原位杂交是一种非常翔实的技术，用于呈现组织中特定基因的mRNA和IncRNA表达模式。本文的目的是开发一种敏感方法，用于检测西朋库鲁斯的共体流体中特定的mRNA定位，这是一种重要的渔业资源。我们介绍了使用这种方法成功实验取得的代表性结果。
希望我们的方法是应用于其他西朋库拉物种，以识别骨质流体中特定mRNA和IncRNA的表达模式。将解剖桌上的西朋库鲁斯 nudus 固定。用小型自动剪子打开西朋库鲁斯的机身。
然后收集并转移与移液器的科洛液到多D-lysine处理显微镜幻灯片，温和传播。在37摄氏度下将滑梯风干一小时。用 DEPC-PBS 清洗幻灯片三次，每次用轻轻搅拌洗涤五分钟。
排空PBS，在室温下在幻灯片上加入蛋白酶K溶液5分钟。排空蛋白酶K溶液。在室温下在幻灯片上添加 PFA 溶液 20 分钟。
排空 PFA 溶液。用 DEPC-PBS 清洗幻灯片三次，每次用轻轻搅拌洗涤五分钟。排空 PBS。
加入50微升利博普罗贝。添加盖玻片。将幻灯片放入湿盒中，用石蜡薄膜密封良好。
在60摄氏度下过夜混合。将幻灯片浸入洗涤缓冲器中，让它站立，直到盖玻片自动滑出。用预热洗涤缓冲液在65摄氏度下清洗两次，每次洗涤30分钟，轻轻搅拌。
使用预热 SSC 溶液在 65 摄氏度下清洗幻灯片两次，每次洗涤 30 分钟，轻轻搅拌。在室温下用 MABT 溶液清洗幻灯片两次。每次洗涤30分钟，轻轻搅拌。
排空 MABT。添加阻塞缓冲区。在室温下孵育滑梯三到四个小时。
排空阻塞缓冲器。加入抗体，在四摄氏度下孵育一夜之间。排空抗体溶液。
使用 MABT 溶液清洗幻灯片四次，每次洗涤 25 分钟，轻轻搅拌。排空 MABT。加入碱性磷酸酶缓冲液三次，每孵育五分钟。
拆下碱性磷酸酶缓冲液。添加 BCIP-NBT 染色溶液。把幻灯片保持在黑暗中。
染色时间从几分钟到小时，甚至在夜间变化，这取决于信号强度。染色状态应在染色开始时更频繁地检查。例如，间隔为几分钟，最晚有几个小时的染色时间。
检查时间应尽可能短，以避免由于暴露在光线下而引入高背景信号。显示了原位杂交的代表性信号。在原位杂交的Si普unculus nudus共生液与抗感觉核蛋白酶，目标 dmrt1 表示紫色染色集中在精子的成骨细胞，图2A和B.Sense核蛋白为drt1没有检测到任何杂交信号，图2C。
看完这段视频后，您将非常了解如何在西朋库鲁斯的colomic流体中可视化目标mRNA或IncRNA的表达模式。
