测量布氏活锥虫的动态糖体 pH 值变化

葡萄糖代谢对布氏锥虫至关重要，但对细胞如何感知和响应环境中不断变化的葡萄糖水平知之甚少。我们已经开发了表达pH生物传感器的寄生虫，使我们能够监测活寄生虫中的糖体pH值，这将有助于了解寄生虫对营养波动的动态反应。该实验的一个挑战是配备微量滴定酶标仪的流式细胞仪以及用于测量生物传感器荧光的适当滤光片组的可用性。

此外，布氏锥虫是第二类危险生物，因此细胞仪必须安装在生物安全二级设施内。已经发现糖体的pH值会影响糖酵解，因为己糖激酶和磷酸果糖激酶对pH值敏感。然而，以前使用的pH探针并不能准确地靶向血流形式的糖体。

需要一种更好的工具来研究这个寄生虫生命阶段的糖体pH值和糖酵解之间的关系。在这个生命阶段，pHluorin2-PTS1 传感器是一种比化学 pH 探针更擅长定位到糖体的工具。它对用户友好，因为您只需要在一夜之间诱导 pH 传感器的表达，细胞就会产生 pHluorin2 并将其定位到糖体上。

与显微镜相比，使用流式细胞术测量 pHluorin2 可提高通量并改善统计测量。