هذا البروتوكول مفيد لاختبار الحساسية الميكانيكية في الظهر. ومن المثير للاهتمام بشكل خاص للتصاميم الطولية في نماذج الفئران من آلام الظهر المزمنة ، والتي الهدف منها هو فحص فعالية التدخل لتقليل حساسية الظهر للمنبهات الضارة. الطريقة بسيطة ويمكن الوصول إليها وتنتج نتائج قابلة للتكرار في المجربين المدربين.
يعتمد إلى حد كبير على اختبار Von Frey ، والذي يستخدم عادة لتقييم الحساسية الميكانيكية في المخلب الخلفي. كما هو الحال بالنسبة لأي اختبار سلوكي آخر ، يجب على المجربين التدرب على توحيد تطبيق الخيوط ، وحتى يتم تمييز السلوكيات الناتجة عن المحفزات الميكانيكية بسهولة عن السلوكيات الأخرى. الاختبار بسيط ، وإلا ، ويجب ألا تكون هناك صعوبة كبيرة في استخدامه.
سيوضح الإجراء نسيم اسكندري ، طالب دكتوراه من مختبري. للحث على آلام الظهر المزمنة في الفئران ، قم بإجراء الحقن العضلي لمساعد فرويند الكامل ، أو CFA ، في عضلات الظهر. باستخدام إبرة قياس 27 ، قم بحقن 150 ميكرولتر من مستحلب الماء في الزيت الجاهز للاستخدام من CFA في العضلات المجاورة للعمود الفقري من جانب واحد أو ثنائي.
احتفظ بالإبرة في مكانها لمدة ثلاث دقائق على الأقل. بعد ذلك ، قم بتصنيع قفص الاختبار لحيوانين ، يتألف من غرفة واحدة لكل عن طريق تركيب الغرفتين المتجاورة على أربعة أرجل زجاجية بطول 33 سم. استخدم زجاج شبكي شفاف لجدران الغرف ، وزجاج شبكي أسود لفصل الغرف لمنع الحيوانات من رؤية بعضها البعض.
ثم اصنع أرضية وسقف قفص الاختبار باستخدام شبكة من الفولاذ المقاوم للصدأ مصنوعة من سلك ملليمتر واحد بمسافة ثمانية ملليمترات بين الأسلاك. تعرف الفئران على قفص الاختبار لمدة 30 دقيقة يوميا لمدة خمسة إلى سبعة أيام متتالية قبل الاختبار الأول. في وضعية الانبطاح تحت تخدير الأيزوفلوران ، احلق شعر الظهر في منطقة الاهتمام على مدار 10 مستويات فقرية تقريبا باستخدام أداة تشذيب شعر الحيوانات.
للتدابير المتكررة ، احلق شعر الظهر كل ثلاثة أيام دون تقييم سلوكي لضمان تطبيق المحفزات دائما مباشرة على الجلد. ارسم علامة على الجلد بعلامة دائمة للتأكد من أن الشعيرات يتم تطبيقها دائما على نفس المنطقة عند تكرار الاختبار في أيام مختلفة. في يوم الاختبار ، ضع الجرذ في قفص الاختبار لمدة 15 إلى 30 دقيقة قبل الاختبار حتى يهدأ الفأر.
ثم ضع خيوط Von Frey بشكل عمودي على الظهر ، بدءا دائما من خيوط 2 جرام وباستخدام طريقة أعلى / أسفل. ضع الفتيل لمدة ثانيتين بشكل ثنائي على منطقة الاهتمام تتم معالجة 10 ملليمترات من العمود الفقري كل 15 إلى 30 ثانية عندما يكون الجرذ مستيقظا ، ويقف على مخالبه الأربعة ، ولا يتحرك. إذا لم يلاحظ أي استجابة مع تطبيق خيوط ، فقم بتطبيق الفتيل التالي بقوة أعلى في السلسلة.
إذا لوحظت استجابة إيجابية مثل تقوس الظهر أو اللعق أو ارتعاش العضلات أو الابتعاد عن الفتيل أو الدوران ، فاستخدم الفتيل التالي بقوة أقل في السلسلة. استمر في الإجراء حتى يتم الحصول على أربع قراءات بعد التغيير السلوكي الأول. في هذه الدراسة ، تم التحقيق في الحساسية الميكانيكية الخلفية بين CFA والفئران الضابطة.
عند خط الأساس ، كانت الحساسية الميكانيكية متشابهة بين المجموعات. تسبب الحقن العضلي ل CFA في عضلات أسفل الظهر في زيادة ملحوظة في الحساسية الميكانيكية من سبعة إلى 28 يوما. في المقابل ، لم تظهر الفئران الضابطة أي تغيير كبير.
علاوة على ذلك ، أكد الفحص النسيجي وجود تغيرات التهابية مزمنة في العضلات المحقونة ب CFA مع تسلل واضح للكريات البيض. تظهر عضلات الظهر الصحية من الفئران الخاضعة للرقابة بعد الحقن العضلي للمحلول الملحي كمرجع. لوحظ فرط الحساسية الميكانيكية في مخلب الخلف مع اختبار فون فراي القياسي ، بالإضافة إلى عضلات الظهر.
من المهم جدا التأكد من أن الفتيل يتم تطبيقه دائما بنفس الطريقة بشكل عمودي على الظهر ، وأن الحيوان لا يتحرك عند تطبيقه. يجب أن يشعر المجرب أيضا بالثقة في تمييز الاستجابات السلوكية للحركات الحديثة.
