Zentrifugieren Sie die unverpackte aufgetaute Probe bei 10.000 g für zwei Minuten bei Raumtemperatur. Beobachten Sie die Probe, um Niederschlag, Farbe und Zustand zu erkennen. Erwärmen Sie die vorbereitete 1.536-Well-Platte auf 23 Grad Celsius und zentrifugieren Sie sie dann fünf Minuten lang bei 150 g.
Machen Sie mit einem Hellfeldmikroskop Bilder von der Platte, die den Cocktail enthält, nur um sie als Negativkontrolle zu verwenden. Geben Sie 200 Nanoliter der Probe mit einem Liquid-Handling-Roboter in jede Vertiefung. Nachdem Sie die Platte bei 150 g zentrifugiert haben, inkubieren Sie sie sechs Wochen lang bei der gewünschten Temperatur.
Nehmen Sie Hellfeldbilder der Platten mit Proben in wöchentlichen Abständen von Tag 1 bis Woche 6 auf. Führen Sie Schallbildgebung mit dem SHG und UV-TPEF durch. Die automatisierte Plattenbildgebung während der gesamten Experimentdauer ermöglichte die Identifizierung von schnell und langsam wachsenden Kristallen.
Die UV-TPEF-Bildgebung zeigte die proteinartige Natur an, während die SHG-Bildgebung die kristalline Natur der Probe bestätigte. Die Schallbildgebung ermöglichte die Identifizierung von Kristallen, die durch Ausfällung oder Film verdeckt sind und kein SHG-Signal erzeugen, oder von Mikrokristallen, die fälschlicherweise als Niederschlag angesehen werden können. Nicht-Proteinkristalle, denen das UV-TPEF-Signal fehlte, die aber starke Hellfeld- und SHG-Signale aufwiesen, wurden ebenfalls identifiziert.
