Um eine mit Gelatine beschichtete 24-Well-Platte herzustellen, geben Sie 200 Mikroliter der 0,2%igen Gelatinelösung in jede Well. Schütteln Sie die Platte vorsichtig, um die Lösung gleichmäßig zu verteilen und die Wells bei Raumtemperatur beschichten zu lassen. Entfernen Sie nach 15 Minuten mit einem Vakuumsauger vorsichtig alle Gelatinereste aus den Vertiefungen.
Geben Sie 0,5 Milliliter frisch zubereitete NBIL-Medien in jede Vertiefung. Und legen Sie die Platte zum Vorwärmen in einen Gewebekultur-Inkubator. Aliquotieren Sie 30 Milliliter Waschmedien in ein konisches 50-Milliliter-Röhrchen.
Aspirieren Sie das Medium aus der Gewebekulturschale von mES-Zellen und fügen Sie die erforderliche Menge des Zellablösungsmediums hinzu. Pipettieren Sie nach drei bis fünf Minuten 15 bis 20 Mal mit einer P1.000-Pipette auf und ab. Beobachten Sie die Zellen unter einem Mikroskop.
Um eine einzellige Suspension zu gewährleisten, geben Sie die Zellensuspension in ein 50-Milliliter-Röhrchen mit Waschmedien. Die Suspension bei 300 g fünf Minuten bei Raumtemperatur zentrifugieren und das Waschmedium absaugen. Resuspendieren Sie das Pellet in ca. 300 Mikrolitern Waschmedium.
