Este protocolo é útil para testar a sensibilidade mecânica no dorso. É particularmente interessante para desenhos longitudinais em modelos de ratos com dor lombar crônica, para os quais o objetivo é examinar a eficácia de uma intervenção para diminuir a sensibilidade das costas a estímulos nocivos. O método é simples, acessível e produz resultados reprodutíveis em experimentadores treinados.
É amplamente baseado no teste de Von Frey, que é comumente usado para avaliar a sensibilidade mecânica na pata traseira. Como para qualquer outro teste comportamental, os experimentadores devem praticar a padronização da aplicação dos filamentos, e até que os comportamentos produzidos por estímulos mecânicos sejam facilmente distinguidos de outros comportamentos. O teste é simples, caso contrário, e não deve haver grande dificuldade para usá-lo.
Demonstrando o procedimento estará Nasim Eskandari, um estudante de doutorado do meu laboratório. Para induzir dor lombar crônica no rato, realize uma injeção intramuscular de Adjuvante de Freund Completo, ou CFA, nos músculos das costas. Usando uma agulha de calibre 27, injete 150 microlitros de uma emulsão de água em óleo pronta para uso de CFA nos músculos paraespinhais unilateral ou bilateralmente.
Mantenha a agulha no lugar por pelo menos três minutos. Em seguida, fabrice a gaiola de teste para dois animais, compreendendo uma câmara para cada animal, montando as duas câmaras contíguas em quatro pernas de plexiglass de 33 centímetros de comprimento. Use plexiglass transparente para as paredes das câmaras e plexiglass preto para separar as câmaras para evitar que os animais se vejam.
Em seguida, faça o chão e o teto da gaiola de teste usando malha de aço inoxidável feita de fio de um milímetro com uma distância inter-fio de oito milímetros. Familiarizar o rato com a gaiola de teste por 30 minutos por dia durante cinco a sete dias consecutivos antes do primeiro teste. Em decúbito ventral sob anestesia com isoflurano, raspe os pelos das costas na área de interesse em aproximadamente 10 níveis vertebrais usando um aparador de pelos de animais.
Para medidas repetidas, raspe os pelos das costas a cada três dias sem avaliação comportamental para garantir que os estímulos sejam sempre aplicados diretamente na pele. Desenhe uma marca na pele com um marcador permanente para garantir que os filamentos sejam sempre aplicados na mesma área ao repetir o teste em dias diferentes. No dia do teste, colocar o rato na gaiola de teste por 15 a 30 minutos antes do teste até que o rato esteja calmo.
Em seguida, aplique filamentos de Von Frey perpendicularmente ao dorso, sempre começando com o filamento de dois gramas e usando o método up/down. Aplicar o filamento por dois segundos bilateralmente na área de interesse a 10 milímetros da coluna vertebral é processado a cada 15 a 30 segundos quando o rato está acordado, em pé sobre suas quatro patas, e não se movendo. Se não for observada resposta com a aplicação de um filamento, aplique o filamento seguinte com uma força mais elevada na série.
Se uma resposta positiva, como arquear as costas, lamber, espasmos musculares, afastar-se do filamento ou rotação, usar o próximo filamento com uma força menor na série. Continue o procedimento até que quatro leituras sejam obtidas após a primeira mudança de comportamento. Neste estudo, a sensibilidade mecânica das costas entre CFA e ratos controle foi investigada.
No início do estudo, a sensibilidade mecânica foi semelhante entre os grupos. A injeção intramuscular de CFA nos músculos lombares causou um aumento acentuado da sensibilidade mecânica de sete para 28 dias. Em contraste, os ratos controle não mostraram nenhuma mudança significativa.
Além disso, o exame histológico confirmou a presença de alterações inflamatórias crônicas nos músculos injetados com CFA com uma clara infiltração leucocitária. Músculos das costas saudáveis de um rato controlado após a injeção intramuscular de solução salina são mostrados como uma referência. A hipersensibilidade mecânica foi observada na pata traseira com teste de Von Frey padrão, além dos músculos das costas.
É muito importante certificar-se de que o filamento é sempre aplicado da mesma forma perpendicularmente ao dorso, e que o animal não está se movendo ao aplicá-lo. O experimentador também deve sentir confiança em distinguir respostas comportamentais para movimentos modernos.
