Ce protocole est utile pour tester la sensibilité mécanique dans le dos. Il est particulièrement intéressant pour les conceptions longitudinales dans des modèles de maux de dos chroniques chez le rat, pour lesquels l’objectif est d’examiner l’efficacité d’une intervention visant à diminuer la sensibilité du dos aux stimuli nocifs. La méthode est simple, accessible et donne des résultats reproductibles chez des expérimentateurs formés.
Il est largement basé sur le test de Von Frey, qui est couramment utilisé pour évaluer la sensibilité mécanique à la patte postérieure. Comme pour tout autre test comportemental, les expérimentateurs devraient s’entraîner à standardiser l’application des filaments, et jusqu’à ce que les comportements produits par les stimuli mécaniques soient facilement distingués des autres comportements. Le test est simple, sinon, et il ne devrait pas y avoir de difficulté majeure à l’utiliser.
La démonstration de la procédure sera assurée par Nasim Eskandari, un doctorant de mon laboratoire. Pour induire des maux de dos chroniques chez le rat, effectuez une injection intramusculaire de l’adjuvant de Freund complet, ou CFA, dans les muscles du dos. À l’aide d’une aiguille de calibre 27, injecter 150 microlitres d’une émulsion eau-dans-huile prête à l’emploi de CFA dans les muscles paraspinaux unilatéralement ou bilatéralement.
Gardez l’aiguille en place pendant au moins trois minutes. Ensuite, fabriquez la cage d’essai pour deux animaux, comprenant une chambre pour chaque animal en montant les deux chambres contiguës sur quatre pattes en plexiglas de 33 centimètres de long. Utilisez du plexiglas transparent pour les parois des chambres et du plexiglas noir pour séparer les chambres afin d’empêcher les animaux de se voir.
Ensuite, faites le sol et le plafond de la cage d’essai en utilisant un treillis en acier inoxydable fait d’un fil d’un millimètre avec une distance entre fils de huit millimètres. Familiarisez le rat avec la cage d’essai pendant 30 minutes par jour pendant cinq à sept jours consécutifs avant le premier test. En position couchée sur le ventre sous anesthésie à l’isoflurane, rasez les poils du dos dans la zone d’intérêt sur environ 10 niveaux vertébraux à l’aide d’une tondeuse à poils d’animaux.
Pour des mesures répétées, rasez les poils du dos tous les trois jours sans évaluation comportementale pour vous assurer que les stimuli sont toujours appliqués directement sur la peau. Dessinez une marque sur la peau avec un marqueur permanent pour vous assurer que les filaments sont toujours appliqués sur la même zone lorsque vous répétez le test à des jours différents. Le jour du test, placez le rat dans la cage d’essai pendant 15 à 30 minutes avant le test jusqu’à ce que le rat soit calme.
Appliquez ensuite les filaments de Von Frey perpendiculairement à l’arrière, en commençant toujours par le filament de deux grammes et en utilisant la méthode haut/bas. Appliquer le filament pendant deux secondes bilatéralement sur la zone d’intérêt à 10 millimètres de la colonne vertébrale est traité toutes les 15 à 30 secondes lorsque le rat est éveillé, debout sur ses quatre pattes et ne bouge pas. Si aucune réponse n’est observée avec l’application d’un filament, appliquer le filament suivant avec une force plus élevée dans la série.
Si une réponse positive telle qu’une cambrure du dos, un léchage, des contractions musculaires, un éloignement du filament ou une rotation est observée, utilisez le filament suivant avec une force plus faible dans la série. Continuez la procédure jusqu’à ce que quatre lectures soient obtenues après le premier changement de comportement. Dans cette étude, la sensibilité mécanique dorsale entre le CFA et les rats témoins a été étudiée.
Au départ, la sensibilité mécanique était similaire entre les groupes. L’injection intramusculaire de CFA dans les muscles lombaires a provoqué une augmentation marquée de la sensibilité mécanique de sept à 28 jours. En revanche, les rats témoins n’ont montré aucun changement significatif.
En outre, l’examen histologique a confirmé la présence de changements inflammatoires chroniques dans les muscles injectés avec CFA avec une infiltration leucocytaire claire. Les muscles sains du dos d’un rat contrôlé après injection intramusculaire de solution saline sont présentés comme référence. L’hypersensibilité mécanique a été observée à la patte postérieure avec un test de Von Frey standard, en plus des muscles du dos.
Il est très important de s’assurer que le filament est toujours appliqué de la même manière perpendiculairement au dos et que l’animal ne bouge pas lors de son application. L’expérimentateur doit également se sentir confiant dans la distinction des réponses comportementales pour les mouvements modernes.
