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In diesem Artikel

  • Zusammenfassung
  • Zusammenfassung
  • Einleitung
  • Protokoll
  • Ergebnisse
  • Diskussion
  • Offenlegungen
  • Danksagungen
  • Materialien
  • Referenzen
  • Nachdrucke und Genehmigungen

Zusammenfassung

In diesem Protokoll wird die Synthese von Hülsen, ein Phenyoxadiazolyl Methyl Sulfon-basierte Reagenz für die Website-selektive Befestigung der Ladungen an die Thiole von Biomolekülen, insbesondere Antikörper beschrieben. Darüber hinaus beschreiben wir die Synthese und Charakterisierung von eine Hülsen tragenden bifunktionelle Chelator und die Konjugation zu einem Modell-Antikörper.

Zusammenfassung

Maleimide-Lager bifunktionelle Sonden sind seit Jahrzehnten für die Website-gezielte Modifizierung der Thiole in Biomolekülen, insbesondere Antikörper eingesetzt worden. Noch angezeigt Maleimide-basierte Konjugate begrenzten Stabilität in-vivo, da Succinimidyl-Thioether-Gestänge eine Retro-Michael-Reaktion unterzogen werden kann. Dies, führt natürlich zur Freisetzung von radioaktiven Nutzlast oder deren Austausch mit Thiol-Lager Biomoleküle im Umlauf. Beide Prozesse können erhöhte Aktivitätskonzentrationen in gesunde Organe produzieren sowie Aktivitätskonzentrationen in Zielgeweben, was zu reduzierten bildgebenden Kontrast und niedrigere therapeutische Werte gesunken. Wir berichteten im Jahr 2018, die Schaffung eines Modular, stabil und leicht zugängliche Phenyloxadiazolyl Methyl Sulfon Reagenz – genannt "PODS" – als Plattform für Thiol-basierten Bioconjugations. Wir haben klar gezeigt, dass PODS-basierte Website-selektive Bioconjugations reproduzierbar und robust homogen, klar definierte hoch immunreaktiven und hochstabiler Radioimmunoconjugates erstellen. Darüber hinaus haben präklinische Experimenten in murinen Modellen von kolorektalen Karzinomen gezeigt, dass diese Website selektiv Radioimmunoconjugates Ausstellung weit überlegen in-vivo-Leistung im Vergleich zu radioaktiven Antikörper synthetisiert über Maleimide-basierte beschriftet Konjugationen. In diesem Protokoll werden wir die vier-Stufen-Synthese von Hülsen, die Schaffung einer bifunktionelle Hülsen tragenden Variante des allgegenwärtigen Chelator DOTA (PODS-DOTA) und die Konjugation des PODS-DOTA, die HER2-targeting Antikörper Trastuzumab beschreiben.

Einleitung

Radiopharmazeutischen Chemiker haben lange ausgenutzt, die Selektivität und Spezifität der Antikörper nach Biomarkern der Krankheit für die beiden nuklearen Bildgebung und gezielte Strahlentherapie1. Abstand der häufigste Ansatz für die enzymatische Antikörper gründet sich auf die wahllose Befestigung des radioaktiven prosthetischen Gruppen oder Radiometal Chelatoren an Aminosäuren – meist Lysines – innerhalb der Struktur von Immunglobulin ( Abbildung 1A)2. Während diese Strategie sicherlich wirksam ist, kann naturgemäß zufällige, nicht-Site-spezifische Probleme verursachen. Insbesondere traditionelle Biokonjugaten Ansätze zu produzieren, schlecht definiert und heterogenen Immunokonjugate bestehend aus Mischungen von Tausenden von verschiedenen Regioisomeren, jeweils mit einem eigenen Satz von biologischen und pharmakologischen Eigenschaften3. Darüber hinaus kann zufällige Biokonjugaten Immunoreactivity von Antikörpern behindern, wenn die Ladung an der Immunglobulin Antigen-bindenden Domänen angehängt wird.

Im Laufe der Jahre eine Vielzahl von standortspezifischen und Website-selektive Biokonjugaten Strategien wurden entwickelt, um diese Probleme4,5ansprechen. Die häufigste dieser Ansätze stützt sich auf die Unterbindung der Maleimide tragenden Sonden, um die Sulfhydryl-Gruppen von Cysteine (Abbildung 1 b). IgG1-Antikörper enthalten von Natur aus 4 Inter Kette Disulfidbrücken, Verbindungen, die gezielt reduziert werden können, um in der Lage, Michael Hinzufügung Reaktionen mit Maleimides Succinimidyl Thioether Anleihen bilden derzeit kostenlos Thiole zu erbringen. Die Verwendung von Thiole und Maleimides ist sicherlich eine Verbesserung gegenüber herkömmlichen Methoden und eine Vielzahl von Maleimide tragenden Synthone und bifunktionelle Chelatoren sind derzeit verfügbar. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass diese Methode auch gravierende Einschränkungen hat. Maleimide-basierte Immunokonjugate aufweisen begrenzten Stabilität in-vivo, da Thioether Gestänge ein Retro-Michael-Reaktion (Abbildung 2)6,7,8,9, unterziehen kann 10., natürlich kann dies zur Freisetzung von radioaktiven Nutzlast oder deren Austausch mit Thiol-Lager Biomoleküle im Umlauf (z. B. Glutathion oder Serum-Albumin). Beide Prozesse können die Aktivitätskonzentrationen in gesunde Organe zu erhöhen sowie die Aktivitätskonzentrationen in Zielgeweben, was zu reduzierten bildgebenden Kontrast und niedrigere therapeutische Werte zu verringern. Mehrere alternative Thiol-reaktive Reagenzien sind entwickelt worden, in dem Bemühen, diese Fragen, namentlich Tosylates, Bromo und Iodo-Acetyl- und Vinyl Sulfonen11,12,13, zu umgehen 14 , 15 , 16 , 17. all diese Ansätze haben jedoch Einschränkungen, die ihre breite Anwendung behindert haben.

Vor fünf Jahren Pionier das Labor des späten Carlos Barbas III am Scripps Research Institute im Einsatz von Phenyloxadiazolyl Methyl Sulfonen als Reagenzien für die selektive Bildung von sehr stabile Verbindungen mit Thiole (Abbildung 1 und Abbildung 3) 18 , 19. die Autoren beschäftigt eine Phenyloxadiazolyl Methyl Sulfon-Lager Variante von Fluorescein, mehrere Antikörper entwickelt, um kostenlose Cystein Rückstände zu ändern Immunokonjugate letztlich höhere Stabilität als analog zu produzieren Konstruktionen mit Maleimide-basierte Sonden erstellt. Beim Anblick dieses vielversprechende Arbeit, waren wir etwas überrascht, dass diese Technologie nur kaum in Radiochemie verwendet worden hatte und noch nicht wurde überhaupt in der Synthese von bifunktionelle Chelatoren oder Radioimmunoconjugates20,21 verwendet hatte . Dieser Mangel an Anwendungen, jedoch bald fing an, mehr Sinn machen: mehrere Versuche zur Beschaffung von Reagenz von Sigma-Aldrich führte bei der Auszahlung der komplexe Mischungen von Zersetzungsprodukten mit < 15 % der gewünschten Verbindung. Darüber hinaus Synthese der gemeldeten Reagenz selbst war keine realistische Option, da die veröffentlichten Syntheseweg etwas umständlich ist und anspruchsvolle organische Chemie Geräte erfordert, die meisten Radiochemie und molekulare Bildgebung Labors – einschließlich der unsrigen — einfach nicht besitzen.

In Reaktion auf diese Hindernisse brachen wir erstellen eine leicht zugängliche und hochstabiles Phenyloxadiazolyl Methyl Sulfon Reagenz, der über einen robusten und relativ einfache Syntheseweg erzielt werden kann. Anfang des Jahres berichteten wir die Schaffung eines Modular, stabil und leicht zugängliche Phenyloxadiazolyl Methyl Sulfon Reagenz – genannt "PODS" – als Plattform für Thiol-basierte Bioconjugations (Abbildung 1 und Abbildung 3)22. Der wesentliche Unterschied zwischen Hülsen und das Reagenz von Barbas, berichtet ist Et Al., dass ersteres einen Anilin Ring befestigt Phenyloxadiazolyl Methyl Sulfon glyko-beschäftigt, während letztere verfügt über ein Phenol in der gleichen Position (Abbildung 4). Diese Änderung ermöglicht eine einfache und zugängliche Syntheseweg sowie – wenn unsere Erfahrung mit den im Handel erhältlichen Verbindung emblematischen ist — ein stabiler endgültige Reagenz. In dieser Arbeit haben wir auch ein paar Hülsen tragenden bifunktionelle Chelatoren synthetisiert — Hülsen-DFO und Hülsen-CHX-A''-DTPA – die Schaffung von 89Zr- und 177Lu-mit der Bezeichnung Radioimmunoconjugates bzw. zu erleichtern. Wie wir diskutieren werden, haben wir bewiesen, dass PODS-basierte Website-selektive Bioconjugations reproduzierbar und robust homogen, klar definierte hoch immunreaktiven und hochstabiler Radioimmunoconjugates erstellen. Darüber hinaus haben präklinische Experimenten in murinen Modellen von kolorektalen Karzinomen gezeigt, dass diese Website selektiv Radioimmunoconjugates Ausstellung in-vivo Höchstleistungen im Vergleich zu radioaktiven Antikörper synthetisiert über Maleimide-basierte beschriftet Konjugationen.

Das übergeordnete Ziel dieser Arbeit ist die Erstellung von klar definierten, homogene, hochstabile und hoch immunreaktiven Immunokonjugate für in-vitro- und in-vivo Anwendungen zu erleichtern. Der synthetischen Ansatz ist einfach genug, um in fast jedem Labor durchgeführt werden, und das übergeordnete PODS Reagenz kann mit einer Vielzahl von verschiedenen Chelatoren, Fluorophore oder Ladungen geändert werden. In diesem Protokoll und das dazugehörige Video beschreiben wir die einfache, vierstufiges Synthese von Hülsen (Abbildung 5); die Schaffung einer Hülsen tragenden Variante von DOTA, eine weit verbreitete Chelator für die Koordinierung der 64Cu, 68Ga 111In 177Lu und 225Ac (Abbildung 6); und die Biokonjugaten von Hülsen-DOTA an einem Modell Antikörper, die HER2-targeting IgG1 Trastuzumab (Abbildung 7).

Protokoll

(1) die Synthese von 4-[5-(methylthio)-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-aniline (1)

Hinweis: Aufgrund der Lichtempfindlichkeit der Verbindung, halten Sie alle Reaktionen in Gefäßen mit Folie abgedeckt.

  1. In einer 10 mL Runde untere Kolben, 100 mg (0.517 Mmol, 1 Äquivalent) 5-(4-aminophenyl)-1,3,4-oxadiazole-2-thiol in 3 mL Methanol auflösen.
  2. Diese Projektmappe hinzufügen 360 μL der Diisopropylethylamine (DIPEA; 2,07 Mmol; 4 Entsprechungen; wasserfrei) und eine kleine magnetische Stir Bar. Decken Sie die Flasche mit einem Gummistopfen und rühren Sie die Lösung für 10 Minuten bei Raumtemperatur.
  3. Mit einer 1 mL-Glas-Spritze, poke ein Loch durch den Gummistopfen und 32 μL (0.517 Mmol, 1 Äquivalent) der Iodomethane schnell zu dieser Mischung hinzufügen. Lassen Sie die Mischung für 45 Minuten bei Raumtemperatur zu reagieren.
    Hinweis: Aufgrund der möglichen schädlichen Auswirkungen von Iodomethane sollte diese Reaktion in einem chemischen Abzug erfolgen.
  4. Das Wasserbad einen Drehverdampfer auf 40 ° C und reduzieren Sie langsam den Druck, die Lösungsmittel um ein weißer Feststoff leisten zu entfernen.
  5. Lösen Sie der Feststoff in 3 mL Ethylacetat auf und waschen Sie mindestens dreimal mit einer 5 mL Lösung von 0,1 M Natriumcarbonat mit einem separatory Trichter.
    Hinweis: In regelmäßigen Abständen nehmen Sie vor Ort-Tests von der wässrigen Phase unter einer UV-Lampe; Sobald nichts unter der Lampe zu sehen ist, können Sie die Waschungen beenden.
  6. Die organische Phase in einem separatory Trichter zu sammeln und mit Wasser waschen, bis der pH-Wert der wässrigen Phase 6,8-7,0 erreicht (mit pH-Papier).
  7. Die organische Phase sammeln und Magnesiumsulfat entfernen Sie alle Spuren von Wasser hinzufügen.
    Hinweis: Die Magnesium-Sulfat sollte mit einem kleinen Spatel hinzugefügt werden, wonach die Lösung verwirbelt werden sollte. Wenn Feinpartikel des Trocknungsmittels noch zu sehen sind, ist die Lösung trocken. Wenn dies nicht der Fall ist, fügen Sie kleine Mengen von Magnesium-Sulfat, bis feine Partikel gesehen werden können.
  8. Filtern Sie das Gemisch mit einem mittleren Glasfritte oder Filterpapier.
  9. Verdampfen Sie die flüchtigen Bestandteile mit Drehverdampfer, ein Prozess, der das gewünschte Produkt als weiße Nadeln produzieren sollte.

(2) die Synthese von Tert-butyl[18-({4-[5-(methylthio)-1,3,4-oxadiazol-2-yl]phenyl}amino)-15,18-dioxo-4,7,10-trioxa-14-azaoctadecyl] Carbamat (2)

Hinweis: Aufgrund der Lichtempfindlichkeit der Verbindung, halten Sie alle Reaktionen in Gefäßen mit Folie abgedeckt.

  1. In einer 25 mL Runde untere Kolben, Auflösen von 387 mg (0,92 Mmol, 1,0 Äquivalent) NBoc-N′-Succinyl-4,7,10-Trioxa-1,13-Tridecanediamine in 10 mL Dichlormethan.
  2. Diese Projektmappe hinzufügen 480 μl (2,76 Mmol, 3 Äquivalente) von DIPEA, 264 mg (1,38 Mmol; 1,5-Äquivalente) N-Ethyl - N′-[3-(Dimethylamino) Propyl] Carbodiimide Hydrochlorid (EDCI) und 200 mg (0,97 Mmol, 1,1 Äquivalente) 1. Verschließen Sie das Gefäß mit einem Glasstopfen und lassen Sie die Reaktion für 5 Tage bei Raumtemperatur gerührt.
    Hinweis: Achten Sie auf die Verdunstung von Dichlormethan. Bei Bedarf fügen Sie mehr im Laufe der Woche.
  3. Waschen Sie die Mischung in einem separatory Trichter mit einer Lösung aus 1 M Salzsäure (3 x 5 mL).
  4. Die organische Phase sammeln und weiterhin in einem separatory Trichter, zuerst mit einer Lösung aus 1 M Na2CO3 (2 x 5 mL) und dann mit Wasser (3 x 5 mL) waschen.
  5. Die organische Phase sammeln und Magnesiumsulfat entfernen Sie alle Spuren von Wasser hinzufügen (siehe Schritt 1,7). Filtern Sie das Gemisch mit einem mittleren Glasfritte oder Filterpapier.
  6. Mit einem Drehverdampfer entfernen Sie die flüchtige Lösungsmittel unter vermindertem Druck zu einem Off-White Solid leisten.
  7. Wieder lösen Sie dieses solide in 10 mL Ethylacetat auf und auszufällen Sie das Produkt über die schrittweise (z.B. 2 mL zu einem Zeitpunkt) Zugabe von 30 mL Cyclohexan.
  8. Filtern Sie die Lösung mit Filterpapier oder eine mittlere Glasfritte, das Produkt als weißes Pulver zu erhalten.

(3) die Synthese von Tert-butyl[18-({4-[5-(methylsulfonyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl]phenyl}amino)-15,18-dioxo-4,7,10-trioxa-14-azaoctadecyl] Carbamat (3)

Hinweis: Aufgrund der Lichtempfindlichkeit der Verbindung, halten Sie alle Reaktionen in Gefäßen mit Folie abgedeckt.

  1. Lösen Sie in einem 10 mL Rundboden Kolben 30 mg (0,05 Mmol; 1 Äquivalent) 2 in 4 mL Dichlormethan auf.
  2. Langsam diese Mischung in 49 mg (0,2 Mmol; 4-Äquivalente) 70 % m-Chloroperbenzoic Säure hinzu und bedecken Sie den Reaktionsbehälter mit einem Glasstopfen. Rühren Sie die Lösung über Nacht bei Raumtemperatur, eine gelbe Mischung schließlich nachgeben.
  3. Waschen Sie die gelbe Mischung in einem separatory Trichter, zuerst mit einer 0,1 M NaOH (3 x 5 mL) und dann mit Wasser (3 x 5 mL).
  4. Die organische Phase mit Magnesiumsulfat getrocknet und die Mischung mit einem mittleren Glasfritte oder Filterpapier filtern.
  5. Mit einem Drehverdampfer entfernen Sie Lösungsmittel unter vermindertem Druck, das Produkt als blasse Feststoff zu erhalten.

(4) die Synthese von N1-(3-{2-[2-(3-aminopropoxy)ethoxy]-ethoxy}propyl)-N4-{4-[5-(methylsulfonyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl] Phenyl} Succinamide (PODS)

  1. In einer 25 mL Runde untere Kolben, 30 mg 3 in 2,0 mL Dichlormethan auflösen.
  2. Fügen Sie 400 μl Trifluoroacetic Säure und verschließen Sie die Flasche mit einem Glasstopfen.
  3. Rühren Sie die Reaktionsmischung bei Raumtemperatur 3 Stunden.
  4. Mit einem Drehverdampfer, entfernen Sie die flüchtigen Bestandteile unter vermindertem Druck bei Zimmertemperatur, eine ölige Rückstände.
  5. Den öligen Rückstand in 7 mL Wasser auflösen und mit einem separatory Trichter, waschen mit Ethylacetat (3 x 4 mL). Halten Sie die wässrige Schicht.
  6. Lyophilize der wässrigen Schicht zur PODS als weißes Pulver zu leisten.
    Hinweis: Die molare Absorption Koeffizienten für PODS bei 280 und 298 nm sind 9.900 und 12.400 zu cm-1M-1, beziehungsweise.

(5) die Synthese von Hülsen-DOTA

  1. In einem 1,5 mL Microcentrifuge Schlauch 10 mg der Hülsen in 300 μL der Dimethyl Sulfoxid (0.018 Mmol; 1 Äquivalent) auflösen und 26 μL von N, N-Diisopropylethylamine (0,15 Mmol; 8-Äquivalente) hinzufügen.
  2. Lösen sich 15,2 mg DOTA-Bn-NCS (0,02 Mmol; 1,2 Äquivalente) in 100 μl der Dimethylsulfoxide und kombinieren Sie diese Lösung mit der Lösung von Schritt 5.1. Versiegeln Sie den Microcentrifuge Schlauch.
  3. Lassen Sie die Reaktion auf über Nacht bei Raumtemperatur inkubieren.
  4. Reinigen Sie das Produkt mit Reverse-Phase C18 HPLC Chromatographie um nicht umgesetztes DOTA-Bn-NCS zu entfernen.
    Hinweis: Retentionszeiten sind natürlich stark abhängig von der HPLC-Ausrüstung für jedes Labor (Pumpen, Spalten, Schläuche, etc.), und entsprechende Kontrollen sollten vor der Reinigung ausgeführt werden. Jedoch, beispielsweise wenn ein Gefälle von 5:95 MeCN/H2O präsentieren (beide mit 0,1 % TFA) zu 70: 30 MeCN/H2O (beide mit 0,1 % TFA) über 30 min, eine semi-präparative 19 x 250 mm C18 -Spalte und einer Durchflussmenge von 6 mL/min werden verwendet , Hülsen, p-SCN-Bn-DOTA und Hülsen-DOTA wird Retentionszeiten von rund 14,4, 18,8 und 19,6 min, bzw. haben. Alle drei Verbindungen lässt sich bei 254 nm.

(6) die Biokonjugaten von Hülsen-DOTA zu trastuzumab

Hinweis: In diesem Schritt begannen wir mit einem 16,4 mg/mL Stammlösung von Trastuzumab.

  1. Verdünnen Sie in einem low-Protein Bindung 1,5 mL Microcentrifuge Schlauch 61 μL der Trastuzumab Vorratslösung (1 mg; 6,67 Nmol, 1 Äquivalent) mit 859 μL Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (pH 7,4).
  2. Diese Mischung fügen Sie 6,7 μL einer frisch zubereiteten 10 mM-Lösung von DÄMMUND in H2O (66,7 Nmol, 10-äquivalente hinzu).
  3. Bereiten Sie eine 1 mg/mL Lösung von Hülsen-DOTA in DMSO und das Reaktionsgemisch (66.67 Nmol, 10 Äquivalente) fügen Sie 73 μl dieser PODS-DOTA-Lösung hinzu.
  4. Microcentrifuge Schlauch zu versiegeln und die Lösung für 2 Stunden bei Raumtemperatur inkubieren.
  5. Reinigen Sie nach 2 Stunden das Immunoconjugate eine vorverpackte Einweg Größe Ausgrenzung Entsalzung Spalte verwenden.
    1. Der Spalte "Größe Ausgrenzung" equilibrate zunächst wie beschrieben durch den Lieferanten, von Konservierungsstoffen in der Spalte vorhanden während der Lagerung zu entfernen. Eine typische Vorgehensweise beinhaltet Waschen der Spalte 5 Mal mit einem Volumen von PBS, die das Volumen der Spalte entspricht: 5 x 2,5 mL PBS.
    2. Fügen Sie das Reaktionsgemisch, Spalte "Größe-Ausschluss" feststellend, dass das Volumen des Reaktionsgemisches.
    3. Nachdem das Reaktionsgemisch die Spalte eingegeben hat, fügen Sie einen angemessenen Betrag von PBS, das Gesamtvolumen der Lösung hinzugefügt, um die Spalte zu bringen bis zu 2,5 mL. Zum Beispiel wenn die Konjugation Reaktion führte zu einem Gesamtvolumen von 1,3 mL, müssten 1,2 mL zusätzliche PBS die Spalte hinzugefügt werden.
    4. Schließlich sammeln Sie das Produkt mit 2 mL PBS als der Eluent.
  6. Konzentrieren Sie die endgültige Immunoconjugate mit zentrifugalen Filteranlagen mit einem 50 kDa Molekulargewicht Cut-off.

Ergebnisse

Die ersten vier Schritte dieses Protokolls – die Synthese der Hülsen – wurden entwickelt, um robust und zuverlässig. Die Deprotonierung und Substitution von 5-(4-aminophenyl)-1,3,4-oxadiazole-2-thiol bilden die gewünschte Thioether-Produkt bietet die Thioether in > 99 % Ausbeute nach nur 45 Minuten. Als nächstes wurde der Ligatur zwischen 1 und N-Boc-N'-succinyl-4,7,10-trioxa-1,13-tridecanediamine über ein standard-Peptid Kupplung Verfahren, mit dem Ergebnis in d...

Diskussion

In diesem Bericht haben wir uns entschieden, keine Protokolle für enzymatische oder in vivo Experimente beinhalten. Unsere Gründe sind einfach. In Bezug auf erstere, die enzymatische ein PODS-basierte Immunoconjugate unterscheidet sich nicht überhaupt von derjenigen einer Immunoconjugate synthetisiert, mit anderen Biokonjugaten-Strategien, und diese Verfahren wurden umfassend überprüft anderswo2 . In Bezug auf Letzteres können die Besonderheiten der präklinischen in-vivo-Experimente (d. h. ...

Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Die Autoren danken Dr. Sai Kiran Sharma für hilfreiche Gespräche.

Materialien

NameCompanyCatalog NumberComments
5-(4-aminophenyl)-1,3,4-oxadiazole-2-thiolSigma-Aldrich675024
1.5 mL LoBind Microcentrifugal TubeEppendorf925000090
1.5 mL Microcentrifugal TubeFisherbrand05-408-129
AcetonitrileFisher ScientificA998-4
Amicon Ultra-2 Centrifugal Filter UnitEMD MilliporeEN300000141G
CyclohexaneFisher ScientificC556-4
DichloromethaneFisher ScientificAC383780010
DiisopropylethylamineMP Biomedicals, LLC150915
DimethylsulfoxideFisher Scientific31-727-5100ML
Ethyl AcetateFisher ScientificE145 4
Hydrochloric AcidFisher ScientificA144-500
IodomethaneSigma-Aldrich289566-100G
Magnesium SulfateAcros Organics413485000
m-chloroperbenzoic acidSigma-Aldrich273031
MethanolFisher ScientificA412 1
NBoc-N′-succinyl-4,7,10-trioxa-1,13-tridecanediamineSigma-Aldrich671401Store at -80 °C
N-ethyl-N′- [3- (dimethylamino)propyl] carbodiimide hydrochlorideSigma-Aldrich3450
Phosphate Buffered SalineSigma-AldrichP549310× Concentration
p-SCN-Bn-DOTAMacrocyclicsB-205Store at -80 °C
Sephadex G-25 in PD-10 Desalting ColumnsGE Healthcare17085101
Sodium CarbonateSigma-AldrichS7795
Sodium HydroxideFisher ScientificS318-1
TCEPThermoFischer Scientific20490
TriethylamineFisher ScientificAC157911000
Trifluoroacetic AcidFisher ScientificA116-50

Referenzen

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