Dissektion und Isolierung von murinem perivaskulärem Fettgewebe (PVAT)

Beginnen Sie damit, die ordnungsgemäß eingeschläferte Maus mit 75%igem Alkohol zu besprühen, um die Haut zu desinfizieren. Platzieren Sie dann die Maus in Rückenlage. Heben Sie die Haut der Bauchregion des Tieres an und machen Sie mit einer chirurgischen Schere einen kleinen Schnitt hinein.

Trennen Sie dann mit der Schere stumpf die Haut und die Bauchmuskeln vom Becken bis zum Hals entlang der ventralen Mittellinie. Lege das Herz und die Lunge frei, indem du das Zwerchfell und die Rippen auf beiden Seiten der Mittellinie durchschneidest. Als nächstes entfernen Sie vorsichtig Leber, Milz, Darm und Niere, um Schäden an der Darmwand zu vermeiden.

Danach entfernen Sie die Lunge und die Speiseröhre. Heben Sie nun das Herz mit einer Pinzette in der einen Hand vorsichtig an und trennen Sie die Aorta mit einer chirurgischen Schere in der anderen Hand von der Wirbelsäule. Dann legen Sie das Herz und die Aorta in eine 60-Millimeter-Petrischale, die antibiotikahaltiges PBS enthält.

Nehmen Sie die mikrochirurgische Pinzette und die mikrochirurgische Schere aus dem Alkohol und spülen Sie sie in 25 Millilitern PBS ab, um überschüssigen Alkohol zu entfernen. Entfernen Sie unter einem Stereomikroskop den Thymus und andere Gewebe aus dem Herzen und der Aorta. Entfernen Sie dann das Herz und belassen Sie die Aorta mit dem perivaskulären Fettgewebe oder PVATs.

Übertragen Sie die Aorta zusammen mit den PVATs in eine saubere 60-Millimeter-Petrischale, die mit Antibiotika angereichertes PBS enthält. Halten Sie mit einer mikrochirurgischen Pinzette die Aorta fest und ziehen Sie mit einem anderen Paar das anhaftende Fettgewebe ab, um die PVATs von der Aorta zu trennen. Entfernen Sie so viel Gefäßgewebe wie möglich, während Sie die PVATs nur minimal schädigen.

Zum Schluss werden die gesammelten PVATs in ein Zwei-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen überführt, das mit Antibiotika angereichertes, hochglukosereiches DMEM enthält und auf Eis gelegt wird.