Verwenden Sie ein Kescher, um Kaulquappen aus ihren Becken zu fangen und sie in eine 50-Milliliter-Lösung mit 0,005%igem Benzocain zu geben. Lassen Sie sie so lange in der Lösung bleiben, bis sie nicht mehr auf Reize reagieren. Nimm eine Kaulquappe vorsichtig mit einem Löffel auf und lege sie mit der Rückenseite nach oben in eine kleine Petrischale, die ein feuchtes Taschentuch enthält.
Positionieren Sie dann die Probe unter dem Stereomikroskop. Nehmen Sie zunächst eine geschärfte Kapillare und verwenden Sie eine Mikroladerspitze, um 10 Mikroliter Kobaltchloridlösung zu laden. Legen Sie anschließend die gefüllte Kapillare in den Mikroinjektor-Handler, um die Kapillarspitze abzubrechen und das Auswurfvolumen auf etwa 30 Nanoliter einzustellen.
Mit dem Mikroinjektor und einem Stereomikroskop wird die mit Kobaltchlorid gefüllte Kapillare über der Linse in das Auge eingeführt. Wenn Sie mit der Kapillarspitze das Innere des Auges erreicht haben, stoßen Sie zwei Tropfen von etwa 30 Nanolitern pro Auge aus. Nachdem das rechte Auge injiziert wurde, drehen Sie die Petrischale in einen 180-Grad-Winkel, um das linke Auge zu injizieren.
Die Petrischale mit der injizierten Kaulquappe in einen großen Tank mit einem Liter Aufzuchtwasser geben. Beobachte die Kaulquappen so lange, bis sie vollständig erwacht sind. Die Injektion von 10 Millimolar Kobaltchlorid führte zu einem spezifischen Zelltod der Zapfen-Photorezeptoren, während 25 Millimolar zu einem breiten retinalen Zelltod führten.
Die Immunfärbung ergab das Fehlen von Zapfen in 10 Millimolar mit Kobaltchlorid injizierten Netzhäuten, während die Stäbchen weitgehend erhalten blieben. Nach Injektionen von 25 Millimolar Kobaltchlorid waren sowohl die Photorezeptoren als auch die Bipolarzellen stark betroffen.
