Die vollständige und aktualisierte "Rädertier Polyculture-Methode" für die Aufzucht Erste Fütterung Zebrafisch

Zusammenfassung

Larval zebrafish are adapted to feed on zooplankton. It is possible to capitalize on this natural feature in the laboratory by growing first feeding fish together in the same system with live saltwater rotifers. This "polyculture" strategy promotes high growth and survival with minimal labor and disturbance to the larvae.

Zusammenfassung

The zebrafish (Danio rerio) is a model organism of increasing importance in many fields of science. One of the most demanding technical aspects of culture of this species in the laboratory is rearing first-feeding larvae to the juvenile stage with high rates of growth and survival. The central management challenge of this developmental period revolves around delivering highly nutritious feed items to the fish on a nearly continuous basis without compromising water quality. Because larval zebrafish are well-adapted to feed on small zooplankton in the water column, live prey items such as brachionid rotifers, Artemia, and Paramecium are widely recognized as the feeds of choice, at least until the fish reach the juvenile stage and are able to efficiently feed on processed diets. This protocol describes a method whereby newly hatched zebrafish larvae are cultured together with live saltwater rotifers (Brachionus plicatilis) in the same system. This polyculture approach provides fish with an "on-demand", nutrient-rich live food source without producing chemical waste at levels that would otherwise limit performance. Importantly, because the system harnesses both the natural high productivity of the rotifers and the behavioral preferences of the fish, the labor involved with maintenance is low. The following protocol details an updated, step-by-step procedure that incorporates rotifer production (scalable to any desired level) for use in a polyculture of zebrafish larvae and rotifers that promotes maximal performance during the first 5 days of exogenous feeding.

Einleitung

Der Zebrafisch (Danio rerio) ist ein herausragender Labortier in einer wachsenden Zahl von wissenschaftlichen Disziplinen verwendet, einschließlich, aber nicht Entwicklungsgenetik, Toxikologie, Verhalten, Aquakultur, Regenerationsbiologie und der Modellierung von vielen menschlichen Erkrankungen ¹ begrenzt ^{- 5.} Obwohl die Spezies ist relativ einfach im Labor zu erhalten, gibt es eine Anzahl von Management-Herausforderungen mit ihrer Kultur ⁶ verbunden. Der prominenteste von ihnen ist Larvenaufzucht, vor allem, wenn der Fisch zuerst beginnen zu füttern im Anschluss an Gasblase Inflation ^7. Unter normalen, kontrollierten Bedingungen erfolgt diese Entwicklungs Ereignis bei ~ 5 Tage nach der Befruchtung (DPF), mit den folgenden 3-5 Tagen Wachstum besonders kritisch ^7. Die zentrale technische Schwierigkeit in dieser Phase ist es, die ernährungsphysiologischen Anforderungen der ersten Fütterung Larven adäquat zu begegnen - Futterteile müssen von geeigneter Größe sein, Digesvereinbar, attraktiv, und auf einem nahezu kontinuierlichen Basis, ohne dass übermäßige Abfälle in Kultivierungstanks. Historisch gesehen hat sich in der Regel durch die Bereitstellung von zahlreichen kleinen Futtermengen, um die Fische in Tanks, zusammen mit Routine Wasseraustausch ^8,9 erreicht. Während diese Methoden sind zu einem gewissen Grad erfolgreich, sind sie ineffizient, erfordern einen hohen Arbeitseinsatz, und kehren nur variabel und begrenzten Wachstumsraten und Überlebensrate ^10.

In der Natur, Zebrafisch-Larven ernähren sich vermutlich in der Wassersäule ¹¹ reichlich kleines Geschenk Zooplankton. Aus diesem Grund larviculture Protokolle, die Live-Feeds, wie Paramecium, Rädertierchen und Artemia übernehmen in der Regel die effizienteste ^7. Im Jahr 2010, Top und Co-Autoren gezeigt, dass es möglich war, Larven Zebrafisch in statischen, Brackwasser sowie Salzwasserrädertierchen für die ersten 5 Tage exogene Fütterung ¹² wachsen. Dieser Ansatz, der nutzbares die natürliche hohe Produktivität der Rädertierchen Kulturen zu reichlich, sehr nahrhaft Beute belasten das Wasser nicht zu schaffen, die Renditen sehr hohe Larven Wachstum und Überleben mit niedrigen Arbeitseinsatz ^12,13. In den letzten Jahren haben immer mehr Labors auf der ganzen Welt Variationen dieses Protokoll anzuwenden sind, und viele jetzt Kultivierung Rädertierchen in einer kontinuierlichen Weise in den Kindergarten-Systeme ¹⁴ zu unterstützen.

In den vergangenen Jahren wurden Methoden für die beiden Rädertierchen / Zebrafisch polyculture und Rädertierchen Produktion verfeinert und verbessert, um mehr standardisiert und leicht skalierbar sein. Dieser Artikel enthält Schritt-für-Schritt-Anleitungen für 1) stetig und robust Rädertierchen Produktion und 2) die Einrichtung der Rädertierchen / Zebrafisch Polykultursystems verwendet werden, um ein robustes Wachstum der Fische für die ersten 5 Tage von exogenen Zuführung zu unterstützen.

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Protokoll

1. Rädertier Kultur

1. Grundkomponenten eines Kultursystem mit einem 100 l Kulturgefäß
   1. Sammeln Sie alle Komponenten für die Rädertierchen Kultur Setup. Die Rotatorien Kultur Aufbau besteht aus einem Kulturgefäß (CV), um die Rotatorien wachsen; ein ähnliches Gefäß Zuführkopf Rädertierchen (Zuführkopf Kulturgefäß, FCV) aufrecht zu erhalten; ein Rundbrut jar (Feed-Reservoir, FR) für die Lagerung der Algen Futtermischung (AFM); eine Luftzufuhr (AS), um den Lebenslauf, FCV und der FR belüften; eine peristaltische Pumpe mit einem Messtimer (PMT), die Lieferung von Algen Zufuhr in den Lebenslauf und FCV zu steuern; und eine Zahnseide Partikelfilter (FPF), die innerhalb der CV sitzt.
      HINWEIS: Eine vollständige Liste mit Verbrauchsmaterialien und Komponenten in der Materialliste zur Verfügung gestellt.
2. Konfiguration
   1. Heben die CV und FCV auf einem Ständer oder Tisch, so dass die Kulturen können bequem über eine Ablaufarmatur in einer Sammlung cont geerntet werdenainer (Abbildung 1). Verwenden flexible Luftzufuhrschlauch an den AS zu einer Länge von starren Rohr in jedem Kulturgefäß zu verbinden. Stellen Sie sicher, dass der Schlauch lang genug ist, um Luft in den Boden des CV oder FCV zu liefern.
   2. Verwenden Sie einen kleinen Leistungsluftleitung, um die AS auf eine Länge von starren Rohrleitung, die auf dem Boden der FR, die die AFM enthält sich zu verbinden. Installieren Sie ein Ventil in jedem Luftlinie um den Luftstrom zu regulieren. Verbinden Sie den FR in die PMT mit Futterförderrohr, und führen Sie den Schlauch von der PMT in ein Loch in der Seite des CV / FCV gebohrt, in der Nähe der Spitze. Abbildung 1.
3. Anfang
   1. Füllen Sie das Kulturgefäß zu 90% des verfügbaren Volumens mit Umkehrosmose (RO). Wenn RO nicht verfügbar ist, verwenden Sie saubere, dechloriert kommunale Wasser; jedoch sollte ein biosecurity Risikobewertung durchgeführt werden, damit keine potentiell pathogenen Organismen im Quellwasser vorhanden sind. HINWEIS: Eine solche Analyse durchgeführt werden kannvon jedem qualifizierten Wasser Prüflabor.
   2. Dosieren Sie das Kulturgefäß mit Wasser Aquarium Salz in einem Salzgehalt von 15 g / l zu erreichen. Gesetzt den Luftstrom in das Gefäß, so daß sie eine "roll boil" aufrechterhält und dann langsam die gemessene Menge an Salz zu dem Kulturgefäß, bis sie vollständig durch die Belüftung gelöst. Weiterhin Belüften des Wassers für> 1 h, um sicherzustellen, dass sie vollständig mit Sauerstoff angereichert wird.
   3. Machen Sie das Algenfuttermischung. Bis 3 l sauberem, frischem dechloriert (0 ppm) Wasser mit 100 g NaHCO _{3 und 100} g Ammoniakneutralisationsmittel (Natrium hydroxymethylsulfonat). Diese letzte Reagenz bietet den zusätzlichen Vorteil, jede gegen restlichem Chlor aus dem Leitungswasser oder Bleich Rückstände aus Desinfektionskulturtechnik. Es ist entscheidend, um sicherzustellen, daß diese Verbindungen vollständig gelöst. Dann fügen Sie 1 l Algenkonzentrat (Biomasse Trockengewicht ~ 15%). Fügen Sie die Futtermischung an den FR und bei 4 ° C.
   4. Fügen Sie eine Starterkultur von 5-10000000 Brachionus plicatilis Rädertierchen mit dem CV mit dem belüfteten 15 g / l Salzgehalt Wasser. Wenn die Rotatorien haben während des Transports oder der Lagerung gekühlt worden ist, sollten sie nur langsam (während 30 min oder länger), um die Temperatur des Wassers in dem Kulturgefäß akklimatisiert (25-27 ° C).
   5. Schalten Sie das PMT und beginnen Pumpen des Algen-Feed in das Rädertierchen Kulturgefäß. Verwendung des Zeitgebers Merkmal der PMT, setzen die Förderrate der Algen Futtermischung, so daß ~ 1,6 ml Algenbeschickungsmischung pro Million Rotatorien in der Kultur pro Tag geliefert. Verteilen der Fütterungen in kleinen Portionen in regelmäßigen Abständen über den Verlauf eines 24-Stunden-Zeitraum; desto häufiger Fütterungen, desto besser.
   6. Kalibrieren der Fördermenge der Pumpe durch manuelles Einschalten der PMT für einen bestimmten Zeitraum (beispielsweise 1 min) und sammle die Algen, die es während dieser Zeit in einen Messzylinder oder Becherglas pumpt. Zum Beispiel, wenn die PMT Dosen 5 ml von Algen in 1 min, dann wird die Dosisleistung wäre5 ml Algen / min.
   7. Berechnen Sie die erforderliche tägliche Förderrate durch Multiplikation der Zahl der anwesenden Rädertierchen, in Mio., um 1,6 ml. Zum Beispiel würde ein rotifer Kultur mit einer Populationsgröße von 100 Millionen Rotatorien ~ erfordern 160 ml Futter pro Tag (100 x 1,6 ml).
   8. Stellen Sie die PMT, um die gesamte tägliche Futterbedarf in regelmäßigen Abständen während einer 24-Stunden-Zeitraum zu dosieren. Zum Beispiel könnte Lieferung einer gesamten täglichen Futtermenge von 160 ml in Portionen zugeführt werden, wenn alle 3 h über einen Zeitraum von 24 h unter Verwendung einer PMT Set mit einer Dosierpumpe Geschwindigkeit von 5 ml / min für 4 min, 8 Mal täglich (5 ml / min x 4 min = 20 ml x 8 Fütterungen = 160 ml).
   9. Lassen Sie die Kultur für 48 wachsen, bis es die gewünschte Population erzeugt, in der Regel - 72 h vor der Ernte. Bei 24 Stunden nach der Inbetriebnahme, die Zahnseide Partikelfiltern in den Kulturgefäß und beginnen normale Wartung.
4. Instandhaltung
   HINWEIS: Die Kultur arbeitet auf einer kontinuierlichen Basis und erfordert routine Wartung, die im Idealfall zur gleichen Zeit jeden Tag durchgeführt werden, in der folgenden Reihenfolge.
   1. Füllen Sie den FCV zu 90% der zur Verfügung stehende Volumen mit sauberen, dechloriert frisches Wasser, mit 10 g / l Aquarien Salze dosiert. Sicherzustellen, daß das Wasser gut vermischt, und das gesamte Salz völlig aufgelöst ist. Stellen Sie den Luftstrom in den Behälter, so dass es eine "rollenden kochen" unterhält. Messen Sie den Salzgehalt mit einem Refraktometer und sicherzustellen, dass der Salzgehalt 10 g / l. Es ist kritisch, um dieses Ziel zu erreichen und es nicht zu überschreiten.
   2. Probieren Sie die Rädertierchen im Lebenslauf: Stellen Sie sicher, dass die Kultur ist gut gemischt, dann sammeln Sie 3 Proben eines 2 - 3 jeweils mit einer Transferpipette oder autopipettor ml, aus verschiedenen Teilen der Kultur. Kombinieren Sie diese Proben in einem Rohr oder Fläschchen praktische Größe (zB 10 ml).
   3. Transfer 1-2 ml der kombinierten Probe auf eine Petri-Schale, so dass es unter einem Präpariermikroskop visualisiert werden. Prüfen Sie die Qualität der Kultur (Schwimmverhalten derRädertierchen, Gegenwart abgelöst Eier, verunreinigen Protozoen).
   4. Immobilisieren Rotiferen in dem verbleibenden kombinierten Probe durch Zugabe von 100 ul 50% Lugols Jodlösung auf die Probe. Innerhalb von Sekunden nach der Zugabe der Lugols, beachten Sie die Rädertierchen zum Schwimmen zu stoppen. Nun, leicht zu zählen die Rädertierchen.
      HINWEIS: Ethanol, verdünnte Bleichmittel, oder Essig kann anstelle von Lugols verwendet werden. Essig (2 Tropfen / 10 ml) hat den Vorteil, dass nicht gefährliche, Stärke nicht zu verlieren bei der Lagerung als Bleich und Jod-Lösungen, und nicht die Herstellung der Rädertierchen Vertrag, so dass die Korona der Zilien und der "Fuß" bleiben ausgefahren und der Tiere natürlicher aussehen.
   5. Stellen Sie sicher, dass die Probe gut gemischt (immobilisiert Rotatorien schnell absetzen), dann schnell einen ~ 2 ml Teilprobe in einer Plastikpipette und verzichten 1 ml in ein Sedgewick-Rafter Zählen Schieber (20 x 50 1-mm-Quadrate) (Abbildung 2 ). Mit Hilfe eines Sezieren oder zusammengesetzten Mikroskop, zählen Sie die intakte Rädertierchen und die tesamtanzahl Eier auf diese Rotatorien befestigt (Figur 2). Zählen Sie so viel von der Folienbereich wie nötig, um zu zählen ~ 100 Rädertierchen. Berechnen Sie die Anzahl der Rädertierchen pro ml, und notieren Sie diese in einer Tabellenkalkulation oder Logbuch.
   6. Ernte ~ 30% des Volumens der Rädertierchen im Lebenslauf: Entfernen Sie die Luftversorgung und Zahnseide-Filter, das Ventil zu öffnen langsam an der Unterseite des CV und lassen Sie das Wasser in eine Planktonkollektor mit einer 53 & mgr; m Sieb fließen. Sammeln das Wasser nach der Filterung in einen Eimer oder Drain aus der Unterseite des Kollektors fließt. Verwenden Sie einen sanften bis mäßige Strömung um eine Beschädigung der Rädertierchen. Erlauben nicht den Rädertierchen, um auf dem Bildschirm zu trocknen.
   7. Aus Gründen der Einheitlichkeit ist es ratsam, das FCV mit einem Standard-Anzahl von Rädertierchen jeden Tag zu schaffen. Daher basierend auf der bekannten CV rotifer Dichte und Erntevolumen, einstellen FCV Gesamtvolumen auf eine konsistente Enddichte zu erreichen (z. B. 1.500 Rotatorien / ml). Fügen Sie die geerntet rotifers an den FCV: Behutsam die Rädertiere übertragen aus der Sammlung Bildschirm mit Hilfe einer Waschflasche mit sauberem Salzwasser gefüllt (10 bis 15 g / l). Kehren Sie die Bildschirm über den FCV und waschen Sie die Rädertierchen in den FCV mit einem sanften Strom von Salzwasser. Starten Sie das PMT zur Einspeisung in den FCV liefern (~ 1,57 ml pro Million Rädertiere pro Tag).
   8. Scrub die gesamte Innenseite der CV mit einem sauberen, weichen Nylonbürste oder Scheuerpad.
   9. Stellen Sie eine neue Mischung aus 15 g / L Wasser durch Zugabe der entsprechenden Menge des Salzes zu einer gemessenen Menge an sauberem RO-Wasser in einem 5-Gallonen-Eimer zu ersetzen, das Volumen des Wassers verloren bis zur Ernte. Fügen Sie das Salz in das Wasser in den Eimer und rühren Sie kräftig, bis es vollständig gelöst ist, und dann an den CV hinzuzufügen.
   10. Mit Hilfe eines Hochdruck-Spray in einer Spüle, spülen Sie die Filterwatte, bis es frei von Abfall, und dann schicken Sie es an die CV.
   11. Passen Vorschubgeschwindigkeiten von Algen an den CV durch Änderung der Dauer der einzelnen Dosierereignis geliefert, nach dem Tageszahl von Rädertierchen / ml.Verwenden der Berechnungen in Schritt 1.3.8 vorgesehen ist, über die entsprechende Futtermenge zugeführt werden zu bestimmen.
   12. Etwa 24 Stunden später, wiederholen Sie den Vorgang. Starten durch Ernten der in der FCV (die nicht für den vorherigen Tag wurden benötigt) verbleibenden Rotatorien in der gleichen Weise wie oben beschrieben (Schritte 1.4.2 - 1.4.10). Konzentrieren sie in 2 l frischem, sauberem entchlortes Wasser (5 g / l Salz). Diese können bei 4 ° C als Sicherungsteil gespeichert werden, oder zur späteren Stadien von Fischfutter, das hinaus, was in diesem Protokoll beschrieben.
       Hinweis: Dieses Protokoll erlaubt bis zu 2 - 3 Tage von reduzierten Kulturpflege (mit normaler automatischer Zuführung), da die Rädertierchen in der CV können Unterlassung der Ernten ohne schwerwiegende Folgen zu tolerieren.

2. Polyculture

1. Konfiguration
   1. Sammeln Zebrafischembryonen aus einem Laichereignis durch Gießen hervorgebracht Embryonen durch ein Teesieb und dann sanft Spülen mit sterilem fish Wasser (oder einem anderen nicht-kontaminierten Quelle entsprechend aufbereiteter Lösung, zB Embryomedium, E3, etc.) aus einer Waschflasche in Petrischalen.
   2. Die Embryonen bei 25 inkubieren - 28 ° C in Petrischalen in einer Dichte von 40 - 50 Embryonen pro Schale für 5 Tage.
   3. Beginnen Sie den polyculture Phase am 5. Tag nach der Befruchtung, oder wenn mehr als 90% der geschlüpften Larven aktiv schwimmen in der Wassersäule.
2. Impfung
   1. In 500 ml Rädertierchen Kultur direkt von der FCV zu einem 3,5 L Kindergarten Tank; Einbeziehung von Rädertierchen Kulturwasser bietet Algen Feed, den Nährstoffgehalt der Rädertierchen in polyculture hält.
   2. Gießen Sie vorsichtig die Larven aus einer Petrischale in die Kinderstube Tank. Stellen Sie sicher, dass keine Larven in der Schale bleiben.
   3. Gib 500 ml sauberem, konditioniert Fischwasser aus einem Kreislaufsystem oder dedizierten Wasserquelle zu dem Behälter, um ein Endvolumen von 1 l und eine endgültige s erreichenalinity von 5 g / L.
      HINWEIS: Dieser Salzgehalt ist kritisch, weil Zebrafischlarven überleben wird negativ beeinflusst, wenn Salzgehalt> 7 g / l und Rädertierchen Überleben wird negativ beeinflusst werden, wenn Salzgehalt <2 g / L.
3. Polyculture Phase
   HINWEIS: Die Polykultur Phase sollte für bis zu 4 Tage nach der Inokulation dauern (insgesamt 5 Tage, entsprechend 5-9 Tage nach der Befruchtung).
   1. Mindestens einmal pro Tag während dieser Zeit beobachten die Polykultur Tank um sicherzustellen, dass Rädertiere und Fisch anwesend und wachsen. Stellen Sie sicher, dass die Rädertierchen in der gesamten Wassersäule sichtbar sind. Stellen Sie sicher, dass die die fishs sind auch sichtbar in der Wassersäule, Schwimmen unter den Rädertierchen.
   2. Starten normalen Wasserdurchfluss durch den Tank. Legen Sie einen Bildschirm oder Schallwand über die Ablauföffnung, dass die Larven zu gewährleisten sind nicht aus dem Tank ausgespült.
      HINWEIS: Am Ende dieser Phase, die Fische groß genug, um größere Beutetiere wie Artemia konsumierenNauplien oder verarbeitet werden Feed-Einträge in einem Größenbereich von 75 bis 125 & mgr; m.
      HINWEIS: Die rotifer Populationsdynamik innerhalb eines repräsentativen Polykultursystems Tank wurden durch Abtasten gemessen / gezählt Rotatorien vom Tank in der gleichen Weise wie in den Schritten 1.4.2 - 1.4.5. Dies wurde einmal pro Tag ab dem Beginn des Mischkultur Phase durchgeführt, bis sie abgeschlossen war.

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Ergebnisse

Die hier beschriebene kontinuierliche Rädertierchen Kultursystem ist dynamisch, und es ist normal, Rädertierchen Nummern zu einem geringen Teil im Laufe der Zeit schwanken, wenn Variationen in der täglichen Fütterung und Ernteraten. Die Bevölkerung der Rädertierchen in einem der aktiven Kulturen in den Aquakulturanlagen an der Boston-Kinderklinik, in der oben beschriebenen Weise gehalten wurde, wurde für 30 Tage (Abbildung 3) überwacht. Die Durchschnittskulturdic...

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Diskussion

Erfolgreiche Umsetzung der Rädertierchen polyculture Verfahren zum Zuführen frühen Larvenzebrafisch erfordert effektive Protokolle für zwei Aufgaben: die Schaffung und Aufrechterhaltung eines kontinuierlichen Rädertierchen Kultursystem, um die Fische zu füttern und das Züchten der ersten Fütterung Zebrafisch-Larven zusammen mit Rädertierchen in der gleichen Tank.

Die Einrichtung für eine kontinuierliche salz rotifer Produktionssystem für Laboratorien Zebrafisch zuerst von Lawrence...

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Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Rotifer Culture Infrastructure
100 L Culture Vessel	Aquaneering	Custom	Polycarbonate culture vessel, conical bottomed, with drain valve
5 Gallon Culture Bucket Kit	Reed Mariculture	CCS Starter Kit	Small volume culture vessel for small facilities
Rigid Clear Tubing 1/2" O.D., 36”	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Rigid clear tubing for air delivery
Mesh tube	Pentair Aquatic Ecosystems	RT444X	Mesh tube support for floss filter
Rotifer Floss	Reed Mariculture	Rotifer floss 12” x 42”	Particulate waste trap
Peristaltic Metering Timer Pump, 5 GPD	Grainger	38M003	Metering pump with timer for dosing feed to rotifers
Peristaltic Metering Timer Pump, 1-100 mL/hr (for smaller-scale culture)	Coral Vue	SKU: IC-LQD-DSR	Metering pump with timer for dosing feed to rotifers
Silicone Tubing	Cole Parmer		Tubing for algae delivery to rotifer vessel
Rigid Clear Tubing " O.D.,36”	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Rigid clear tubing for air delivery to algae paste
Rigid Clear Tubing O.D., 36”	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Rigid clear tubing for algae delivery
Rotifers
Live Rotifers Brachionus plicatilis Type L	Reed Mariculture	Type L 5 million	Rotifer stock culture for system startup
Rotifer Feed
Sodium hydroxymethylsulfonate	Reed Mariculture	ClorAm-X® 1lb tub	Ammonia reducer for algae feed mix
Sodium Bicarbonate	Fisher Scientific	S25533B	pH buffer for algae feed mix
Microalgae concentrate	Reed Mariculture	Rotigrow Plus® 1 liter bag	Nutritionally optimized rotifer feed
RG Complete	Reed Mariculture	RG Complete 6 oz bottle	All in one microalgae based feed for small scale cultures
Water Preparation
Reef Crystals Reef Salt	That Fish Place	198210	Salt for making culture water (NOTE: this item is an example only; any contaminant free salt formulations may be used).
Refractometer	Pentair Aquatic Ecosystems	SR6	measuring salinity
Rotifer Culture Equipment
Plankton Collectors 12" Dia, 53 microns	Pentair Aquatic Ecosystems	BBPC20	Mesh screen for collecting rotifers
Scrub Pads	Pentair Aquatic Ecosystems	SCR-58	Scrub pad for cleaning inside of culturing vessels
Scrub Brush
Bucket	Grainger Supply	43Y530	Graduated bucket for mixing culture water
Hatching Jar	Pentair Aquatic Ecosystems	J30	Storage of algae feed mix
Lugol’s Solution, Dilute	Fisher Scientific	S99481	Agent used to immobilize live rotifers for counting
Sedgewick-Rafter plankton counting slide with grid	Pentair Aquatic Eco-Systems	M415	Counting rotifers
Miscelleneous
Tea Strainer	Kitchenworks	971972	Used for collecting zebrafish embryos after spawning