Halbautomatische Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion aus murinem weißem Fettgewebe mit Hilfe eines Gewebedissoziators

Wir interessieren uns für braune und beige Subtypen von Adipozyten, die Energie in Form von Wärme abführen, während weiße Adipozyten im Allgemeinen Energie speichern. Unser Ziel ist es, eine neue Behandlung für Fettleibigkeit und Diabetes zu entwickeln, die auf der Förderung des Energieverbrauchs und nicht auf der Unterdrückung der Energieaufnahme basiert. Wir haben einen Transkriptionsfaktor, NFI, als kritischen Regulator der Differenzierung von braunen Adipozyten durch eine genomweite offene Chromatinanalyse identifiziert. NFI und der Master-Transkriptionsregulator der Adipogenese, PPAR-gamma, kolokalisieren als braunfettspezifische Enhancer.

Bei der Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion aus dem Fettgewebe der Maus kann das manuelle Zerkleinern und der Kollagenase-Verdau von Fettgewebe zu experimenteller Variabilität und Kontamination führen. Unsere Methode verwendet einen Gewebedissoziator für den Kollagenase-Aufschluss, der die SVF-Isolierung erleichtert, die experimentelle Variabilität und Kontamination reduziert und die Reproduzierbarkeit verbessert. Experimente mit individuell differenzierten Adipozyten sind für die Forschung auf unserem Gebiet unabdingbar.

Unser Protokoll würde eine einfache und reproduzierbare SVF-Isolierung für die anschließende Adipozytendifferenzierung bieten und die Forschung in unserer Gemeinschaft beschleunigen. Derzeit untersuchen wir die Rolle von LFI des gesamten Körperstoffwechsels, wie z.B. Körpergewicht und Glukose, mit Hilfe von Gain- und Loss-of-Function-Mausmodellen. Wir werden in naher Zukunft auch andere pharmakologische Aktivierung von NFI für jeden nachgeschalteten Signalweg untersuchen.