试之前，每天让大鼠熟悉测试笼30分钟，连续五到七天。在异氟醚麻醉下的俯卧位，使用动物毛发修剪器在大约 10 个椎体水平上剃掉感兴趣区域的后毛。

对于重复措施，每三天剃一次背毛，无需行为评估，以确保刺激始终直接施加在皮肤上。用永久性记号笔在皮肤上画一个标记，以确保在不同日期重复测试时始终将细丝应用于同一区域。在测试当天，在测试前将大鼠放入测试笼中 15 到 30 分钟，直到大鼠平静下来。

然后垂直于背面涂抹冯弗雷细丝，始终从两克长丝开始并使用向上/向下方法。当大鼠清醒时，用四只爪子站立并且不动时，每15至30秒将细丝双向施加到距脊柱10毫米的感兴趣区域两秒钟。如果在施加灯丝时没有观察到响应，请以更大的力施加系列中的下一根灯丝。

如果观察到积极的反应，例如拱背、舔舐、肌肉抽搐、远离细丝或旋转，请使用系列中力较小的下一根细丝。继续该过程，直到在第一次行为改变后获得四个读数。在这项研究中，研究了CFA和对照大鼠之间的背部机械敏感性。

在基线时，两组之间的机械敏感性相似。在腰肌中肌内注射CFA导致机械敏感性从7天显着增加到28天。相比之下，对照大鼠没有表现出任何显着的变化。

此外，组织学检查证实注射CFA的肌肉中存在慢性炎症变化，白细胞浸润清晰。肌内注射生理盐水后来自受控大鼠的健康背部肌肉作为参考。除了背部肌肉外，还通过标准冯弗雷测试在后爪观察到机械超敏反应。

确保灯丝始终以垂直于背部的相同方式施加非常重要，并且在应用时动物不会移动。实验者还应该有信心区分现代运动的行为反应。