Lysis and Digestion of Scarce Cells

Nehmen Sie zunächst ein Aliquot gefrorener knapper Zellen und fügen Sie 1 Milliliter kalten Lysepuffer hinzu, um die Zellmembran aufzubrechen. Inkubieren Sie die Zellen 30 Minuten lang auf Eis und mischen Sie sie alle fünf Minuten durch Inversion. Zentrifugieren Sie die Kerne 10 Minuten lang bei 1.000 G.Entfernen Sie den Überstand und suspendieren Sie die Kerne erneut in 500 Mikrolitern kaltem 1,25-fachem Restriktionspuffer 2.

Dann 5,5 Mikroliter 10%iges Natriumdodecylsulfat hinzufügen, durch Vortexen mischen und in einem Thermoblock inkubieren. Anschließend das SDB abschrecken, indem Sie 37,5 Mikroliter 10%Triton X-100 hinzufügen. Mischen und inkubieren Sie die Probe wie zuvor gezeigt.

Fügen Sie 7,5 Mikroliter Hind III hinzu, um das Chromatin zu verdauen, mischen Sie die Lösung und inkubieren Sie sie über Nacht bei 37 Grad Celsius.