Wir danken Wendy Chao für ihre Unterstützung in kritischen Bewertung. Diese Arbeit wurde von Bausch &amp; Lomb Vitreoretinal Fellowship (HM), National Eye Institute Zuschuss EY014104 (JWM), Forschung unterstützt werden, um Blindness Foundation (DGV), Lions Eye Research Fund (DGV) und eine großzügige Spende der Familie Yeatts (JWM verhindern und DGV).

Alle Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit der Association for Research in Vision and Ophthalmology Erklärung für die Nutzung von Tieren in Ophthalmic und Vision Research durchgeführt und die Richtlinien und Vorschriften von der Massachusetts Eye and Ear Infirmary Animal Care Ausschuss dargelegt. 1. Vorbehandlung <ol><li> Betäuben einen 8 Wochen alten Maus mit einer intraperitonealen Injektion einer Mischung von 60 mg / kg Ketamin und 6 mg / kg Xylazin. </li><li> Schneiden Sie die Barthaare. Dies wird gemacht, weil sie mit der Visualisierung und Instrumenten Platzierung stören. </li><li> Dilatation der Pupille mit 5% und 0,5% Phenylephrin Tropicamid. </li><li> Schneiden Sie die Zilien. Dies wird auch getan, weil sie mit der Visualisierung und Instrumenten Platzierung stören. </li><li> Bewerben Lokalanästhesie (0,5% Proparacain Hydrochlorid-Augentropfen). </li></ol> 2. Chirurgie unter dem Mikroskop <ol><li> Stellen Sie die Maus in einer seitlichen posITION mit der Nase in Richtung des Chirurgen. Eine Zehe Prise durchgeführt, um chirurgische Anästhesie zu bestätigen, und sterile Handschuhe sind vor Beginn der Operation angelegt. </li><li> Inzision die zeitliche Bindehaut am hinteren Limbus und trennen Sie die Bindehaut von der Lederhaut. Vermeiden Sie das Eindringen der Lederhaut. Nach diesem Schritt erfassen die Bindehaut am Limbus mit einer Pinzette, um das Auge zu steuern. </li><li> Machen Sie ein selbstdicht Skleraeinschnitt mit der Spitze einer 30 G-Nadel mit dem Kegel deutete. Machen Sie eine Skleratunnel durch die Lederhaut und dringen in die Lederhaut in die Aderhaut (Abbildung 1). Vermeiden Eindringen in die Netzhaut. Wenn choroidalen Blutung auftritt und kommt durch die Sklerawunde, führen Sie eine astriction mit einem chirurgischen Speer, bis die Blutung aufhört. Diese Sklerawunde wird Selbst-versiegelt mit Augeninnendruck sein. </li><li> Die Punktion der Hornhaut mit einem 30-G-Nadel, um den Augeninnendruck senken. Verwenden Sie die Nadel parallel zur Iris nicht zu verletzen die Iris und Linse während entry in die Vorderkammer. Der Augeninnendruck führt dazu, dass die Wunde auf Selbstdichtung. </li><li> Legen Sie eine 33 G-Nadel auf eine 10 ul Hamilton-Spritze in den subretinalen Raum mit der Kegel zeigte nach unten (in Richtung der inneren Auge) verbunden ist, und spritzen 3,5 ul Natriumhyaluronat sanft, um die neurosensorische Netzhaut von der zugrunde liegenden RPE zu lösen. Vermeiden Eindringen in die Netzhaut mit der 33 G-Nadel, weil Hyaluronsäure wird in die Glaskörperraum, aber nicht den subretinalen Raum zu gehen, wenn die Netzhaut eingedrungen. Vermeiden Sie auch schnelle Injektion, weil es eine mündliche Tränen erstellen und Hyaluronsäure wird in die Vorderkammer austreten. </li><li> Lassen Sie das Kammerwasser abfließen von der Hornhautpunktion, indem die Hornhaut um das Hornhautpunktion mit einer Pinzette, um den Augeninnendruck einzustellen. </li><li> Abwesenheit von Leckagen aus der Sklerawunde Bestätigen Sie mit einer chirurgischen Speer. </li><li> Um das Risiko von Natriumhyaluronat Reduzierung der Leckage, legen Cyanacrylat chirurgische Kleber aufdie Lederhautwunde. </li><li> Bringen Sie die Bindehaut in ihre ursprüngliche Position mit Cyanacrylat chirurgische Kleber. Dies wird das Risiko von Natriumhyaluronat Leckage. </li><li> Überprüfen Sie den Fundus mit einem Deckglas und bestätigen die Schaffung eines bullösen RD ohne subretinalen Blutung. </li></ol> 3. Nach der Behandlung <ol><li> Bewerben Bacitracin antibiotische Salbe für die Augen, um das Risiko einer Infektion zu verringern. </li><li> Halten Sie die Maus auf einem Heizkissen, um die Anästhesie (Mischung aus Ketamin und Xylazin) aus verursacht niedrige Körpertemperatur im Anschluss an niedrigem Blutdruck zu verhindern. </li><li> Legen Sie die Maus zurück in die Tierkäfig, nachdem sie aus der Narkose erwachen. Überwachen Sie die Mäuse täglich für Komplikationen. Wenn keine Komplikationen auftreten, einschläfern die Mäuse wie unten beschrieben. </li></ol> 4. Sacrifice <ol><li> Euthanize die Mäuse durch zervikale Dislokation nach intraperitonealer Injektion von 100 mg / kg Natrium-Pentobarbital und enucleate der Augen zu geeigneten Zeitpunkten für jedes Experiment (nicht gezeigt). Üben Sie keinen Druck auf das Auge während der Entkernung, weil Natriumhyaluronat austreten. Bullöse RDS sollte mindestens 14 Tage hartnäckig sein. </li></ol>

<ol>
	<li>Anderson, D. H., Guerin, C. J., Erickson, P. A., Stern, W. H., Fisher, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+recovery+in+the+reattached+retina.">Morphological recovery in the reattached retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 27, 168-183 (1986).</li><li>Cook, B., Lewis, G. P., Fisher, S. K., Adler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+photoreceptor+degeneration+in+experimental+retinal+detachment.">Apoptotic photoreceptor degeneration in experimental retinal detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 990-996 (1995).</li><li>Zacks, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+Activation+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Caspase Activation in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 1262-1267 (2003).</li><li>Zacks, D. N., Han, Y., Zeng, Y., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Signaling+Pathways+and+Stress-Response+Genes+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Activation of Signaling Pathways and Stress-Response Genes in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 1691-1695 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cytokine+responses+to+retinal+detachment+in+rats.">Characterization of cytokine responses to retinal detachment in rats.</a> Mol. Vis. 12, 867-878 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Necrosis+Factor-Mediates+Photoreceptor+Death+in+a+Rodent+Model+of+Retinal+Detachment.">Tumor Necrosis Factor-Mediates Photoreceptor Death in a Rodent Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1384-1391 (2011).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relocalization+of+apoptosis-inducing+factor+in+photoreceptor+apoptosis+induced+by+retinal+detachment+in+vivo.">Relocalization of apoptosis-inducing factor in photoreceptor apoptosis induced by retinal detachment in vivo.</a> Am. J. Pathol. 158, 1271-1278 (2001).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+photoreceptor+apoptosis+in+functional+damage+after+retinal+detachment.">Critical role of photoreceptor apoptosis in functional damage after retinal detachment.</a> Curr. Eye Res. 24, 161-172 (2002).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+chemoattractant+protein+1+mediates+retinal+detachment-induced+photoreceptor+apoptosis.">Monocyte chemoattractant protein 1 mediates retinal detachment-induced photoreceptor apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 104, 2425-2430 (2007).</li><li>Trichonas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+interacting+protein+kinases+mediate+retinal+detachment-induced+photoreceptor+necrosis+and+compensate+for+inhibition+of+apoptosis.">Receptor interacting protein kinases mediate retinal detachment-induced photoreceptor necrosis and compensate for inhibition of apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 107, 21695-21700 (2010).</li><li>Roh, M. I., Murakami, Y., Thanos, A., Vavvas, D. G., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Edaravone,+an+ROS+Scavenger,+Ameliorates+Photoreceptor+Cell+Death+after+Experimental+Retinal+Detachment.">Edaravone, an ROS Scavenger, Ameliorates Photoreceptor Cell Death after Experimental Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3825-3831 (2011).</li><li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tauroursodeoxycholic+acid+(TUDCA)+protects+photoreceptors+from+cell+death+after+experimental+retinal+detachment.">Tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) protects photoreceptors from cell death after experimental retinal detachment.</a> PLoS One. 6, e24245 (2011).</li><li>Yang, L., Bula, D., Arroyo, J. G., Chen, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+retinal+detachment-associated+photoreceptor+cell+loss+in+Bax-deficient+mice.">Preventing retinal detachment-associated photoreceptor cell loss in Bax-deficient mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 648-654 (2004).</li><li>Cebulla, C. M., Ruggeri, M., Murray, T. G., Feuer, W. J., Hernandez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+murine+retinal+detachment+model.">Spectral domain optical coherence tomography in a murine retinal detachment model.</a> Exp. Eye Res. 90, 521-527 (2010).</li><li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundus+Autofluorescence+Findings+in+a+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment.">Fundus Autofluorescence Findings in a Mouse Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li><li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina.">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am. J. Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li><li>Ross, W., Lavina, A., Russell, M., Maberley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+correlation+between+height+of+macular+detachment+and+visual+outcome+in+macula-off+retinal+detachments+of+&lt;+or+=+7+days'+duration.">The correlation between height of macular detachment and visual outcome in macula-off retinal detachments of &lt; or = 7 days' duration.</a> Ophthalmology. 112, 1213-1217 (2005).</li><li>Glatt, H., Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+subretinal+hemorrhage+in+rabbits.">Experimental subretinal hemorrhage in rabbits.</a> Am. J. Ophthalmol. 94, 762-773 (1982).</li><li>Toth, C. A., Morse, L. S., Hjelmeland, L. M., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+directs+early+retinal+damage+after+experimental+subretinal+hemorrhage.">Fibrin directs early retinal damage after experimental subretinal hemorrhage.</a> Arch. Ophthalmol. 109, 723-729 (1991).</li><li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration.">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. , 101-672 (1994).</li><li>Bhisitkul, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effect+of+intravitreal+triamcinolone+acetonide+against+photoreceptor+apoptosis+in+a+rabbit+model+of+subretinal+hemorrhage.">Neuroprotective effect of intravitreal triamcinolone acetonide against photoreceptor apoptosis in a rabbit model of subretinal hemorrhage.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 4071-4077 (2008).</li><li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Experimental+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment:+Complete+Functional+and+Histologic+Recovery+of+the+Retina.">A Novel Experimental Mouse Model of Retinal Detachment: Complete Functional and Histologic Recovery of the Retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li><li>Leon, S., Yin, Y., Nguyen, J., Irwin, N., Benowitz, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lens+injury+stimulates+axon+regeneration+in+the+mature+rat+optic+nerve.">Lens injury stimulates axon regeneration in the mature rat optic nerve.</a> J. Neurosci. 20, 4615-4626 (2000).</li><li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+choroidal+neovascularization+via+brief+subretinal+exposure+to+a+newly+developed+lentiviral+vector+pseudotyped+with+Sendai+viral+envelope+proteins.">Inhibition of choroidal neovascularization via brief subretinal exposure to a newly developed lentiviral vector pseudotyped with Sendai viral envelope proteins.</a> Hum. Gene Ther. 21, 199-209 (2010).</li><li>Kong, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-complementary+AAV5+vector+facilitates+quicker+transgene+expression+in+photoreceptor+and+retinal+pigment+epithelial+cells+of+normal+mouse.">Self-complementary AAV5 vector facilitates quicker transgene expression in photoreceptor and retinal pigment epithelial cells of normal mouse.</a> Exp. Eye Res. 90, 546-554 (2010).</li></ol>

Die Massachusetts Eye and Ear Infirmary hat eine Beteiligung in drei US-Patente auf die Verwendung von Verteporfin gerichtet. Darüber hinaus ist die Massachusetts Eye and Ear Infirmary hat Anteile an der selektiven Zerstörung von subretinalen choroidalen Gefäßneubildung zur Behandlung von Makuladegeneration und anderen Erkrankungen gerichtet bestimmte Patentanmeldungen. Die Massachusetts Eye and Ear Infirmary Lizenzgebühren als Folge dieser Patente und Patentanmeldungen und Dr. Miller erhält einen Anteil an der gleichen in Übereinstimmung mit der Massachusetts Eye and Ear Infirmary institutionellen Patentpolitik und Verfahren, die lizenz-Sharing-Bestimmungen enthält. Der Autor, Dr. Joan W. Miller, ist ein ehemaliges Vorstandsmitglied und ehemaliger Gesellschafter der Alcon, Inc., und ist derzeit als Berater für Alcon dient; Imagen Biotech, Inc.; ISIS Pharmaceuticals; Kalvista Pharmaceuticals; Neron Pharmaceuticals, Inc. und ONL Therapeutics, LLC. Dr. Demetrios G. Vavvas dientals Berater für Roche, Genentech, Kala Pharmaceuticals.

Mehrere Verfahren zur Gründung einer RD-Modell in Nagetier-Augen wurde berichtet, 3-15, 22. Die meisten von ihnen nutzen subretinalen Injektion von Natriumhyaluronat, weil es ein viskoses Material, das üblicherweise während einer intraokularen Operation bei Menschen verwendet, und es ist nicht mit irgendeinem bekannten okulare Toxizität 1-15 zugeordnet. Natriumhyaluronat, anstatt normaler Kochsalzlösung oder Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS), erhöht sich die Dauer der RD. Die Methoden für das subretinale Injektion von Hyaluronsäure eine von zwei Ansätze: a transvitreal Ansatz 3-6 oder ein transskleralen Ansatz 7-15. Beide Verfahren werden mit der Beobachtung des Augenhintergrunds durchgeführt. Im transvitreal Ansatz wird ein subretinalen Injektor in den Glaskörperhohlraum eingebracht, ein Retinotomie in der peripheren Netzhaut erzeugt und das Natriumhyaluronat in den subretinalen Raum eingespritzt. In diesem Verfahren werden zwei Netzhautrisse gebildet, die das Risiko von Retina erhöhtl Blutung, die in den subretinalen Raum gehen könnten. Darüber hinaus besteht die Gefahr von Verletzungen, wenn die Linse Retinotomie erzeugt. Es gibt mehrere Methoden für die modifizierte transskleralen Ansatz. In den meisten dieser Verfahren 7-12, nach der Verringerung des Augeninnendrucks mit einer Vorderkammerpunktion einer 30 G-Nadel in eine Spritze gefüllt mit Natriumhyaluronat wird direkt in den subretinalen Raum durch die Bindehaut, Lederhaut, Aderhaut und RPE eingesetzt ist. Die Natriumhyaluronat wird dann in den subretinalen Raum eingespritzt. Die Gefahr von Netzhautschäden Tränenlinse und mit diesen transskleralen Verfahren ist geringer als die mit der transvitreal Ansatz. Jedoch ist das Loch in die Sklera durch eine 30 G-Nadel groß gemacht, insbesondere für die Augen der Maus, und das Natriumhyaluronat in den subretinalen Raum injiziert leicht leckt aus dem Auge durch das sklerale Wunde. Dies führt zu einer niedrigeren, weniger hartnäckig RD und variabler Photorezeptorzelle Tod. Außerdem, wenn in der Aderhautblutungen auftrittdie Lederhaut Perforation Schritt wird die Blutung in den subretinalen Raum ausbreiten, weil der Augeninnendruck hat vor dem subretinalen Hyaluronat Injektion reduziert. Mehrere Faktoren können die Wirkung von RD auf der Netzhautablösung zu beeinflussen, einschließlich subretinaler Blutung, und die Höhe und Persistenz von RD 16-21. Photorezeptor Zelltod mit zunehmender Höhe RD 16, 17 und Photorezeptorzellschädigung kann wegen der verringerten Diffusion von Sauerstoff und essentiellen Nährstoffen aus der Choriokapillaris mit höheren RD Vergleich zu flachen RD umfangreicher sein. Subretinalen Blutung ist auch giftig für Photorezeptorzellen 18-21, mögliche Mechanismen dieser Toxizität in der Netzhautablösung sind Hypoxie und metabolische Störungen durch subretinalen Blutung als Diffusionsbarriere und die direkte Neurotoxizität von Blutkomponenten (wie zB Eisen) induziert. Linsenverletzung, von der berichtet wurde, um eine Schutzwirkung auf reti habennal Ganglienzellen 23, kann auch Auswirkungen auf Photorezeptorzelltodes nach Induktion der RD. Darüber hinaus, wenn der Eintrag Wunde ist nicht versiegelt, Hyaluronsäure kann mit Auge Manipulationen während Enukleation auslaufen. Dies kann zu fehlerhaften Klassifizierung eines RD so flach führen, was wiederum Auswirkungen auf die Interpretation der Ergebnisse. Wir modifizierten die transskleralen Verfahren für subretinale Injektion von Hyaluronsäure, um die Reproduzierbarkeit RD erhöhen und die Rate der subretinalen Blutung. Der kritische Schritt in diesem Protokoll ist die Schaffung einer selbstdicht skleralen Einschnitt unter Verwendung einer 30 G-Nadel, die eine Leckage von Natriumhyaluronat nach dem Einspritzen verhindert. Im Gegensatz zu bisherigen Verfahren wird dieses Protokoll ohne Beobachtung des Augenhintergrundes durchgeführt, mehr Aufmerksamkeit auf die sklerale Wunde bezahlt. Aufbringen von Klebstoff verhindert auch das Natriumhyaluronat Austreten des Auges. Nach unserer Erfahrung ist die Rate der subretinalen Blutung mit diesem Protokoll wals deutlich geringer als bei anderen Protokollen. Wenn choroidalen Blutungen während der Skleraeinschnitt Schritt auftritt, wird es das Auge durch das sklerale Wunde zu verlassen, da dieser Schritt vor der Verringerung des Augeninnendrucks durchgeführt. Wenn choroidalen Blutung nach der Reduktion des Augeninnendrucks und Ablösung der Netzhaut neuro auftreten, wird das Blut in den subretinalen Raum zu sezieren. Wir fanden, dass dies geschieht in etwa 5% der Fälle im Gegensatz zu 10-20% mit den anderen Techniken. Diese Tiere sollten von der Analyse ausgeschlossen werden. Diese Technik kann auch für die subretinale Injektion von Vektor-vermittelten Gentransfer verwendet werden, um Ziel-Photorezeptor oder RPE-Zellen 24, 25 werden. Da die typischen Fahrzeug (PBS, Kochsalzlösung) für diese Injektionen deutlich weniger viskos als Natriumhyaluronat werden Standard-Techniken, die von mehr Lecks geplagt. Die hier beschriebene Technik, durch Reduzierung dieses Risikos macht Vektor Transferexperimente mehr reproduzierbar undzuverlässig.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50660/">Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate</a>. The footnotes were removed from the abstract due to redundancy in the introduction.

Erratum: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Photorezeptorzelle Tod und die anschließende visuelle Rückgang tritt auf, wenn die Photorezeptoren werden von der zugrunde liegenden retinalen Pigmentepithel getrennt. Räumliche Trennung von Photorezeptoren in verschiedenen Netzhauterkrankungen, einschließlich der altersbedingten Makuladegeneration (AMD), Zentral serosa, diabetische Retinopathie und Frühgeborenen-Retinopathie, sowie rhegmatogener (dh durch einen Bruch in der Netzhaut verursacht) Netzhautablösung (gesehen RD). Subretinale Injektion von Hyaluronsäure ist ein weithin akzeptiertes Modell, eine RD, die Photorezeptorzelle Tod führt, die einen Einblick in die Pathophysiologie der Photorezeptordegeneration 1-15 erstellen. Photorezeptordegeneration durch subretinale Injektion Hyaluronsäure induziert, zuerst in 2001 7 eingeführt wird, hat den Vorteil eines angemessenen Zeitkurs (Tage bis Wochen). Allerdings kann es erhebliche Variabilität der Photorezeptorzelle Verlust von Tier zu haben animal auf zwei wichtige Faktoren, die Photorezeptorzelle Tod nach RD beeinflussen: 1) Höhe und Dauer der RD, und 2) das Auftreten von subretinalen Blutung. Es ist eine steile technische Lernkurve der Methode, die beide Faktoren beiträgt. Photorezeptorzelldegeneration steigt mit der Höhe des RD, wie der Abstand zwischen dem retinalen Pigmentepithel (RPE)-Schicht und die Photorezeptoren erhöht 16-17. Im Einklang mit dieser Berichte zeigte unsere bisherigen Experimente mehr Photorezeptor Tod bullösen RDS als flache RDS. Es wurde auch berichtet, dass subretinaler Blutung ist giftig für Photorezeptorzellen und betrifft Photorezeptor Zelltod 18-21. Ebenso haben wir mehr Photorezeptor Tod im RDS mit subretinalen Blutung als RD ohne subretinale Blutungen beobachtet. Daher haben Techniken, um die Variabilität zu minimieren, um auf die Erzielung konsistenter Höhen von RD unter Vermeidung subretinalen Blutung zu konzentrieren. Unsere modifizierte Methode der inducing RD reproduzierbare bullösen und anhalt RD an der gleichen Position des Auges mit seltenen Auftretens von subretinalen Blutung zu machen. Wir durchgeführte Operation mit einer zeitlichen Ansatz, weil es einfacher ist, einen größeren operativen Bereich zu erreichen, verglichen mit anderen Websites. Nach Bindehautschnitt wird eine selbstdicht skleralen Einschnitt unter Verwendung einer 30 G-Nadel vorgenommen. Ein Skleratunnel erstellt wird, gefolgt von skleralen Eindringen in die Aderhaut. Wenn choroidalen Blutung in diesem Schritt stattfindet, wird die Blutung das Auge durch das sklerale Wunde zu beenden, und die Blutung durch astriction mit einem chirurgischen Speer gestoppt werden. Eine vordere Kammer Einstich wird dann von der Hornhaut durchgeführt, um den Augeninnendruck zu senken. Dies ist ein wichtiger Schritt, weil subretinale Injektion allein wird zu erhöhter Augeninnendruck mit daraus resultierenden Arterienverschluss und Ischämie der inneren Netzhaut führen. Eine 33 G-Nadel in eine 10 &amp;mgr; l Hamilton-Spritze verbunden wird dann in den subretinalen Raum eingelegt und 3,5 μ; L Natriumhyaluronat wird sanft eingespritzt, um die neurosensorischen Netzhaut von der zugrunde liegenden RPE zu lösen. Im Gegensatz zu anderen Verfahren zur Induktion RD, die unter Fundusbeobachtung durchgeführt werden, wird diese Technik unter direkter Sicht durchgeführt. Da die sklerale Wunde ist selbstdichtend wird Natriumhyaluronat nicht austreten nach der Injektion. Schliesslich wird Klebstoff auf die sklerale Wunde gelegt und die Bindehaut in ihre ursprüngliche Position wieder befestigt. Diese Schritte dauert das Risiko von Natriumhyaluronat Reduzierung der Leckage auch. Die Injektion von 3,5 &amp;mgr; l Natriumhyaluronat schafft reproduzierbare RDS (50% der Netzhaut) in den Augen von 8 Wochen alten Mäusen. Erstellen des selbstdichtende Wunde ist der wichtigste Schritt in unserer modifizierten Verfahren, weil es verhindert, dass der eingespritzte Hyaluronsäure Auslaufen aus dem Auge, so dass reproduzierbare bullösen und anhalt RDS.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketaject</td>
 <td>Phoenix</td>
 <td>2010025</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>AnaSed</td>
 <td>LLOYD</td>
 <td>4004821</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5% Phenylephrine / 0.5% Tropicamide</td>
 <td>Massachusetts Eye and Ear Pharmacy</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.5% Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution</td>
 <td>AKORN</td>
 <td>17478-263-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Provics</td>
 <td>Alcon</td>
 <td>8065183085</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Webglue</td>
 <td>Patterson Veterinary</td>
 <td>07-8566128</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MG90</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G1/2 PrecisionGlide Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Weck-Cel Eye Spears</td>
 <td>Beaver-Visitec</td>
 <td>0008685</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 Microliter Syringe</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7635-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>33 gauge, 0.5 inch needle</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7803-05</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18x18mm Cover Glass</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>18-548A</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate

Subretinale Injektion von Hyaluronsäure ist ein weithin akzeptiertes Verfahren zur Induktion der Netzhautablösung (RD). Jedoch kann die Höhe und Dauer der RD oder das Auftreten von subretinaler Blutung Photorezeptorzelltodes in der Netzhautablösung beeinflussen. Vorteilhaft Daher ist es um reproduzierbare RDS subretinalen Blutung ohne Photorezeptor für die Bewertung Zelltod erstellen. Wir bereits berichtet eine modifizierte Methode, um bullösen und anhalt RDS in reproduzierbarer Lage mit seltenen Auftretens von subretinalen Blutung erstellen. Der kritische Schritt in diesem modifizierten Verfahren ist die Schaffung eines selbstdicht Skleraeinschnitt, die Leckage von Natriumhyaluronat nach Injektion in den subretinalen Raum verhindern. Um das selbstdicht Skleraeinschnitt ein Skleratunnel erstellt wird, gefolgt von skleralen Eindringen in die Aderhaut mit einer 30 G Nadel machen. Obwohl choroidalen Blutung kann während dieses Schrittes auftreten, astriction mit einem chirurgischen Speer reduziert die Rate der choroidalen Saumorrhage. Diese Methode ermöglicht eine reproduzierbare und zuverlässige Modell der Photorezeptor Tod in Krankheiten, die RD wie rhegmatogener RD, Frühgeborenen-Retinopathie, diabetische Retinopathie, Zentral RCS und altersbedingte Makuladegeneration (AMD) zu beteiligen.

Um die Persistenz der RD von diesem Protokoll gemacht zu beurteilen, wurden Gefrierschnitte an den Tagen 3, 7 gemacht, und 14 nach Induktion der RD. Sechs Augen wurden für jeden Zeitpunkt verwendet. Hämatoxylin und Eosin (HE)-Färbung wurde verwendet, um die Abschnitte zu visualisieren. Alle Abschnitte zeigten eine bullösen RD nähert sich der Linse (Abbildung 2). Ein Auge zeigte subretinalen Blutung am 7. Tag. Keine Augen zeigten keine Anzeichen einer Infektion oder Linsenverletzung. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="Figur 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" /> Fig. 1 ist. Erstellen eines selbstdicht Skleraeinschnitt. Dieses Schema zeigt ein Querschnittsbild einer normalen Maus Auge. Rote Linie zeigt den selbstdicht Skleraeinschnitt. Ein Skleratunnel gefolgt von skleralen Eindringen in die Aderhaut mit einer 30 G-Nadel erzeugt eine selbstdicht Skleraeinschnitt. Diese Sklerawundewird selbst versiegelt mit Augeninnendruck, die eine Leckage von Natriumhyaluronat nach Injektion in den subretinalen Raum zu verhindern und zu erreichen persistent bullöse Hautablösungen kann. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="Figur 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" /> 2. Zeitlicher Verlauf der Netzhautablösung. Dieses Foto zeigt einen Fundus bullösen Hautablösung ohne subretinalen Blutung unmittelbar nach der Operation. Gefrierschnitte mit Hämatoxylin und Eosin (HE)-Färbung zeigen anhalt bullösen Hautablösung ohne subretinalen Blutung durch mindestens 14 Tage.

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Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Erstellen experimentellen Netzhautablösungen mit einer reproduzierbaren und anhalt Höhe Ablösung, und ohne subretinalen Blutung, ist wichtig für die Erforschung der Pathophysiologie der Photorezeptorzellverlust in der Netzhauterkrankungen und Bewertung potenzieller therapeutischer Interventionen. Hier ist ein solches Verfahren im Detail beschreiben wir.

Modell Netzhautablösung in Nagetiere durch subretinale Injektion von Natriumhyaluronat

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

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Research

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Medicine

20.6K Aufrufe.  Massachusetts Eye and Ear Infirmary, Harvard Medical School.  Erstellen experimentellen Netzhautablösungen mit einer reproduzierbaren und anhalt Höhe Ablösung, und ohne subretinalen Blutung, ist wichtig für die Erforschung der Pathophysiologie der Photorezeptorzellverlust in der Netzhauterkrankungen und Bewertung potenzieller therapeutischer Interventionen. Hier ist ein solches Verfahren im Detail beschreiben wir. 

Serie: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

Subretinalen Injektion von Vektoren für die Gentherapie und Stammzellen in die Maus Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Forschung

Medizin

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

Darstellende Subretinale Injektionen in Nagetiere zu retinalen Pigmentepithelzellen in Suspension liefern

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

Eine Schritt für Schritt-Protokoll für Subretinale Chirurgie in Kaninchen

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie mit Draht Myographie

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Studying Left Ventricular Reverse Remodeling by Aortic Debanding in Rodents

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, mice undergo RR upon removal of the aortic constriction. In this paper, we describe a step-by-step procedure to perform a minimally invasive surgical aortic debanding in mice. Echocardiography was subsequently used to assess the degree of cardiac hypertrophy and dysfunction during LV remodeling and RR and to determine the best timing for aortic debanding. At the end of the protocol, terminal hemodynamic evaluation of the cardiac function was conducted, and samples were collected for histological studies. We showed that debanding is associated with surgical survival rates of 70-80%. Moreover, two weeks after debanding, the significant reduction of ventricular afterload triggers the regression of ventricular hypertrophy (~20%) and fibrosis (~26%), recovery of diastolic dysfunction as assessed by the normalization of left ventricular filling and end-diastolic pressures (E/e&#39;&#160;and LVEDP). Aortic debanding is a useful experimental model to study LV RR in rodents. The extent of myocardial recovery is variable between subjects, therefore, mimicking the diversity of RR that occurs in the clinical context, such as aortic valve replacement. We conclude that the aortic banding/debanding model represents a valuable tool to unravel novel insights into the mechanisms of RR, namely the regression of cardiac hypertrophy and the recovery of diastolic dysfunction.

Here we describe a step-by-step protocol of surgical aorta debanding in the well-established mice model of aortic-constriction. This procedure not only allows studying the mechanisms underlying the left ventricular reverse remodeling and regression of hypertrophy but also to test novel therapeutic options that might accelerate myocardial recovery.

Untersuchung des linksventrikulären Reverse Remodeling durch Aortendefletieren bei Nagetieren

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, ...

Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the pathophysiological changes of human OA. However, as the main symptom in the late stage of OA, pain affects the patients&#39; daily life, and there are not many available models. The mono-iodoacetate (MIA)-induced model is the most widely used OA pain model, mainly used in rodents. MIA is an inhibitor of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, which causes chondrocyte death, cartilage degeneration, osteophyte, and measurable changes in animal behavior. Besides, expression changes of matrix metalloproteinase (MMP) and pro-inflammatory cytokines (IL1 &#946; and TNF &#945;) can be detected in the MIA-induced model. Those changes are consistent with OA pathophysiological conditions in humans, indicating that MIA can induce a measurable and successful OA pain model. This study aims to describe the methodology of intra-articular injection of MIA in rats and discuss the resulting pain-related behaviors and histopathological changes.

This study describes the method of intra-articular injection of mono-iodoacetate in rats and discusses the resulting pain-related behaviors and histopathological changes, which provide references for future applications.

Osteoarthritis-Schmerzmodell, induziert durch intraartikuläre Injektion von Mono-Jodacetat bei Ratten

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

Sauerstoffinduzierte Retinopathie-Modell für ischämische Netzhauterkrankungen bei Nagetieren

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. To investigate pathological mechanisms of retinal ischemia, relevant experimental models need to be developed. Anatomically, a main retinal blood supplying vessel is the ophthalmic artery (OpA) and OpA originates from the internal carotid artery of the common carotid artery (CCA). Thus, disruption of CCA could effectively cause retinal ischemia. Here, we established a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion (tBCCAO) to tie the right CCA with 6-0 silk sutures and to occlude the left CCA transiently for 2 seconds via a clamp, and showed that tBCCAO could induce acute retinal ischemia leading to retinal dysfunction. The current method reduces reliance on surgical instruments by only using surgical needles and a clamp, shortens occlusion time to minimize unexpected animal death, which is often seen in mouse models of middle cerebral artery occlusion, and maintains reproducibility of common retinal ischemic findings. The model can be utilized to investigate the pathophysiology of ischemic retinopathies in mice and further can be used for in vivo drug screening.

Here, we describe a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion using simple sutures and a clamp. This model can be useful for understanding the pathological mechanisms of retinal ischemia caused by cardiovascular abnormalities.

Ein murines Modell der ischämischen Netzhautverletzung induziert durch transiente bilaterale gemeinsame Carotis ArterieNverschluss

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These conditions include retinitis pigmentosa (RP) and advanced forms of age-related macular degeneration (AMD), such as geographic atrophy (GA). Together, these disorders represent a significant proportion of currently untreatable blindness globally. These unmet medical needs have generated heightened academic interest in developing methods of RPE replacement. Among the animal models commonly utilized for preclinical testing of therapeutics, the non-human primate (NHP) is the only animal model that has a macula. As it shares this anatomical similarity with the human eye, the NHP eye is an important and appropriate preclinical animal model for the development of advanced therapy medicinal products (ATMPs) such as RPE cell therapy.
This manuscript describes a method for the submacular transplantation of an RPE monolayer, cultured on a polyethylene terephthalate (PET) cell carrier, underneath the macula onto a surgically created RPE wound in immunosuppressed NHPs. The fovea-the central avascular portion of the macula-is the site of the greatest mechanical weakness during the transplantation. Foveal trauma will occur if the initial subretinal fluid injection generates an excessive force on the retina. Hence, slow injection under perfluorocarbon liquid (PFCL) vitreous tamponade is recommended with a dual-bore subretinal injection cannula at low intraocular pressure (IOP) settings to create a retinal bleb. 
Pretreatment with an intravitreal plasminogen injection to release parafoveal RPE-photoreceptor adhesions is also advised. These combined strategies can reduce the likelihood of foveal tears when compared to conventional techniques. The NHP is a key animal model in the preclinical phase of RPE cell therapy development. This protocol addresses the technical challenges associated with the delivery of RPE cellular therapy in the NHP eye.

The non-human primate (NHP) is an ideal model for studying human retinal cellular therapeutics due to the anatomical and genetic similarities. This manuscript describes a method for submacular transplantation of retinal pigment epithelial cells in the NHP eye and strategies to prevent intraoperative complications associated with macular manipulation.

Retinale Pigmentepitheltransplantation in einem nicht-menschlichen Primatenmodell für degenerative Netzhauterkrankungen

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of transplant with the potential to deliver durable heart valves capable of somatic growth with no requirement for anticoagulation. However, the immunobiology of heart valve transplants remains unexplored, highlighting the need for animal models to study this new type of transplant. Previous rat models for heterotopic aortic valve transplantation into the abdominal aorta have been described, though they are technically challenging and costly. For addressing this challenge, a renal subcapsular transplant model was developed in rodents as a practical and more straightforward method for studying heart valve transplant immunobiology. In this model, a single aortic valve leaflet is harvested and inserted into the renal subcapsular space. The kidney is easily accessible, and the transplanted tissue is securely contained in a subcapsular space that is well vascularized and can accommodate a variety of tissue sizes. Furthermore, because a single rat can provide three donor aortic leaflets and a single kidney can provide multiple sites for transplanted tissue, fewer rats are required for a given study. Here, the transplantation technique is described, providing a significant step forward in studying the transplant immunology of heart valve transplantation.

This protocol describes a simple and efficient method for the transplantation of aortic valve leaflets under the renal capsule to allow for the study of alloreactivity of heart valves.