Entwicklung eines Algorithmus einer umfassenden Studie von Autonomic Dysreflexie in Tiere zu Führen mit hoher Rückenmark-Verletzung ein Telemetrie-Gerät verwenden

Zusammenfassung

The catheter of a telemetry device is implanted into the abdominal aorta in order to continuously collect beat-by-beat hemodynamic data from animals pre and post-high thoracic spinal cord transection. A novel JAVA software was employed to analyze hemodynamic parameters as well as frequency and intensity of spontaneous episodes of autonomic dysreflexia.

Zusammenfassung

Spinal cord injury (SCI) is a debilitating neurological condition characterized by somatic and autonomic dysfunctions. In particular, SCI above the mid-thoracic level can lead to a potentially life-threatening hypertensive condition called autonomic dysreflexia (AD) that is often triggered by noxious or non-noxious somatic or visceral stimuli below the level of injury. One of the most common triggers of AD is the distension of pelvic viscera, such as during bladder and bowel distension or evacuation. This protocol presents a novel pattern recognition algorithm developed for a JAVA platform software to study the fluctuations of cardiovascular parameters as well as the number, severity and duration of spontaneously occurring AD events. The software is able to apply a pattern recognition algorithm on hemodynamic data such as systolic blood pressure (SBP) and heart rate (HR) extracted from telemetry recordings of conscious and unrestrained animals before and after thoracic (T3) complete transection. With this software, hemodynamic parameters and episodes of AD are able to be detected and analyzed with minimal experimenter bias.

Einleitung

Autonomic Dysreflexie (AD) ist eine lebensbedrohliche Notfall bei Personen nach einer akuten oder chronischen Rückenmarksverletzungen (SCI) im Hals- oder High-Brust-Segmente und wird in der Regel durch Episoden von persistenten Hypertonie und Bradykardie ¹ gekennzeichnet. AD wird in erster Linie durch die Störung verursacht Rückenwege abzusteigen, die in der Regel Eingabe von supraspinale Zentren des Rücken sympathischen präganglionären Neuronen schaffen , die sympathische Aktivität und Gefäßtonus ^1-4 steuern. AD Episoden werden durch einen Anstieg der systolische Blutdruck (SBP) bis zu 300 mmHg gekennzeichnet und wenn sie unbehandelt kann zu Krampfanfällen, Hirnblutungen, Herzinfarkt führen und sogar zum Tod ^5-8. Eine Vielzahl von schädlichen und nicht-schädlichen Stimuli wirken als Auslöser von AD, einschließlich Darm und Blase Distension, Krämpfe, Druckgeschwüren, Harnblase Katheterisierung oder iatrogen Verfahren ^9-12.

Die zeitliche Entwicklung von AD in bzw.onse SCI wurde in beiden menschlichen ⁹ und Tiermodellen ^13,14 sucht. Typischerweise haben diese Studien eine "induzierte AD 'Methode (dh urodynamics, Penis vibrostimulations bei Menschen oder kolorektalen Aufblähung bei Tieren) verwendet , um die zeitliche Entwicklung von AD zu bestimmen. Ein solcher Ansatz wird durch die Notwendigkeit zur wiederholten Einschätzungen an isolierten Zeitpunkten beschränkt, die eine genaue Bestimmung der zeitlichen Entwicklung von AD ausschließen kann. Die Verwendung von 24-Stunden-Blutdruckmessung beim Menschen ermöglicht serielle Blutdruckmessungen in vorbestimmten Intervallen durchgeführt werden. Diese Technik wurde kürzlich zur Überwachung spontan auftretende AD bei Patienten mit chronischer SCI verwendet. In Tiermodellen zunehmend Festkörperdruckwandler zu chronisch Beat-by-Beat arterielle Blutdruck überwachen verwendet werden. Vor kurzem Rabchesvky et al. (2012), entwickelte einen Algorithmus, der 1 Sekunde Mittelwerte des mittleren arteriellen Drucks extrahiert (MAP) eind im Vergleich gegen einen gleitenden Durchschnitt Schwelle ^15. Spontane AD Ereignisse wurden basierend auf MAP Peaks charakterisiert, die 10 mmHg oder mehr über dem Schwellenwert sind gleichzeitig mit einem HR Abfall von 10 bpm oder höher.

Hier ist eine neue JAVA-Software, die über einen integrierten AD-Erkennungsalgorithmus wurde vorgestellt. Dieser Algorithmus arbeitet von vorher festgelegten Muster in den arteriellen Blutdruck (ABP) und Herzfrequenz (HR) erkennen, die indikativ für eine spontan auftretende AD Ereignis sind. Der Benutzer ist in der Lage, manuell alle Eingangsgrößen an die Software anzupassen, so dass die "Erkennungsalgorithmus 'kann leicht auf die spezifischen Parameter von Interesse angepasst werden. Die Software ist auch in der Lage ABP und HR in einer bestimmten Epoche zu dichotomize , so dass Tagesrhythmik der hämodynamischen Parameter ¹⁶ analysiert werden kann. Im vorliegenden Manuskript wird eine detaillierte Erläuterung der Operationstechnik gegeben, die die Telemetriegeräte zu implantieren und leiten die SCI Chirurgie verwendet wird. Exspiele sind auch in Bezug auf die Post-Processing-Fähigkeiten des AD-Detection-Software und wie Herz-Kreislauf-Funktion verändert post-SCI zur Verfügung gestellt. Zu Vergleichszwecken wurde die Methodik und die Ergebnisse einer Methode der induzierten AD als colorectal Distension bekannt sind, erhalten (CRD) ist ebenfalls dargestellt.

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Protokoll

Männliche Wistar (Hsd: WI Wistar) Ratten mit 7 Wochen alt und mit einem Gewicht von 300-350 g wurden in diesem Experiment verwendet. Alle Ratten wurden auf einem 12 Stunden Licht / Dunkel-Zyklus gehalten und erhielten eine Standardlaborrattenfutter und Wasser ad libitum. Alle experimentellen Verfahren entsprachen mit dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Versuchstieren durch den Canadian Council on Animal Care gegründet und gewährt Ethik Genehmigung durch die University of British Columbia. Chirurgie und Tierpflege wurden nach Standardverfahren in unserem Labor (Ramsey et al. 2010) durchgeführt , ^17.

1. Herstellung der Tiere: Chirurgische Verfahren

1. Die Implantation des Telemetrie - Gerät
   Hinweis: Protokoll implementiert wurde gemäß den Angaben des Herstellers und unseren bisherigen Erfahrungen mit der Implantation des Gerätes: ¹⁶
   1. Pre-Behandlung der Tiere mit Enrofloxacin, einmal täglich für 3 Tage (10 mg / kg, s.c.) präoperativ.
   2. Entfernen Sie feste Nahrungsmittel aus Käfig 9-13 Stunden vor der Operation. Soft-Diät Ernährungsmahlzeitenersatz kann in dieser Zeit zur Verfügung gestellt werden.
   3. Betäuben der Tiere eine Induktionsdosis von 4% Isofluran in einer Induktionskammer und eine Erhaltungsdosis von etwa 1,5% Isofluran (mit 1-1,5 L / min Sauerstoff) unter Verwendung eines Bain-Schaltung verwendet wird. Verwenden Sie die Zehe Prise Reflex und Corneareflexe zu beurteilen, ob Tiere in chirurgische Ebene der Anästhesie sind. Respiration muss beurteilen überwacht werden , wenn die Tiefe der Narkose zu hoch ist (dh sehr langsam Atmungsrate und Keuchen, blasse Schleimhäute) oder zu niedrig (dh schnelle, flache Atmung , das Tier anzeigt , nicht an einer Operationsebene Anästhesie sein kann ). Wiederholen Sie die Überwachung der operativen Ebene der Anästhesie etwa alle 5 Minuten während der Operation und stellen Isofluran Dosis nach Bedarf.
      Hinweis: Alle Operationen werden unter aseptischen Bedingungen durchgeführt: Insbesondere Chirurgen tragenOP-Bekleidungen, Mütze, Maske, und sterile Handschuhe. Offene Behandschuhung Verfahren wird beobachtet, chirurgische Packung mit chirurgischen Instrumenten autoklaviert wird unter Verwendung einer sterilen Technik geöffnet und das Tier wird vor Beginn der Operation drapiert. Chirurgische Instrumente sind Spitze sterilisiert in heißen Perlen zwischen Operationen (für bis zu fünf Operationen). Chirurgischen Schwämmen und Gaze vor der Verwendung autoklaviert. Während der Operation werden die Tiere auf einem Wasserumlauf Decke bei 37 ° C gehalten wird gehalten.
   4. Verabreichen Buprenorphin (0,02 mg / kg; sc) unmittelbar vor der Operation. Ferner Ketoprofen (5 mg / kg; sc) verabreichen vor der Operation multimodalen Analgesie bereitzustellen. Verabreichen Bupivacain (5 mg / kg; sc) unmittelbar vor der Operation eine lokale Leitungsblock zu schaffen. Auf den Bauch rasieren, gelten Tupfer von Chlorhexidin und 70% Ethanol (je dreimal), gefolgt von Povidonjodid für mindestens 1 min, und entfernen Sie mit 70% Ethanol (jedes Mal mit einem neu geöffneten Alkoholtupfer) abwechseln. Abtupfen der Hautgemacht wird in der Mitte der Schnittlinie in konzentrischen Art und Weise beginnen und nach außen kreisen (um nicht auf den Bereich verunreinigen durch "vor / zurück" Bewegungen). Verwenden Sie sterile Tupfer und entsorgen zwischen jeder Anwendung. Dieser Vorgang wird dreimal wiederholt, bevor Tierchirurgie beginnen. Während abgeschnitten und chirurgisch geschrubbt, halten die Tiere auf dem Nasenkegel mit einem Bain verbunden unter etwa 1,5% Erhaltungsdosis von Isofluran nicht Rückatmungskreislauf. Stellen Sie Isofluran Ebene als erforderlich, um das Tier zu einem Operationsplan der Narkose zu halten.
   5. Machen Sie eine 5 cm lange Mittellinie Bauchschnitt Schneiden durch die Muskeln und Peritoneum den Darm ausgesetzt wird.
   6. Einfahren den Darm (dies wird die absteigende Aorta an der hinteren Bauchwand aussetzen), decken Sie den Darm mit sterilen chirurgischen Gaze angefeuchtet mit 2-3 ml Ringers Lösung und feucht halten mit zusätzlichen Ringers so oft wie nötig Gewebeaustrocknung durch das Verfahren zu verhindern .
   7. um die Aorta blunt sezieren und die Aorta von der inferior vena cava trennen eine Iris Spatulae verwendet.
   8. Platz Ligatur (8-0 Monofilamentnahtmaterialien) um die rostralen und kaudalen Enden der äußersten Adventitialschicht der Aorta distal der Nierenarterie.
   9. Heben Sie die Ligatur kurz verschließenden Durchblutung und pannen die Aorta in Höhe von 1-2 mm vor der iliakalen Bifurkation mit einer 25-Gauge-Nadel gebogen bei 90 ° an der Spitze.
   10. Führen Sie die Spitze des Katheters der Telemetrieeinrichtung in die Aorta unter Verwendung einer 20-Gauge gebogene Nadel. Voraus rostral, um sicherzustellen, dass die Spitze zu den Nierenarterien distal ist
       1. Fix es eine kleine Menge an Gewebekleber verwendet wird. Entfernen Ligaturen und sicherzustellen, dass es keine Blutfluss Okklusion aufgrund des Katheters oder Gewebekleber.
   11. Sichern Sie den Körper der Telemetrieeinrichtung in die Bauchdecke mit 4-0 Seidennähten. Verwenden Sie 4-0 Vicryl und 4-0 Prolene Fäden die musc zu schließenle und die Haut sind.
2. Telemetry Implantierung Post-OP - Pflege
   Hinweis: Für die ersten 14 Tage nach der Operation Tiere sollten mindestens 3-mal täglich, zusätzlich zu einer detaillierten Überwachung Beurteilung einmal täglich kontrolliert werden. Beurteilen Sie Tiere in 7 Kategorien: Körpergewicht, körperliche Erscheinung (wird Schmerzen auf Anzeichen wie erhöhte Porphyrin Produktion rund um die Augen, Nase und Vorderpfoten gesehen und unter Anwendung und Gesichts Grimasse Zeichen), Verhalten / Aktivität, Defäkation, Haut (einschließlich gebeugt, Piloerektion Anschneiden Heilung und seroma), Feuchtigkeit und Atmung.
   1. Füttern Sie die Tiere mit Obst, eine Auswahl an Müsli, weiche Nahrung Nahrungsmahlzeitersatz und Wasser ad libitum zur Verfügung stellen, für 6 Tage nach der Telemetrie-Gerät der Implantation. Die Tiere sollten regelmäßig feste Nagerfutter operativ für den ersten Tag Post zurückgehalten haben. Injizieren Tiere mit erwärmtem Ringer-Laktat-Lösung (5 ml) subkutan für die ersten 3 Tage nach der Operation und bei Erscheinender Symptome von Austrocknung. Verwalte Ringers-Lösung (5 ml) bei Bedarf auf Beurteilung der Tiere (Zeichen der Haut Zelt, blasse Ohren / Schleimhäute) während der morgendlichen und abendlichen Kontrollen.
   2. Verabreichen Enrofloxacin (10 mg / kg, sc) und Ketoprofen (5 mg / kg, sc) einmal täglich, für 3 Tage postoperativ. Verabreichen Buprenorphin (0,02 mg / kg, sc) während des Morgens und abends (dh alle 12 h) für die folgenden 3 Tage nach der Operation. Eine Mitte-Tag-Dosis von Buprenorphin (0,02 mg / kg, sc) verabreicht werden, wenn Anzeichen von Schmerzen / Not werden zur Kenntnis genommen.
3. Vollständige Durchtrennung des Rückenmarks
   Hinweis: Lassen Sie Tiere mindestens 14 Tage vor T3 vollständige Durchtrennung der Operation von Telemetrie-Implantationschirurgie zu erholen.
   1. Vorzubehandeln Tiere mit prophylaktischen Enrofloxacin (10 mg / kg, sc) für drei Tage vor SCI Chirurgie.
   2. Anästhesieren Tiere unter einer Induktionsdosis von 4% Isofluran wie zuvor beschrieben. Des Weiteren,injizieren Tiere mit Ketamin-Hydrochlorid (70 mg / kg, ip) und Dexmedetomidin-Hydrochlorid (0,5 mg / kg, ip).
      Hinweis: Für eine vollständige Durchtrennung Operationen, die durch Isofluran verursacht Vasodilatation sehr oft Probleme mit Hämostase präsentiert, sobald das Kabel durchtrennt wird. Dieses Problem kann durch Verwendung von Ketamin / Dexmedetomidin Cocktail verhindert werden. Die Tiere sollten für 20-25 min narkotisiert werden und umgekehrt unter Verwendung von Atipamezol (1 mg / kg, sc) gemäß dem Rückenmark transection Chirurgie.
   3. Präoperativ subkutan Buprenorphin (0,02 mg / kg) und Ketoprofen (5 mg / kg) verabreichen. Verabreichen Bupivacain (5 mg / kg; sc) unmittelbar vor der Operation eine lokale Leitungsblock zu schaffen. Auf das Abdomen rasiert, abwechselnde Bürsten von Chlorhexidin und 70% Ethanol (jeweils dreimal), gefolgt von Povidon-Jod sollte für mindestens 1 min, und entfernt mit 70% Ethanol (jeweils mit einem neu geöffneten Alkoholtupfer) angewendet werden. Bürsten sind in konzentrischen Art und Weise hergestellt werden, beginnendin der Mitte der Schnittlinie und kreisen nach außen (um nicht den Bereich, der durch "vor / zurück" zu verunreinigen Bewegungen). Verwenden steriler Gaze und entsorgen zwischen jeder Anwendung. Wiederholen Sie den Vorgang dreimal, bevor Tier Operation beginnen. Während abgeschnitten und chirurgisch geschrubbt, halten Tiere auf einem Bugnase unter etwa 1,5% Erhaltungsdosis von Isofluran (bei Bedarf angepasst, um chirurgische Ebene der Anästhesie aufrechtzuerhalten). Während der gesamten Dauer der Operation Tiere auf Wasserumlauf Decke bei 37 ° C gehalten wird gehalten.
   4. Machen Sie eine Rückenmittellinie Schnitt, 2 cm in der Länge, in der oberflächlichen Muskel der C8-T3 Wirbel überlagert.
   5. Blunt, um sezieren die Dura Schicht zu offenbaren.
   6. Pierce die Dura Schicht mit Mikroschere oder mit der Spitze einer 25-Gauge-Nadel.
   7. Öffnen Sie die Dura an der T2-T3 Intervertebralhöhe und führen Sie eine vollständige Durchtrennung Mikroscheren verwenden. Öffnen Sie die Mikroscheren, aber nicht seitlich genug Wirbel arterie zu platzens und Venen. In schnellen Bewegung das Rückenmark durchschneiden und für eine übertriebene Zucken in den Tierhinterbeine zu suchen. Bestätigen Sie eine vollständige Durchtrennung über visuelle Trennung der rostralen und kaudalen Rückenmark Stümpfe.
   8. Nach der Bestätigung legen Gelfoam zwischen den Stümpfen Hämostase zu erreichen. Tragen Sie genügend Gelfoam um Blutungen zu stoppen und die Stümpfe des Rückenmarks zu trennen.
   9. Verwenden Sie 4-0 Vicryl und 4-0 Prolene Fäden die Muskeln und die Haut bzw. zu schließen. Nach SCI Chirurgie, geben Tiere Ringer-Lactat-Lösung vorgewärmt (5 ml, sc bei 30 ° C) und es ihnen ermöglichen, in einer temperaturgeregelten Umgebung zu erholen.
4. Spinal Cord Trennung Post-OP - Pflege
   Hinweis: Für die ersten 14 Tage nach der Operation sollten die Tiere 3-mal täglich überprüft werden, zusätzlich zu einer detaillierten Überwachung Beurteilung einmal pro Tag. Nach 14 Tagen eine detaillierte Überwachung Beurteilung kann jeden zweiten Tag wiederholt werden. Beurteilen Sie Tiere in 7 Kategories: Körpergewicht, körperliche Erscheinung (wird Schmerz auf Anzeichen wie Porphyrin und Gesichts Grimasse basiert bewertete die), Verhalten / Aktivität, Defäkation, Haut (einschließlich gebeugt, Piloerektion, Inzision Heilung und seroma), Feuchtigkeit und Atmung. Für die ersten 5-7 Tage Blasen sollte mindestens 3-mal pro Tag überprüft und ausgedrückt werden.
   1. Füttern Sie die Tiere mit Obst, eine Auswahl an Getreide, Nahrungs weiche Kost Mahlzeitersatz und Wasser ad libitum zur Verfügung stellen, für 8-14 Tage nach der Durchtrennung der Operation des Rückenmarks. Injizieren Tiere mit erwärmtem Ringer-Laktat-Lösung (5 ml) subkutan für die ersten 3 Tage nach der Operation und auf Symptome der Austrocknung. Verwalten Ringerlösung (5 ml) bei Bedarf auf Beurteilung der Tiere bei den Kontrollen.
      Hinweis: Nach der Durchtrennung des Rückenmarks, Ratten Lähmung der hinteren Gliedmaßen zeigen und ambulate Flexion und Extension der forelimbs verwenden, die in diesem Verletzungsmodell erhalten bleibt. Die Ratten fehlt Rumpf und Schwanz Unterstützung. Zu erleichternihre Bewegung im Käfig sollte ein Gummi Gitter unter Haferflocken Betten platziert werden. Dies ermöglicht Ratten das Gitter mit den Vorderpfoten zu erfassen, und leicht in den Käfig Nahrung und Wasser für den Zugriff zu bewegen. Die Bettwäsche sollte täglich gewechselt werden. Am Tag 7 nach Rückenmarksdurchtrennung, die Hafer Betten sollten von ihren ursprünglichen Holzspan Betten ersetzt werden. Die Haferflocken Betten, da Ratten, die Buprenorphin verwendet wird, kann pica entwickeln, in dem sie Bettzeug essen und diese Speiseröhren Impaktionen verursachen kann. Haferflocken sind saugfähig Einklemmung der Speiseröhre mit Haferflocken wurde nicht beobachtet.
   2. Verabreichen Enrofloxacin (10 mg / kg, sc) und Ketoprofen (5 mg / kg, sc) einmal täglich für 3 Tage postoperativ. Verabreichen Buprenorphin (0,02 mg / kg, sc) während des Morgens und abends (dh alle 12 h) für die folgenden 3 Tage nach der Operation. Eine Mitte-Tag-Dosis von Buprenorphin verabreicht werden, wenn Anzeichen von Schmerz / Not bemerkt werden.

2. TelemetryDie Überwachung der hämodynamischen Parameter

1. Sammeln Sie Beat-by-Beat arteriellen Blutdruck (ABP) und die Körperkerntemperatur jeden Tag für 24 Stunden, vor und nach der SCI. Probieren Sie den arteriellen Blutdruck und die Körperkerntemperatur bei 1000 Hz in 24-Stunden-Blöcke mit Hilfe der Telemetrie-Gerät.
2. Legen Sie eine SmartPad unter dem Tierkäfig für drahtlose Aufladen des Wandlers und für von den Wandlern von digitalen Entfernungsmesser-Signale zu empfangen.
   Anmerkung: Die Ausgangsspannung wird dann weitergeleitet an einen Konfigurator mit einem Computer verbunden, der den Datenfluss von jedem Kanal organisiert. Die Spannung wird auf kontinuierliche arterielle Blutdruck und Temperaturaufzeichnungen umgewandelt. Visualisieren Sie die abgetasteten Daten Datenerfassungs-Software verwendet wird, wie LabChart.
3. Entsorgen Sie die Telemetriedaten während Tierüberwachung gesammelt, sowie die 10 Minuten unmittelbar vor der Überwachung und 10 Minuten nach der Überwachung.

3. Bewertung der Spontane Incidschiede von Autonomic Dysreflexie (AD)

Hinweis: Die Häufigkeit, Schwere und Dauer der spontanen AD Ereignisse wurden bewertet unter Verwendung eines Algorithmus entwickelt für eigene neue AD - Erkennung Java - Plattform - Software (Abbildung 4). Ein neuer Algorithmus entwickelt worden , um automatisch spontane AD Ereignisse erfassen basierend auf 24 - Stunden - SBP und HR - Telemetrie - Aufnahmen vor und nach der SCI - Parameter angegeben in Abbildung 2 verwendet wird .

1. Auszug SBP und HR-Werte aus rohen Telemetriedaten über einen Zeitraum von Interesse unter Verwendung von Erfassungssoftware.
   Hinweis: Acquisition Software erkennt und bestimmt den Wert der SBP Spitzen von kontinuierlichen ABP - Aufnahmen. Die Herzfrequenz wird durch die Bestimmung der Dauer Abstand zwischen benachbarten SBP Peaks extrapoliert.
2. Laden Sie eine CSV-Datei der Telemetrieaufzeichnungen mit Zwischenschlagintervall in Spalte A, SBP Werte in Spalte B, MAP-Werte in Spalte C und Uhrzeit in Spalte D (4A).
3. Mit Hilfe der Software (4B-D), geben Sie die relevanten physiologischen HR - Bereich (dh R bis R - Intervall) für die SBP - Aufnahmen zwischen 180 bpm und 625 bpm. Geben Sie die relevanten HR - Bereich auf der Software unter den Herzfrequenz Minimale und maximale Herzfrequenz - Panels.
4. Erstellen Sie einen Schwellenwert für die SBP und HR durch einen gleitenden Durchschnitt Fenster von 240 Sekunden. Zeigen die Fensterlänge des gleitenden Durchschnittsschwelle für die Analyse in der AD Dauer Threshold - Panel.
5. Stellen Sie einen SBP umgesetzt Schwelle bei 20 mmHg über dem gleitenden Durchschnitt Basislinie. Geben Sie den Transpositionswert in der Moving Average Threshold Trans BP - Panel.
6. Isolieren SBP peak Cluster, die die transponierte Schwelle mit einem Peak überschreiten Intervalls zu Peak weniger als 2 sec und für eine Dauer von mehr als 10 sec. Geben Sie den Spitzenintervall der Interpeak Intervall BP mit und duRation Intervall , das die Spitzencluster - Intervall BP - Panels verwendet.
7. Gruppe SBP peak Cluster, die innerhalb von 120 sec voneinander sind.
   Hinweis: Erkannte Potential AD Ereignisse, die innerhalb von 120 sec voneinander würde als ein einziges Ereignis gruppiert werden. Geben Sie die maximale Dauer zwischen aufeinanderfolgenden SBP Cluster erlaubt separaten AD Ereignisse im AD Dauer Threshold Panel unterscheiden.
8. Bestätigen Sie, wenn Gruppe von SBP Spitzencluster mit einem möglichen spontanen AD Ereignis verbunden sind durch einen Rückgang der HR von 40 bpm oder mehr zu erkennen.
   1. Durchschnittlich 10% der HR - Werte bei Beginn des möglichen Ereignisses (geben Sie diesen Prozentsatz in der oberen Herzfrequenz durchschnittliche Reichweite Teil nicht fallen). Durchschnittlich 75% der Herzfrequenzwerte vom Ende des möglichen Ereignisses (geben Sie diesen Prozentsatz im unteren Herzfrequenz durchschnittliche Reichweite Teil nicht fallen).
   2. Ziehen Sie den unteren Herzfrequenz-Schwelle von der höheren Herzfrequenz Schwelle, um eine entspre, um sicherzustellen,ding Abfall von 40 bpm oder mehr. Geben Sie die Tropfen Einschränkung der Herzfrequenz , die Herzfrequenz Drop Einschränkung Panel.
9. Sobald die Platten gefüllt worden sind, drücken Sie OK. Eine grafische Darstellung der erfassten AD Ereignisse vorgestellt, die die Spitzen in der SBP und der zugehörigen HR - Daten (4C-D) umfassen. Ein Ausgang Excel-Datei ist auch mit dem Druckantwort (mmHg), Dauer (sec), max systolischen Blutdruck (mmHg), Mindest HR (bpm) und HR-Drop (bpm) jedes erfaßten AD-Ereignis erzeugt.

4. Colorectal Aufdehnung zu Absichtlich AD Elicit

Hinweis: Die Schwere der induzierten AD kann durch kolorektalen Aufblähung (CRD) bestimmt werden, einem klinisch relevanten Reiz, der den Darm Routine ^3,18,19 nachahmt.

1. Überprüfen Sie den Ballon eines Französisch-Katheter (gerade, 10 Französisch, 3 ml, 35 cm, latexfrei) undicht ist nicht indem sie sie mit 2 ml Luft aufpumpen.
2. Verhalt the Tier durch in ein Handtuch wickeln und damit BP und HR für eine halbe Stunde zu stabilisieren.
3. Platzieren Schmiermittel auf der Spitze des Katheters. Eine Markierung auf dem Katheter mit einem Permanent-Marker, 2cm von der Mitte des Ballons. Der Katheter wird über den Anus in den Dickdarm eingeführt, bis die Markierung an der Öffnung gerade noch sichtbar ist. Sichern Sie den Katheter an den Schwanz mit chirurgischen Band. Re-Ort der umhüllte Tier in seinem Käfig auf dem Empfänger SmartPad Anpassung der implantierten Wandler im Inneren des Tieres ausgebracht. Lassen Sie das Tier BP für 10 min zu normalisieren.
4. Nach dem Einsetzen des Katheters und der zugehörigen Akklimatisierungszeit (dh, 10 min), um den Ballon infundiert mit 2 ml Luft über 10 sec, ermöglichen , BP und HR zu stabilisieren. Pflegen Aufblähung für 1 min. Sicherstellen, dass die Spitze des Katheters in das Rektum bleibt. Es ist wichtig , nicht zu über aufblasen den Ballon (dh 3 ml +), um Bruch des Dickdarms zu vermeiden.
   Anmerkung: Distension für eine Dauer von 1 min &# 160; ermöglicht angemessene Zeit für die Entwicklung der Druckantwort und dem Barorezeptor vermittelten HR Abfall assoziiert mit einer induzierten Folge von AD. Darüber hinaus ist diese 1 min Zeit bietet auch genügend Zeit für eine Normalisierung der kardiovaskulären Indizes.
5. Wiederholen Sie Aufblähung 3 mal pro Versuch, Versuche täglich mit einem Mindestabstand von 10 Minuten zwischen Versuchen zu wiederholen. Nach Einschätzung abgeschlossen ist, entfernen Sie aus dem Tier der Foley-Katheter.
6. Durchschnittliche Beat-by-Beat-Daten über 1 Sekunden-Intervallen und die maximale Erhöhung der SBP und maximale Abnahme der HR über mehrere Studien berichten.

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Ergebnisse

Verwendung von Telemetrie, arterieller Blutdruck wird während 24 h bei einer Frequenz von 1.000 Hz kontinuierlich abgetastet. Ein veranschaulich Aufzeichnung des arteriellen Blutdruck (ABP) unter Verwendung LabChart ist in 1B gezeigt. Die Probe ABP wurde durch ein Festkörper-Drucksensor in die Aorta descendens eingeführt überwacht. Die neue Java - Plattform AD - Detection - Software ist in der Lage relevante SBP (mmHg) Spitzen (1C) zu extrahieren. Wir können auch die HR (bpm) aus d...

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Diskussion

Das Protokoll beschreibt eine detaillierte Implementierung einer neuen Java - Plattform AD - Detection - Software , die mit einem Telemetrie - Gerät kombiniert werden würde, für eine langfristige gründliche Analyse von ABP in SCI-Tieren (1B). Dies ist die erste Software, die für die Charakterisierung von ABP Mustern ermöglicht spontane AD Ereignisse zu erkennen, da sie nur sporadisch während der gesamten Dauer des Tages auftreten. Eine gut charakterisierte T3 SCI Tiermodell kann die Funktionsfäh...

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Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
11 Male Wistar Rats -Hsd-WI (250-300g)	Envigo (formerly Harlan Laboratories)	141
Lab Chart (PowerLab® Data Acquisition System)	AD Instruments
Pressure Telemeter	Millar Inc.	RP-TRM54P
Configurator	Millar Inc.	TR190
SmartPad	Millar Inc.	TR180
Isoflurane (Aerrane)	Baxter Corp.	DIN: 02225875
Enrofloxacin (Baytril)	Bayer Healthcare	DIN: 02169428
5-0 Silk Sutures	Ethicon	S182
4-0 Vicryl Subcuticular	Ethicon	J496G
Buprenorphine (Temgesic)	Reckitt Benckiser	DIN: 0281250
Bupivicaine Hydrochloride (Marcaine 0.5%)	Hospira Healthcare Corp.	DIN: 02305909
Ketoprofen (Anafen)	Merial	DIN: 02150999
Ketamine Hydrochloride (Vetalar)	Bioniche	DIN: 01989529
Dexmedetomidine Hydrochloride (Domitor)	Pfizer	DIN: 02333929
Lactated Ringer's Solution	Braun Medical Inc.	DIN: 01931636
Gelfoam #12	Pharmacia & Upjohn Company	03603-14-1
Microscissors	Fine Science Tools	15003-008
Iris Spatulae	Fine Science Tools	10094-13
10 French 35 cm Foley Catheter	Coloplast	AA6110
Dietgel®	Clear H2O, Westbrook, ME	76A
LabDiet Rodent Diet 5001	Purina Mills (PMI®)	5001
Chlorhexadine (Hibitane)	Wyeth Animal Health, Guelph, Ontario	DIN 00245097
Atipamezole Hydrochloride(Antisedan)	Orion Pharma	DIN: 02237744