הפרוטוקול שלנו מאפשר לנו למדוד ישירות את חילוף החומרים לאחר הלידה בלימפה מזנטרית זורמת. זה חזק כי אנחנו יכולים לקבוע כמותית את התנועה של חומרים מזינים מן המעי הדק לתוך הלימפה. ואנחנו יכולים למדוד ציטוקינים, שומנים תזונתיים, רכיבים תזונתיים אחרים ולימפוציטים.
טכניקה זו יכולה לעזור לנו לנתח את הדינמיקה של שומנים תזונתיים הנעים לתוך הלימפה, סינתזה והפרשה של כילומיקרון. למודל החד-יומי המוצג כאן יש כמה יתרונות. ראשית, זה מקטין את זמן הניסוי.
שנית, היא מפחיתה את הלחץ של בעלי החיים. זה מגביר את הישרדות בעלי החיים. ובסך הכל, מקטין את מספר הניסויים.
מי שידגים את הטכניקה שלנו היום יהיה מנתח המעבדה הבכיר שלנו, מר ניק דדוסיס. והמדען החוקר שלנו, ד"ר ליהונג טנג. לאחר הכנת העכבר לניתוח, לתפוס את העור עם פינצטה ולעשות חתך בטן קו האמצע עם מספריים קטנים.
לאחר מכן, חותכים לכיוון עצם החזה ומטה לשומן המפשעה. באמצעות retractor, להזיז את הקרביים הצפק מהדרך עד צינור הלימפה גלוי. בעזרת קצה Q ספוג במי מלח, הניעו את הכבד לכיוון הצד הימני העליון של הגוף ואת המעיים והקיבה לכיוון שמאל של החיה.
לאחר מכן לחשוף את העורק mesenteric העליון ואת צינור הלימפה המעי על ידי מתיחה התריסריון רוחבי לכיוון שמאל. הכינו צינורית באורך 30 עד 40 ס"מ על ידי החדרת מחט קהה. לאחר מכן, באמצעות מזרק של מיליליטר, שטפו כמות קטנה של הפרין דרך הצינור וחתכו שיפוע בקצה צינורית הצינורית באמצעות מספריים.
לאחר מכן, בצע חתך רדוד וצינור לימפה באמצעות מספריים הקשתית כמתואר בכתב היד. החזיקו את צינורית הצינורית בעזרת זוג מלקחיים עדינים והכניסו בעדינות את קצה השיפוע לצינור. מכיוון שצינור הלימפה שביר, השתמש בטיפת ציאנואקרילט כדי להדביק את צינורית הלימפה לתוך הלימפה המזנטרית במקום לקשור את הצנתר בתפר.
כעת, באמצעות מחט 18 מד, נקבו חור דרך האזור הפילורי של הקיבה האחורית לסוגר הפילורי, והכניסו את צינור העירוי התריסריון בקיבה מילימטר עד שני מילימטרים מעבר לסוגר הפילורי לתריסריון. לאחר מכן, הדקו את הצינור לקיבה באמצעות רצועת חוט ארנק באמצעות תפר משי 5/0 ואטמו בטיפת דבק ציאנואקרילט למניעת דליפה. התחל עירוי תריסריון של 5% גלוקוז ו 0.9% מלוחים.
להחליף את האיברים בחלל הגוף ולתפור את חתך קו האמצע. הנח את העכבר בעדינות באיפוק מתכרבל. לספק את העכברים עם עירוי intraduodenal מתמשך של מלוחים גלוקוז במשך שעה אחת.
בדוק את הצינורית עבור זרימת הלימפה ולהתחיל לחלוב את צינורית הלימפה כדי לשמור על הלימפה זורמת. בצע את עירוי השומנים הקלאסי של בולוס תחליב שומנים 0.3 מיליליטר דרך צינור העירוי תוך תריסריון. לאחר מכן, החזירו את העירוי ל-5% גלוקוז ו-0.9% מלוחים ב-0.3 מיליליטר לשעה ברציפות עד סוף הניסוי.
לאסוף את דגימות הלימפה מראש לשקול צינורות מיקרו צנטריפוגות במשך 60 דקות ולשמור את הלימפה על קרח. לשקול את הצינורות בפעם השנייה כדי לקבוע את משקל הלימפה מופרש כל 60 דקות. אספו את הקיבה, הצקום והמעי הגס והכניסו כל איבר לצינור זכוכית של 15 מיליליטר.
מחלקים את המעי הדק לשלושה או ארבעה מקטעים. חתכו אותו לאורכו ואספו את התוכן הלומינלי על ידי שטיפת הרקמה בשניים עד שלושה מיליליטר של PBS קר. הסר את רירית המעי המורכבת מתאי אפיתל ולמינה פרופריה הקשורה מהשכבה השרירית על ידי גירוד כל חלק בשניים עד שלושה מיליליטר של PBS קר עם טוויטר מעוקל.
מניחים את כל הרקמות, את המבודד הלומינלי והרירית, ואת השכבה השרירית בצינורות זכוכית. ריכוז הטריגליצרידים בלימפה עלה בתגובה לבולוס תוך תריסריון של 300 מיקרוליטר SMOFlipid. ריכוז שיא הטריגליצרידים מגיע בשעתיים עד שלוש שעות לאחר הבולוס ויורד בהתמדה במהלך שש השעות.
קצב זרימת הלימפה עולה מזמן עירוי בולוס אפס ועד סוף הניסוי. המטרה העיקרית של פרוטוקול זה הייתה להפחית את העקה של בעלי חיים, להגדיל את שיעור ההישרדות ולקצר את זמן ההרדמה. לשם כך החלפנו את כלובי הריסון של בולמן להתכרבלות, והוספנו לחות, חום וחידוש נוזלים.
פרוטוקול פיסטולה צולעת ליום אחד שלנו מאפשר לנו למדוד בזמן אמת, in vivo, דינמיקה של ספיגת שומנים. זה גם מאפשר לנו לחקור את ההצלבה של איברי המעי, חילוף חומרים, ספיגת חומרים מזינים תזונתיים ופנוטיפים חיסוניים.
