分离小鼠肠系膜流动淋巴液以量化膳食脂质吸收和乳糜微粒分泌的 体内 动力学

我们的方案允许我们直接测量肠系膜淋巴流动的餐后代谢。这是强大的，因为我们可以定量确定营养物质从小肠进入淋巴的运动。我们可以测量细胞因子，膳食脂质，其他膳食成分和淋巴细胞。

这种技术可以帮助我们剖析膳食脂质进入淋巴液的动态，乳糜微粒的合成和分泌。这里介绍的一天模型有几个优点。首先，它减少了实验时间。

其次，它减少了动物的压力。它增加了动物的存活率。总的来说，减少了实验数量。

今天展示我们技术的将是我们的高级实验室外科医生Nick Dedousis先生。还有我们的研究科学家滕立宏博士。准备好手术后的小鼠，用镊子抓住皮肤，用小剪刀做一个中线腹部切口。

然后，切向胸骨并向下切到腹股沟脂肪。使用牵开器，将腹膜内脏移开，直到淋巴管可见。使用浸有盐水的Q-tip，将肝脏移向身体的右上方，将肠道和胃向动物的左侧移动。

然后通过向左横向拉伸十二指肠来暴露肠系膜上动脉和肠淋巴管。通过插入钝针来准备 30 至 40 厘米长的套管。然后，使用一毫升注射器，通过管冲洗少量肝素，并用剪刀在套管的尖端切开斜面。

然后，按照手稿中的描述，使用虹膜剪刀做一个浅切口和淋巴管。用一对细镊子握住套管，然后将尖端斜面轻轻插入导管。由于淋巴管很脆弱，使用一滴氰基丙烯酸酯将淋巴套管粘入肠系膜淋巴液中，而不是用缝合线绑住导管。

现在，使用18号针，在幽门括约肌后方的胃幽门区域穿一个孔，然后将十二指肠输液管插入胃中，超出幽门括约肌一到两毫米进入十二指肠。然后，使用丝绸 5/0 缝合线用钱包绳结扎将管子固定在胃上，并用一滴氰基丙烯酸酯胶密封以防止泄漏。开始十二指肠内输注5%葡萄糖和0.9%盐水。

更换体腔内的器官并缝合中线切口。将鼠标轻轻地放在依偎约束装置中。为小鼠提供连续十二指肠内输注盐水和葡萄糖一小时。

检查套管的淋巴流动，并开始挤奶淋巴套管以保持淋巴流动。通过十二指肠内输注管进行 0.3 毫升脂质乳剂推注的经典脂质输注。然后，将输液切换回5%葡萄糖和0.9%盐水，每小时0.3毫升，连续直到实验结束。

收集淋巴样本并预先称量微量离心管60分钟，并将淋巴液保持在冰上。第二次称量试管，以确定每60分钟分泌的淋巴液重量。收集胃，盲肠和结肠，并将每个器官放入15毫升的玻璃管中。

将小肠分成三段或四段。将其纵向切开，并通过用两到三毫升冷PBS冲洗组织来收集管腔内容物。用弯曲的镊子刮取两到三毫升冷PBS中的每个切片，从肌肉层中去除包含上皮细胞和相关固有层的肠粘膜。

将所有组织、管腔和粘膜分离物以及肌肉层放入玻璃管中。淋巴液中的甘油三酯浓度响应于300微升SMOF脂质的十二指肠内推注而增加。甘油三酯浓度峰值在推注后两到三小时达到，并在六小时内稳步下降。

淋巴流速从零推注时间到实验结束增加。该方案的一个主要目标是减少动物压力，提高存活率，并减少麻醉时间。为了实现这一目标，我们将 Bollman 约束笼换成了依偎，并增加了湿度、保暖和液体补充。

我们的一天跛行瘘管方案使我们能够实时测量体内脂质吸收动力学。它还使我们能够研究肠道器官串扰、新陈代谢、膳食营养吸收和免疫表型。