Bevor Sie die anästhesierte Maus auf den Live-Imaging-Einsatz legen, der auf dem inversen Mikroskoptisch installiert ist, fädeln Sie den Isofluran-Schlauch mit dem daran befestigten Nasenkonus durch die Eckrohrhalterung am Einsatz. Nachdem Sie die Heizplatte in den Controller mit der angeschlossenen Analthermometersonde eingesteckt und eingeschaltet haben, übertragen Sie die betäubte Maus aus der Induktionskammer auf die Heizplatte. Befestigen Sie dann den Nasenkonus an der Maus.
Führen Sie die Analsonde in das Tier ein und stellen Sie den Controller so ein, dass eine stabile Körpertemperatur von etwa 36 Grad Celsius aufrechterhalten wird. Decken Sie die richtig positionierte Maus mit einer Plastikfolie ab, um die Körperwärme einzufangen und die Körpertemperatur zu erhöhen. Positionieren Sie die Maus so, dass ihr Kopf mit der Deckglasscheibe ausgerichtet ist, und fixieren Sie ihr Ohr mit einem Ohrclip oder Klebeband aus Metall in der Mitte des Deckglases.
Nachdem Sie die Bildgebung abgeschlossen haben, wählen Sie die Option "Low Flow" am elektronischen Vaporizer, um die Isofluran-Abgabe zu beenden. Lege die Maus auf ein Heizkissen, bis sie gehfähig ist. Nachdem Sie das Deckglas entfernt haben, wischen Sie es mit Linsenpapier und Linsenlösung ab.
Bewahren Sie es richtig auf, um Kratzer bei der Wiederverwendung zu vermeiden. Lösen Sie als Nächstes den Anästhesieschlauch von der Einsatzhalterung und schrauben Sie den Einsatz vom Mikroskoptisch ab. Die aufgenommenen Z-Stapel von fluoreszenzmarkiertem Ohrgewebe von lebenden Mäusen zeigten im Laufe der Zeit eine minimale Drift in der x-, y- und z-Achse, was die benutzerdefinierten 3D-gedruckten Live-Imaging-Einsätze validierte.
Die Zeitpunkte aus einem dreistündigen Zeitrafferfilm der mCherry-positiven Mausohr-Epidermiszellen einer erwachsenen männlichen Maus zeigten eine einzelne z-Ebene, die über die längere Zeit im Fokus blieb. Ähnliche Beobachtungen wurden in einem anderen dreistündigen Zeitrafferfilm von GFP-positiven dermalen Fibroblasten des Ohrs einer erwachsenen weiblichen Maus gemacht.
