Verwenden Sie zunächst eine transgene Linie, die GFP und Nitroreduktase (NTR) unter einem Stäbchen-Photorezeptor-spezifischen Promotor exprimiert. NTR wandelt das Prodrug Metronidazol oder MTZ in ein zytotoxisches Mittel für die selektive Ablation von NTR-exprimierenden Stäbchen um. Für die GFP-Überwachung wird eine betäubte Kaulquappe vorsichtig mit einem Löffel aufgefangen und vorsichtig auf ein feuchtes Gewebe in einer kleinen Petrischale gelegt.
Beobachten Sie die GFP-Fluoreszenz unter einem fluoreszierenden Stereomikroskop und nehmen Sie fotografische Bilder der Augen auf. Tauche die Petrischale mit der Kaulquappe vorsichtig in ein großes Becken mit Aufzuchtwasser, bis sie vollständig erwacht ist. Zur individuellen Überwachung der Netzhautdegeneration wird jede Kaulquappe in einen kleinen Behälter gegeben, der 30 Milliliter 10 Millimolar MTZ oder transgene Geschwister in der Kontrolllösung enthält.
Für die Chargenbehandlung geben Sie die transgenen Kaulquappen in einen größeren Behälter mit einem Liter MTZ oder Kontrolllösung. Ziehen Sie die Kaulquappen eine Woche lang bei 20 Grad Celsius in der Dunkelheit auf, um einen Abbau von MTZ zu vermeiden. Beobachten Sie nach sieben Tagen das GFP unter dem fluoreszierenden Stereomikroskop und nehmen Sie fotografische Bilder des Auges auf.
Eine Abnahme der Fluoreszenzintensität oder sogar eine nahezu fehlende Fluoreszenz deutet auf den Abbau von Stäbchen hin. Die Augen von transgenen Kaulquappen, die mit MTZ behandelt wurden, zeigten im Vergleich zu den Kontrollen eine Abnahme der GFP-Fluoreszenz, was an Netzhautschnitten durch GFP-Immunfärbung weiter bestätigt wird.
