尿激酶型纤溶酶原激活剂诱导的小鼠背痛模型

该协议概述了一种非侵入性方法，可在小鼠中诱导长达10周的慢性背痛，只需最少的训练即可快速可靠地进行。这种技术最困难的方面是识别注射韧带与注射肌肉的感觉。接触时感觉阻力表明韧带注射。

没有阻力意味着针头可能在肌肉或腹腔中。首先，取一个无菌的平面放置鼠标。然后，在手术装置旁边放置一个加热垫恢复站，以在注射后立即转移小鼠。

接下来，准备尿激酶和汉密尔顿注射器。事先绘制溶液，以尽量减少小鼠在麻醉下花费的时间。麻醉小鼠后，用两根手指定位肋骨下方L2和L3处的腰椎节段，并验证注射部位。

将汉密尔顿注射器的尖端放在脊柱旁边。将注射器以大约 45 度角放置在紧邻骨骼的韧带中。轻轻但牢固地将针尖插入韧带，然后缓慢注射，直到注射完所有 5 微升。

轻轻缓慢地取出针头。然后，将鼠标放入热回收站中，直到它醒来并变得移动。手术后检查小鼠一小时，以确保所有正常的运动功能继续。

手术后，每天检查小鼠的体重和注射部位，持续一周，以防止任何感染或并发症。在测试之前，将每只动物移动到测试台上带有屏幕顶部的单独透明隔间中。然后，用 3.61 Von Frey 细丝刺激脚垫，该细丝可产生 4 克的力。

足部退缩三到五次刺激被认为是积极的反应。现在，应用该系列中下一个较弱的细丝，直到动物停止对机械刺激做出反应。使用较高的灯丝，直到引起反应，然后切换回较低的灯丝。

使用曲线拟合算法，计算机械撤回阈值，即在 50% 的时间内引起响应所需的最小力。要进行Hargreaves测试，请将小鼠放在由红外发射器从下方加热的玻璃表面上的隔间中。测量从对小鼠后爪施加红外光刺激到退出作为脚潜伏期的时间。

对于冷板测试，将小鼠放在冷却至零下9摄氏度的冷板设备上。记录鼠标在放置在设备上后抬起脚所需的时间，作为撤回脚的延迟。要进行焦虑测试，请将每只动物放入位置偏好测试箱中，并在两个腔室之间留有通道。

一个器械室应明亮，而另一侧应保持黑暗。在10分钟的测试中，使用计算机监控动物的明暗占用时间和过渡。接下来，将模型啮齿动物或幼稚动物放在零迷宫上，或使用两室明暗场所偏好测试。

使用秒表评估在迷宫的封闭和开放区域花费的时间。对于蔗糖飞溅抑郁测试，在背侧喷洒 10% 至 30% 的蔗糖溶液，并对梳理的频率、持续时间和潜伏期进行评分，持续 10 分钟。为了进行新的物体测试，将小鼠单独安置在一个带有敞开顶部的透明塑料笼子中一小时。

在笼子的相对角上添加两个相同的玩具迷你人偶，持续五分钟。在测试当天让动物适应一小时，并将两个相同的迷你人偶放在笼子的相同位置五分钟，然后将它们放回家中笼子。然后，用一个明显不同的新奇对象替换其中一个原始人物。

四小时后，将小鼠放回测试笼中，并记录探索物体所花费的时间。对于运动功能评估，用在一侧纵向切割的纸巾管构建一个隧道。在一张干净的打印纸上铺开隧道。

轻轻地握住老鼠，直到它们平静下来。将无毒的印度墨水涂在老鼠的爪子上，方法是将它们放入墨水池、印章垫或使用棉签。在隧道入口处释放老鼠。

让他们穿过隧道并在最后抓住他们。根据步幅、步幅和脚趾张开对爪印进行评分。机械和热超敏反应试验表明，与幼稚对照组相比，慢性背痛小鼠的机械、热和冷敏感性显着增加。

焦虑分析显示，慢性背痛小鼠在光暗盒光室中花费的总时间和饲养事件次数明显降低，表明焦虑。在蔗糖飞溅试验期间，患有慢性背痛的小鼠表现出较低的梳理时间和梳理次数。然而，梳理开始前的时间显着增加。

患有慢性背痛的小鼠和幼稚的小鼠之间的步幅显着不同。尝试此程序时要记住的最重要的事情是，您的目标是脊柱周围的韧带，而不是肌肉。慢性背痛模型为评估各种新研究、药理学和其他潜在疗法提供了可靠的工具。