Finanzierung für die Veröffentlichung von Cerus Corp, Hersteller des INTERCEPT Blood System zur Verfügung gestellt.

Ein. Vollblutspende <ol><li> Vollblut von freiwilligen Spendern in 450 ml oben / unten Kollektion setzt nach den örtlichen Blutentnahme Richtlinien. </li><li> Das Vollblut für mindestens 2 Stunden auf einer Kühlplatte vor der Zentrifugation und Abtrennung gespeichert. </li></ol> 2. Buffy Coat Vorbereitung <ol><li> Zentrifuge das Vollblut mit einem harten Spin um das Blut in drei Schichten trennt: rote Blutkörperchen, Leukozytenfilm und Plasma. Zentrifuge verwendeten Parameter waren 4880 RCF für 11 min bei 22 ± 2 ° C. </li><li> Verwenden eines automatisierten Bluttrenneinheit um das Plasma in den oberen Satellitenbeutel und die roten Blutkörperchen (RBC) in den unteren Satellitenbeutel ausdrücken, so dass der Leukozytenmanschette in dem Sammelbehälter. Ziel bedeuten, Volumen und Hämatokrit Bereiche für buffy coats ca. 48 ml und 37%, bzw. sind. </li><li> Die Buffy-Coats werden über Nacht auf einem Plättchen Rührwerk bei 22 ± 2 ° C gelagert </li></ol><ol><li> Sterile connect 7 buffy coats und 300 ml SSP + Plättchen-Additiv-Lösung (PAS) in einem Zug Konfiguration mit parallelen Linien zur Verringerung der Zuglänge, die PAS sollte an der Spitze des Zuges. Klemmen Sie die Leitung zwischen dem PAS und der ersten Buffy-Coat. </li><li> Öffnen die sterile Verbindung zwischen den Leukozytenfilm Einheiten und damit das buffy coats, in den letzten Behälter abzulassen. </li><li> Öffnen Sie die Schweißnaht und die Klammer zwischen der PAS und der ersten Buffy-Coat. Erlauben einem Drittel des Additivs Lösung durch jedes der Leukozytenmanschette Behälter nacheinander zu spülen. 2 weitere Male wiederholen, wobei jedes Mal eine Hälfte des verbleibenden PAS. </li><li> Die durchschnittliche Leukozytenfilm Pool Volumen sollte ca. 600 ml sein. Wenn das Zielvolumen und Hämatokrit der einzelnen buffy coats erfüllt sind, wird die Plasma-Verhältnis um 32 - 47% für die INTERCEPT Pathogeninaktivierung Behandlung später im Prozess erforderlich. </li><li> Entsorgen Sie die leere SSP + und buffyMantel Behältern. </li><li> Für eine optimale Plättchenregenerationsrate, halten den Pool auf dem Rührwerk für 1 Stunde vor dem Zentrifugieren. </li><li> Sterile Verbindung ein Plättchen Vorratsbehälter mit integriertem Leukoreduktionsfilter der Buffy-Coat-Pool. </li><li> Durchführen einer &quot;soft spin&quot; der Leukozytenmanschette-Pool, um die roten Blutkörperchen von den Plättchen in Suspension (462 RCF für 9 min, 20 sec) zu trennen. Hilfestellung Blutplättchensuspension Verwendung eines automatisierten Bluttrenneinheit durch die Leukoreduktionsfilter in die Blutplättchen Vorratsbehälter. </li><li> Die zuvor beschriebenen Anforderungen an die Verarbeitung sicherzustellen, dass der Plättchensuspension dem Zwischenverarbeitungsuntersystem Spezifikationen von 300 ml entspricht - 420 ml Volumen, 2,5 bis 7,0 x 10 11 Blutplättchen Dosis und ≤ 4 x 10 6 / ml Erythrozyten. </li></ol> 4. INTERCEPT-Behandlung <ol><li> Führen Sie die INTERCEPT Behandlung vor dem Ende von Tag 1 nach der Entnahme (Tag 0 ist der Tag der Sammlung). </li><li> Packen Sie das INTERCEPT Verarbeitung Setmit Dual Storage Containers aus dem klaren Plastikbeutel. </li><li> Sterile verbinden Blutplättchensuspension Behälter zu dem Rohr des Behälters auf der Amotosalen INTERCEPT Verarbeitungssatzes. </li><li> Beschriften Sie die INTERCEPT Verarbeitungssatzes Lagerbehälter mit dem entsprechenden Blutprodukt Identifizierung nach lokalen Anforderungen. </li><li> Hängen Sie die Blutplättchen und brechen zuerst die unteren Kanüle auf dem Amotosalen Behälter, so dass die Amotosalen Lösung fließen in die Beleuchtung Behälter. Break the top Kanüle auf dem Amotosalen Behälter so dass die Blutplättchen durch die Amotosalen Behälter in der Beleuchtung Behälter fließen. </li><li> Vorsichtig mischen und die Blutplättchen Amotosalen Gemischs und exprimieren die Luft aus dem Behälter in die Ausleuchtung Amotosalen Behälters. </li><li> Ausdrücken eine kleine Menge der Blutplättchen Mischung in den Schlauch, Füllen etwa 4 cm von den Schläuchen. Dadurch wird sichergestellt, Thrombozyten sowohl in der Schlauch-und Beleuchtungs-Behälter durchlaufen den Erreger inactivatiauf die Behandlung. </li><li> Verschließen Sie den Schlauch zwischen der Beleuchtung Behälter und Amotosalen Behälter. Hinterlegen nicht mehr als etwa 4 cm von Schläuchen, die sich von der Beleuchtungsvorrichtung Behälters. Entfernen und entsorgen Sie die leere Blutplättchen und Amotosalen Behälter und schließen Sie die Klemmen auf die Probenahme Beutel. </li><li> Platzieren Sie die Verarbeitungssatz in den Illuminator mit dem Beleuchtungssystem Behälters in dem großen Fach auf der linken und der Organisator in der kleineren Kammer auf der rechten Seite. </li><li> Mit dem Hand-held Barcode-Gerät, um die Spende ID, Produkt-Code und-verarbeitung Satz Losnummer in den Illuminator geben. Schließen Sie die Metallabdeckung und wenn sie auf dem Illuminator grafische Benutzeroberfläche aufgefordert, schließen Sie die Schublade. Drücken Sie auf &quot;Start&quot;, um die Beleuchtung zu starten. </li><li> Nach der Belichtung, entfernen Sie die Verarbeitung Satz von der Beleuchtungseinrichtung. Der Illuminator druckt automatisch die Behandlung Bericht für die behandelten Thrombozyten Einheit (en). </li><li> Packen Sie die Behälter von dem Veranstalter und hängen Sie die platelets und Verarbeitungssatzes, brechen die Kanüle an dem Auslass des Beleuchtungssystems Behälters und damit die Thrombozyten in die Verbindung Adsorptionsvorrichtung (CAD) Behälter fließen. </li><li> Dabei nicht um den CAD Wafer biegen, exprimieren die Luft aus dem Behälter in den CAD Ausleuchtung Behälter unter Verwendung eines Plasma-Extraktor. </li><li> Abzudichten den Schlauch in der Nähe der Einlaßöffnung des Behälters CAD. Entfernen und entsorgen Sie die leere Beleuchtung Behälter. </li><li> Legen Sie die CAD-Container mit den Attached Storage Container auf einem Plättchen Rührwerk für mindestens 6 h, aber nicht mehr als 16 Stunden. Dies wird im Abbau der Rest Amotosalen auf eine Konzentration von ≤ 2 uM führen. </li><li> Nach CAD Behandlung, entfernen Sie die Thrombozyten-Einheiten aus dem Rührwerk. Hängen Sie die Blutplättchen. Brechen die Kanüle und damit Blutplättchen, um in die Lagerbehälter fließen kann. </li><li> Exprimieren die Luft aus den Vorratsbehältern in den CAD-Container. Das verbliebene Plättchenkonzentrat fließen wieder in den Vorratsbehältern durchSchwerkraft. Verschließen Sie den Schlauch über dem Y-Stück und die leere CAD Behälter. </li><li> Umzuverteilen das Volumen zwischen den Vorratsbehältern nach Bedarf. Lautstärkeeinstellungen werden durch Wägung der Vorratsbehälter gemacht. Dichten den Schlauch an jedem Vorratsbehälter wenige Zentimeter über dem Einlass des Vorratsbehälters, dies erleichtert den Erhalt einer sterilen Probe aus dem Endprodukt, wie in 5.2 beschrieben. </li></ol> 5. Produkt-Sampling <ol><li> Für Routine-QC-Tests können die Endlagerung Containern nach den Probenahme-Beutel auf den Vorratsbehältern abgetastet werden. Um dies zu tun, sicherzustellen, dass die Blutplättchen Gerät ist gut gemischt, dann öffnen Sie die Klemme an dem Beutel und drücken Sie mehrere Male. Verschließen Sie den Schlauch nach der Beutel mit Thrombozyten gefüllt. Übertragen Sie die Thrombozyten Probe in einem geeigneten Labor Rohr und führen Tests sofort. </li><li> Um Proben zu verschiedenen Zeitpunkten erhalten im Laufe der Lagerung, wie etwa für eine Validierungsstudie, sterile Verbindungein neuer Probenbehälter auf das Rohr des Plättchens Vorratsbehälter. Sicherstellen, dass die Blutplättchen sind gut vor dem Probenbehälter übertragen gemischt. </li></ol> 6. In vitro Funktion Auswertung <ol><li> Aus diesem Validierungsstudie wurde in vitro Evaluierung nach CAD-Behandlung (Tag 1 oder Tag 2, je nach CAD Dauer) und erneut am Tag 4 durchgeführt (oder Tag 5) und Tag 7. In-vitro-Messungen enthalten Volumen, Thrombozytenzahl, pH, Blutgasanalyse (pO 2, pCO 2), Glukose, Laktat und Schwenken. </li><li> Das Volumen wurde mit 1,01 Gew. g / ml auf der spezifischen Dichte von Blutplättchen in Additiv-Lösung bestimmt. </li><li> Hämoglobin Kontamination wurde visuell mit Vergleich zu einer Farbkarte ausgewertet. </li><li> Swirling wurde visuell bestimmt. </li><li> Siehe &quot;Tabelle der Ausrüstung&quot; für Methodik der anderen Assays. </li></ol> 7. Repräsentative Ergebnisse Das Verfahren zur Herstellung double Dosis Leukozytenfilm Plättchen beginnt mit der Produktion von individuellen Buffy Coats, die Zielvorgaben zu erfüllen für Volumen-und Hämatokrit. Da es nicht sinnvoll, den Hämatokrit des einzelnen Buffy Coats während der letzten Prozessvalidierung zu messen, haben wir begonnen, indem sie sich verpflichten eine separate bemüht, unsere Buffy Coats zu optimieren, um sicherzustellen, könnten wir konsequent erfüllen Zielvolumen und Hämatokrit. Wie in Tabelle 1 gezeigt, der optimierten buffy coats positiv auf die Zielwerte für die Menge und den Hämatokrit bei 46 ± 2 ml und 37 ± 3%, jeweils verglichen. Nach Bündelung, sollte die Menge und Hämatokrit des Leukozytenmanschette Pool etwa 600 ml und 20% liegen, jeweils vor dem weichen Spin Zentrifugation. Wie in Tabelle 2 dargestellt, gemittelt unserer Leukozytenmanschette Pools 615 ± 5 ml; der Hämatokrit durchschnittlich 19 ± 1%. Die weichen spin Ergebnisse in einer doppelten Dosis Thrombozyten concentrate, dass der Eingang für Pathogeninaktivierung Nutzung des INTERCEPT Blood System DS Verarbeitungssatzes gerecht wird. Key Eingabeparameter für INTERCEPT Behandlung gehören Lautstärke, Thrombozytenzahl, Plasma-Verhältnis und RBC Inhalt. Darüber hinaus streben wir an, ≥ 75% der Thrombozyten im Thrombozytenkonzentrat erholen, wie der Buffy-Coat-Pool verglichen. Per lokalen Anforderungen, muss der weißen Blutkörperchen (WBC) Verschmutzung &lt;1x10 6 / Einheit. Die Thrombozytenkonzentrate in unserem Validierung erfüllt die wichtigsten Parameter für INTERCEPT Behandlung sowie die Ziele für WBC Verschmutzung und Plättchenregenerationsrate wie in Tabelle 3 dargestellt. Das INTERCEPT Verfahren zur Pathogeninaktivierung basiert auf der doppelten Dosis Thrombozytenkonzentrat mit einer einzigen INTERCEPT Verarbeitungssatzes durchgeführt. Die Verarbeitung enthält zwei integralen Vorratsbehälter, die der behandelten Einheit in zwei einzelne therapeutische Dosen Blutplättchen bei Beendigung des Weges aufgeteilt werden könnenogen Inaktivierung. Europäische Richtlinien verlangen, dass 75% der getesteten Einheiten ≥ 200x10 9 Blutplättchen enthalten pro therapeutischen Dose1; lokalen Anforderungen in Schweden verlangen, dass 75% der Anteile geprüft&gt; enthalten 240x10 9 Thrombozyten pro Dosis. Nach INTERCEPT Behandlung betrug die durchschnittliche Thrombozytengehalt 265 ± 22 x 10 9 (n = 24). Außerdem trafen 88% der Anteile oder überschritten 240x10 9 Thrombozyten pro therapeutischen Dosis, dies ist auch im Rahmen der beiden europäischen Richtlinien und schwedischen Vorschriften. Siehe Abb. 1 &amp; 2 für eine Darstellung der doppelte Dosis Leukozytenfilm Vorbereitung und INTERCEPT Behandlungsverfahren sind. Aus diesem Validierung, maßen wir die in vitro-Eigenschaften der Thrombozytenkonzentrate nach INTERCEPT Behandlung (dh nach der Trennung in die einzelnen Vorratsbehältern); Parameter wurden über 7 Tagen Lagerung gemessen. Mittelwert und Standardabweichung wurden gesammeltBlutplättchen-Dosis, pH, pO 2, pCO 2, Lactat und Glucose Produktion Verbrauch. Abbildung 3 zeigt die mittlere beginnend Blutplättchen Dosis der doppelten Dosis Plättchenkonzentrat vor INTERCEPT Behandlung und dem mittleren Plättchen-Dosis in jeder der Spaltprodukte nach der Behandlung über INTERCEPT 7 Tagen Lagerung. Platelet Verlust während der Lagerung betrug etwa 9%. Diese Reduktion ist nicht verschieden von den erwarteten Verlust von Thrombozyten während der Lagerung von konventionellen Thrombozyten. 2 Tabelle 4 fasst die in vitro Eigenschaften der INTERCEPT Blutplättchen nach der Behandlung und Aufteilen in einzelne Einheiten. Per europäischen Anforderungen, muss der pH-Wert der Blutplättchen über 6,4 bis zum Ende der Haltbarkeitsdauer bleiben. Während der Verarbeitung, Konzentrate der pH der Thrombozyten fällt leicht auf der Blutplättchenkonzentration, Volumen und die Gasdurchlässigkeit der Blutplättchen basiert stoWut Behälters. 4 stellt den pH-Wert der geteilten Thrombozytenprodukten über 7 Tagen Lagerung. Während der Lagerung, ist der pH-Wert stabil und gut innerhalb der Verarbeitungsanforderungen aufrechterhalten. Wie in 5A und 5B, der Thrombozyten-O 2-Verbrauch und die CO 2-Produktion zeigen an, setzte die Atmung durch die INTERCEPT Blutplättchen im PL2410 Behälter während 7 Tagen Lagerung. 6A und 6B zeigen die Laktat und Glukose über 7 Tagen Lagerung . Blutplättchen-Glucose und Lactatproduktion stimmen miteinander während der 7-tägiger Lagerung. 5 Einheiten hatten Glukosespiegel weniger als 1,11 mmol / l (die Untergrenze für das Glucose-Assay). Der Buffy-Coat-Zubereitung und Bündelung Validierung produziert Thrombozytenkonzentrate, dass trafen die Eingangs-Kriterien für INTERCEPT Behandlung; speziell, Volumen, Thrombozytenzahl, Plasma-Verhältnis und rot blood Zellkontamination. Die letzten Einheiten erfüllt die Prüfkriterien über 7 Tage der Lagerung einschließlich Thrombozyten Dosis und pH-Wert. <table border="1"><tbody><tr><td> Parameter </td><td> Target Range </td><td> Ergebnisse Mittelwert ± SD </td></tr><tr><td> Volumen (ml) </td><td> ~ 48 </td><td> 46 ± 2 </td></tr><tr><td> Hämatokrit (%) </td><td> ~ 37 </td><td> 37 ± 3 </td></tr><tr><td> Halten Sie Zeit vor Pooling </td><td> Übernachtung auf Rührwerk </td><td> Übernachtung auf Rührwerk </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Merkmale der einzelnen Buffy Coats (n = 19). <table border="1"><tbody><tr><td> Parameter </td><td> Target Range </td><td> Ergebnisse Mittelwert ± SD </td></tr><tr><td> Volumen (ml) </td><td> ~ 600 </td><td> 615 ± 5 </td></tr><tr><td> Hematocrit (%) </td><td> ~ 20 </td><td> 19 ± 1 </td></tr><tr><td> Haltezeit vor der Zentrifugation </td><td> 1 h auf Rührwerk </td><td> 1 h auf Rührwerk </td></tr></tbody></table> Tabelle 2. Merkmale der Buffy Coat Pools (n = 12). <table border="1"><tbody><tr><td> Parameter </td><td> Ziel </td><td> Ergebnisse Mittelwert ± SD </td></tr><tr><td> Volumen (ml) </td><td> 370 bis 420 </td><td> 404 ± 8 </td></tr><tr><td> Thrombozytenzahl (x10 9 / Einheit) </td><td> 250 bis 700 </td><td> 577 ± 62 </td></tr><tr><td> Mittlere Platelet Recovery (%) </td><td> ≥ 75 </td><td> 75 ± 4 </td></tr><tr><td> Plasma-Ratio (%) </td><td> 32 bis 47 </td><td> 38 ± 1 </td></tr><tr><td> RBC (x10 6 / ml) </td><td> ≤ 4 </td><td> 1,2 ± 0,4 </td></tr><tr><td> WBC (x10 6 </sup&gt; / Einheit) </td><td> ≤ 1 </td><td> 0,11 ± 0,1 </td></tr><tr><td> Halten Sie Zeit vor INTERCEPT (hr) </td><td> ≤ Ende von Tag 1 </td><td> ≤ Ende von Tag 1 </td></tr></tbody></table> Tabelle 3. Merkmale des Double-Dose Thrombozytenkonzentraten (n = 12). <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Mittelwert ± Standardabweichung </td><td> Min </td><td> Max </td></tr><tr><td> Volumen (ml) </td><td> 199 ± 16 </td><td> 182 </td><td> 236 </td></tr><tr><td> Thrombozytenzahl (x10 9 / Einheit) </td><td> 265 ± 22 </td><td> 225 </td><td> 292 </td></tr><tr><td> pH (22 ° C) </td><td> 6,9 ± 0,1 </td><td> 6,8 </td><td> 7,0 </td></tr><tr><td> pO 2 (kPa) </td><td> 21,4 ± 4,8 </td><td> 12,8 </td><td> 27,3 </td></tr><tr><td> pCO 2 (kPa) </td><td> 4,3 &amp; plusmn; 0,4 </td><td> 3,3 </td><td> 4,9 </td></tr><tr><td> Lactat (mmol / l) </td><td> 9,1 ± 1,7 </td><td> 6,8 </td><td> 12,4 </td></tr><tr><td> Glucose (mmol / l) </td><td> 5,3 ± 0,9 </td><td> 3,7 </td><td> 6,5 </td></tr></tbody></table> Tabelle 4. Merkmale des INTERCEPT behandelte Thrombozyten Day 1/2 (Einzel-Units, n = 24). <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig1.jpg" /> Abbildung 1. Herstellung einer doppelten Dosis Thrombozytenkonzentrat aus einem Pool von 7 buffy coats. <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig2.jpg" /> Abbildung 2. Pathogeninaktivierung einer doppelten Dosis Thrombozytenkonzentrat mit dem INTERCEPT Blood System. <img alt="Abbildung 3" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig3.jpg" /> Abbildung 3. Mittlere Blutplättchen Dosis vor und für7 Tage nach INTERCEPT-Behandlung (n = 12 vor INTERCEPT; n = 24 nach INTERCEPT). <img alt="Abbildung 4" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig4.jpg" /> Abbildung 4. Mittelwert ± SD pH Blutplättchen nach INTERCEPT Behandlung (n = 24). <img alt="5A" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig5a.jpg" /> 5A. Mittelwert ± SD pO 2 nach INTERCEPT Behandlung (n = 24). <img alt="5B" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig5b.jpg" /> 5B. Mittlere pO 2 ± SD nach INTERCEPT-Behandlung (n = 24). <img alt="6A" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig6a.jpg" /> 6A. Mittlere Laktatwerte ± SD nach INTERCEPT-Behandlung (n = 24). <img alt="6B" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig6b.jpg" /> 6B. Mittlere Blutzuckerwerte &amp;plusmn; SD nach INTERCEPT-Behandlung (n = 24).

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Buffy coat Thrombozyten erfordern mehrere Verarbeitungsschritte, die sich in der Post-Inkassokosten, einschliesslich Personal Zeit, Verbrauchsmaterialien, Geräten und Abfällen, die faktorisiert werden muss in die Gesamtkosten der Herstellung der Thrombozyten-Einheiten. Verbesserung der Plättchenausbeute voneinander Leukozytenmanschette (über die Optimierung der Leukozytenmanschette Volumen und Hämatokrit) erlaubt die Herstellung einer doppelten Dosis Leukozytenmanschette Blutplättchen Einheit aus einem Pool von sieben Buffy Coats. Wenn diese Optimierung durchgeführt wird, benötigt die Anzahl der Buffy Coats, um eine feste Anzahl von Blutplättchen Dosen produzieren kann reduziert werden, wodurch die Gesamtauslastung des Buffy Coats und ermöglicht die Produktion von zusätzlichen Thrombozytenkonzentrate (PCs). Personalzeiterfassung sowie Verbrauchsmaterialien und Geräte Kosten wie Bündelung Sets, Thrombozyten Additiv-Lösung, sterile Verbindung Wafer-, Filter-Sets, und Zentrifugation Verfahren um bis zu 50% reduziert. Neben der Optimierung Thrombozyten Produktion und die Reduzierung damit verbundenen Kosten, this Pooling Verfahren können ein Plättchenkonzentrat (PC), die die Eingabe Anforderung für die Verwendung mit dem Vorratsbehälter INTERCEPT dualen Verarbeitungssatz erfüllt, so dass wir in unseren verbesserten Schutz Transfusionsempfängern sowie bereitzustellen. Das INTERCEPT Blood System für Pathogeninaktivierung verwendet Amotosalen und UV-A (UVA) Licht kovalent vernetzen DNA und RNA und verhindert Nucleinsäurereplikation und Rendering Krankheitserreger nicht eine Krankheit verursachen. 3 Es effektiv inaktiviert ein breites Spektrum von Krankheitserregern wie Viren, Bakterien , Parasiten und verunreinigen Spender weißen Blutkörperchen. 4-6 INTERCEPT bietet eine Alternative zu den aktuellen Tests Paradigma für auftauchende Krankheitserreger, die in der Vergangenheit eine wesentliche Verzögerung, während ein neuer Test entwickelt und letztendlich erfordert eine erhebliche finanzielle Investition zu realisieren, wenn ein Test zur Verfügung stehen. 7,8 Es kann auch eine Alternative redundante Sicherheitssysteme Messres wie bakterielle Detektion 9 und Gamma-Bestrahlung. 10-12 Darüber hinaus ermöglicht INTERCEPT uns doppelte Dosis Thrombozyteneinheiten behandeln welche Vorteile unsere Effizienz in der Produktion und hilft uns, unsere Budgets einzuhalten. INTERCEPT und die doppelte Dosis Leukozytenmanschette Verfahren kann auf eine Vielzahl von Blut entfernt Workflows angepasst werden. Als Beispiele kann Vollblut Sammlungen auf 500 ml erhöht werden; Sammlungen könnte auch über Nacht bei 22 ° C gelagert werden, vor der Trennung. Darüber hinaus ist eine alternative Leukozytenmanschette Pooling Verfahren möglich (z. B. eine Krake Verfahren statt einer Zug-Methode) und / oder eine automatische Vorrichtung (zB TACSI) kann für die zweite Zentrifugation und Abtrennung der Blutplättchensuspension von den restlichen Erythrozyten verwendet werden . Wenn erhöhte Thrombozytengehalt benötigt wird, sind mehrere Techniken verfügbar, einschließlich Vorauswahl von Spendern auf Thrombozytenzahl, Nacht-Inkubation des Vollblutes, einstellbar basierendtment Zentrifugation Einstellungen oder die Verwendung eines Pools von 8 buffy coats anstelle von 7. Aufgrund der Beschränkung der gegenwärtig verfügbaren Pooling setzt und die Kapazität der Zentrifugenbehälter sollte das Gesamtvolumen der Leukozytenmanschette Pool etwa 600 ml betragen. Die Zentrifugation und Einstellungen in diesem Protokoll beschriebenen wurden optimiert, um Produkt, das INTERCEPT Parameter erfüllt für einen Pool von 7 buffy coats ergeben. Die Zentrifugation Einstellungen müssen geändert werden, wenn die Zahl der Buffy Coats im Pool wird geändert werden. In einigen Ländern ist die minimale Thrombozyten höhere Dosis und die QC-Anforderungen sind strenger als in Schweden. Als solches kann unsere Ergebnisse nicht universell anwendbar. In diesen Ländern wird die doppelte Dosis PC vor INTERCEPT Behandlung benötigen, um eine größere Anzahl von Blutplättchen enthalten, um lokale Anforderungen nach INTERCEPT Behandlung und Split zu erfüllen. Da die maximale Thrombozytengehalt und Behandlung Volumen for INTERCEPT sind 7x10 11 Blutplättchen und 420 ml, wird der Anteil an Einheiten, die dem Zwischenverarbeitungsuntersystem zu übertreffen und bei zu geringer Gehalt an Blutplättchen in zwei therapeutischen Dosen aufgeteilt werden, abhängig von Faktoren wie der lokalen Voraussetzungen für die Blutplättchen-Dosis, QC Kriterien, Buffy-Coat-Optimierung Ergebnisse und Produktion Stabilität. Wenn eine doppelte Dosis PC übertrifft die INTERCEPT Anforderungen an die Verarbeitung, kann es manuell eingestellt werden, um die Anforderungen zu erfüllen und anschließend behandelt. In den wenigen Gelegenheiten, bei denen die 7-Buffy-Coat-Pool liefert unzureichende Thrombozyten für eine doppelte Dosis Produkt nach INTERCEPT, wählen wir nicht die INTERCEPT Behandlung durchzuführen. Alternativ können andere Blutzentren entscheiden, den PC mit einer einzigen Dosis INTERCEPT Verarbeitungssatz (dh die großvolumige set) zu behandeln und Speichern des PC als einzelne therapeutische Dosis größer, wodurch eine Pathogeninaktivierung auf alle Einheiten. Um sicherzustellen, dass wir unserenQC Anforderungen und Pathogen zu inaktivieren, da viele unserer Thrombozyteneinheiten möglichst wir Buffy Coats auf den Donor Blutplättchen, die, wenn sie vereinigt, in einem minimalen Gehalt an Blutplättchen 5.6x10 11 Blutplättchen in dem Pool führt auszuwählen. Dies gewährleistet eine ausreichende Thrombozytengehalt zwei therapeutischen Dosen nach INTERCEPT Behandlung herzustellen. Unsere Validierung zeigt, dass 7 Vollblut gewonnen Leukozytenfilm Einheiten erfolgreich gebündelt werden und mit dem INTERCEPT Verfahren für Blutplättchen, was in 2 Erregers inaktivierten Thrombozyten Produkte erfüllen die Aufnahmekriterien für die Herstellung von (Swedish Anforderungen und europäischen Richtlinien) und für die Unterstützung der Patienten erfordern Thrombozyten-Transfusionen nach klinischen Leitlinien und Standards Thrombozyten Infusionsverfahren in Schweden.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material / Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Whole blood donation, primary separation, and platelet production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection pack</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>R6485</td>
			<td>Top/Bottom set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated component extractor</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>Optipress-II</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood mixer and balance system</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>Easymix V3</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet leukocyte filtration set</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>K4R7042</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Hettich</td>
			<td>Roto Silenta 63 RS</td>
			<td>Version 5.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet additive solution - SSP+</td>
			<td>MacoPharma</td>
			<td>SSP2030U</td>
			<td>300 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile tubing welder</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>T-SCD</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>INTERCEPT treatment &amp; storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INTERCEPT processing set</td>
			<td>Cerus</td>
			<td>INT2503</td>
			<td>Dual Storage (DS) set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INTERCEPT Illuminator</td>
			<td>Cerus</td>
			<td>INT100</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC sample pack</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>FTX 1122</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Helmer</td>
			<td>PC2200/PC3200</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agitator</td>
			<td>Helmer</td>
			<td>PF48H/PF96H</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Evaluation of in vitro Platelet Function</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood gas analyzer</td>
			<td>Radiometer</td>
			<td>ABL 735</td>
			<td>Used for pH, blood gases, and lactate measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemistry system</td>
			<td>Ortho Clinical Diagnostic</td>
			<td>Vitros 5.1</td>
			<td>Used for glucose measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematology analyzer</td>
			<td>Boule Medical AB</td>
			<td>Medonic CA620-Cellguard</td>
			<td>Used for platelet count measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>FACSCanto</td>
			<td>Used for white blood cell measurement</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation and pathogen inactivation of double dose buffy coat platelet products using the intercept blood system

Blut-Zentren sind mit vielen Herausforderungen wie die Maximierung der Produktion Ertrag aus dem Blut und Sachspenden, die sie erhalten, sowie die Gewährleistung der höchstmöglichen Sicherheit für Transfusionsmedizin Patienten, einschließlich des Schutzes vor Transfusionen übertragbaren Krankheiten konfrontiert. Dies muss in einer verantwortungsvollen Haushaltspolitik Weise betrieblichen Aufwendungen einschließlich Verbrauchsmaterial, Ausrüstung, Abfall und Personalkosten, unter anderem minimiert erreicht werden. Mehrere Methoden stehen zur Verfügung, um zu produzieren Thrombozytenkonzentrate zur Transfusion. Einer der häufigsten ist der Buffy-Coat, bei dem eine einzelne therapeutische Thrombozyten Einheit (≥ 2,0 x10 11 Plättchen pro Gerät oder pro örtlichen Vorschriften) durch die Bündelung der Buffy-Coat-Schicht von bis zu sechs Vollblutspenden vorbereitet wird. Ein Verfahren zur Herstellung von &quot;doppelte Dosis&quot; Vollblut gewonnen Blutplättchen hat erst vor kurzem entwickelt worden. Hier ist dargestellt ein neues Verfahren zur Herstellungdoppelte Dosis Vollblut gewonnen Thrombozytenkonzentrate aus Pools von 7 buffy coats und anschließend die Behandlung der doppelte Dosis Einheiten mit dem INTERCEPT Blood System für Pathogeninaktivierung. INTERCEPT wurde entwickelt, um Viren, Bakterien, Parasiten und verunreinigen Spender weißen Blutkörperchen, die vorhanden sein in Blut kann zu inaktivieren. Pairing Schnittpunkt mit der doppelten Dosis Leukozytenfilm Verfahren unter Ausnutzung des INTERCEPT Verarbeitung mit Dual Storage Container (die &quot;DS set&quot;) Set ermöglicht Blutspendezentren jedem ihrer doppelte Dosis Einheiten in einem einzigen Pathogeninaktivierung Verarbeitungssatzes zu behandeln, damit die Maximierung der Patientensicherheit bei gleichzeitiger Minimierung der Kosten. Die doppelte Dosis Leukozytenfilm Methode erfordert weniger buffy coats und reduziert die Verwendung von Verbrauchsmaterialien, die von bis zu 50% (z. B. Pooling-Sets, Filter-Sets, Plättchen-Additiv-Lösung, und sterile Verbindung Wafern) im Vergleich zu der Zubereitung und Behandlung von Einzeldosis Leukozytenfilm Thrombozyteneinheiten . Weitere Kosteneinsparungen sind weniger Abfall, weniger Geräte wartungsce, geringere Leistungsaufnahme, geringere Personal Zeit und geringere Kosten der Erhebung der Apherese-Technik verglichen.

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Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Dieser Artikel beschreibt den Prozess, durch Örebro University Hospital verwendet werden, um doppelte Dosis Leukozytenfilm Thrombozytenkonzentrate aus Vollblutspenden hergestellt und behandelt mit dem INTERCEPT Blood System für Pathogeninaktivierung produzieren. Die<em&gt; In vitro</em&gt; Qualität der endgültigen Thrombozyten Einheiten sind über 7 Tagen Lagerung ausgewertet.

Vorbereitung und Pathogeninaktivierung von Double Dose Buffy Coat Platelet Produkte, die INTERCEPT Blood System

Blood centers are faced with many challenges including maximizing production yield from the blood product donations they receive as well as ensuring the ...

preparation-pathogen-inactivation-double-dose-buffy-coat-platelet

Research

JoVE Journal

Medicine

28.5K Aufrufe.  Örebro University Hospital. Dieser Artikel beschreibt den Prozess, durch Örebro University Hospital verwendet werden, um doppelte Dosis Leukozytenfilm Thrombozytenkonzentrate aus Vollblutspenden hergestellt und behandelt mit dem INTERCEPT Blood System für Pathogeninaktivierung produzieren. Die In vitro Qualität der endgültigen Thrombozyten Einheiten sind über 7 Tagen Lagerung ausgewertet.

Serie: Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Minimal Erythema Dose (MED) Testing

Ultraviolet radiation (UV) therapy is sometimes used as a treatment for various common skin conditions, including psoriasis, acne, and eczema. The dosage of UV light is prescribed according to an individual's skin sensitivity. Thus, to establish the proper dosage of UV light to administer to a patient, the patient is sometimes screened to determine a minimal erythema dose (MED), which is the amount of UV radiation that will produce minimal erythema (sunburn or redness caused by engorgement of capillaries) of an individual's skin within a few hours following exposure. This article describes how to conduct minimal erythema dose (MED) testing. There is currently no easy way to determine an appropriate UV dose for clinical or research purposes without conducting formal MED testing, requiring observation hours after testing, or informal trial and error testing with the risks of under- or over-dosing. However, some alternative methods are discussed.

Minimal Erythema Dose MED Testing

This article describes how to conduct minimal erythema dose (MED) testing in order to determine the lowest dose of ultraviolet radiation that will cause erythema (burning) when administered to an individual.

Minimal Erythema Dosis (MED) Testing

Ultraviolet radiation (UV) therapy is  sometimes used as a treatment for various common skin conditions, including  psoriasis, acne, and eczema. The ...

Forschung

Medizin

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow (ischemia) 1. Middle cerebral artery (MCA) delivers a great majority of blood to the lateral surface of the cortex 2, is the most common site of human stroke 3, and ischemia within its territory can result in extensive dysfunction or death 1,4,5. Survivors of ischemic stroke often suffer loss or disruption of motor capabilities, sensory deficits, and infarct. In an effort to capture these key characteristics of stroke, and thereby develop effective treatment, a great deal of emphasis is placed upon animal models of ischemia in MCA.
Here we present a method of permanently occluding a cortical surface blood vessel. We will present this method using an example of a relevant vessel occlusion that models the most common type, location, and outcome of human stroke, permanent middle cerebral artery occlusion (pMCAO). In this model, we surgically expose MCA in the adult rat and subsequently occlude via double ligature and transection of the vessel. This pMCAO blocks the proximal cortical branch of MCA, causing ischemia in all of MCA cortical territory, a large portion of the cortex. This method of occlusion can also be used to occlude more distal portions of cortical vessels in order to achieve more focal ischemia targeting a smaller region of cortex. The primary disadvantages of pMCAO are that the surgical procedure is somewhat invasive as a small craniotomy is required to access MCA, though this results in minimal tissue damage. The primary advantages of this model, however, are: the site of occlusion is well defined, the degree of blood flow reduction is consistent, functional and neurological impairment occurs rapidly, infarct size is consistent, and the high rate of survival allows for long-term chronic assessment.

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

We describe a highly reproducible method for the permanent occlusion of a rodent major cerebral blood vessel. This technique can be accomplished with very little peripheral damage, minimal blood loss, a high rate of long-term survival, and consistent infarct volume commensurate with the human clinical population.

Permanent Cerebral Gefäßverschluss<em&gt; Über</em&gt; Double Blattschraube und Durchtrennung

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The goal of computational methods for drug repurposing is to enable solutions for safer, cheaper and faster drug discovery. Towards this end, we developed a novel method that integrates genetic and clinical phenotype data from large-scale GWAS and PheWAS studies with detailed drug information on the concept of transitive Drug-Gene-Disease triads. We created "RE:fine Drugs," a freely available, interactive dashboard that automates gene, disease and drug-based searches to identify drug repurposing candidates. This web-based tool supports a user-friendly interface that includes an array of advanced search and export options. Results can be prioritized in a variety of ways, including but not limited to, biomedical literature support, strength and statistical significance of GWAS and/or PheWAS associations, disease indications and molecular drug targets. Here we provide a protocol that illustrates the functionalities available in the "RE:fine Drugs" system and explores the different advanced options through a case study.

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the &quot;RE:fine Drugs&quot; System

Here we describe a protocol using the web-based drug repurposing hypothesis generation tool: "RE:fine Drugs." This protocol can be modified to a user's preferences at the level of the query type (gene, drug or disease) and/or the range of available advanced options.

Drug Repurposing Hypothesengenerierung Mit der &quot;RE: Fein Drugs&quot; System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

Turbidimetry on Human Washed Platelets: The Effect of the Pannexin1-inhibitor Brilliant Blue FCF on Collagen-induced Aggregation

Turbidimetry is a laboratory technique that is applied to measure the aggregation of platelets suspended in either plasma (platelet-rich plasma, PRP) or in buffer (washed platelets), by the use of one or a combination of agonists. The use of washed platelets separated from their plasma environment and in the absence of anticoagulants allows for studying intrinsic platelet properties. Among the large panel of agonists, arachidonic acid (AA), adenosine di-phosphate (ADP), thrombin and collagen are the most frequently used. The aggregation response is quantified by measuring the relative optical density (OD) over time of platelet suspension under continuous stirring. Platelets in homogeneous suspension limit the passage of light after the addition of an agonist, platelet shape change occurs producing a small transitory increase in OD. Following this initial activation step, platelet clots form gradually, allowing the passage of light through the suspension as a result of decreased OD. The aggregation process is ultimately expressed as a percentage, compared to the OD of platelet-poor plasma or buffer. Rigorous calibration is thus essential at the beginning of each experiment. As a general rule: calibration to 0% is set by measuring the OD of a non-stimulated platelet suspension while measuring the OD of the suspension medium containing no platelets represents a value of 100%. Platelet aggregation is generally visualized as a real-time aggregation curve. Turbidimetry is one of the most commonly used laboratory techniques for the investigation of platelet function and is considered as the historical gold standard and used for the development of new pharmaceutical agents aimed at inhibiting platelet aggregation. Here, we describe detailed protocols for 1) preparation of human washed platelets and 2) turbidimetric analysis of collagen-induced aggregation of human washed platelets pretreated with the food dye Brilliant Blue FCF that was recently identified as an inhibitor of Pannexin1 (Panx1) channels.

We describe a straightforward method for the isolation of washed platelets from human blood followed by agonist-induced platelet aggregation measurements by turbidimetry. As an example we apply this method for studying the aggregation response of human platelets to collagen after a pre-incubation with the Pannexin1 channel inhibitor Brilliant Blue FCF.

Turbidimetrie Menschen Gewaschene Thrombozyten: Die Wirkung des Pannexin1-Inhibitor Brilliant Blue FCF auf Collagen-induzierte Aggregation

Turbidimetry is a laboratory technique that is applied to measure the aggregation of platelets suspended in either plasma (platelet-rich plasma, PRP) or ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

Routine-Screening Methode für Mikropartikel in Thrombozytentransfusionen

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Preparation, Procedures and Evaluation of Platelet-Rich Plasma Injection in the Treatment of Knee Osteoarthritis

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department. Existing non-surgical treatments have a limited effect on the repair of cartilage and on bone regeneration. Platelet-rich plasma (PRP) is an autologous bioactive substance that can repair cartilage injury and accelerate bone regeneration effectively. However, reporting of PRP preparation protocols in clinical studies is highly inconsistent, with the majority of studies providing insufficient information to allow the protocol to be reproduced. We describe a repeatable method of preparing PRP visually, the treatment of KOA using PRP intra-articular injection, and methods of evaluating the outcome. PRP was prepared using manual double centrifugation. The PRP layer was extracted from peripheral blood and used for knee joint cavity injection. Evaluations included assessments of blood platelet concentrations and clinical outcomes. Preparation of PRP by manual centrifugation requires less apparatus and is less costly than plasma filtration or centrifugation using equipment. The centrifugation time of our double centrifugation method was 6 and 5 minutes for the respective centrifugations at forces of 800 and 1400 x g, respectively, to allow for the consistent preparation of standardized PRP. However, a manual method is susceptible to operator error, and PRP batch preparation is not available. Intra-articular injection of PRP proved to be an effective treatment for knee osteoarthritis. The entire treatment procedure took less than 30 minutes, the blood platelet concentration of PRP could be standardized, and treatment was proven to be effective when evaluated by follow-up.

Knee osteoarthritis is frequently seen in the orthopedic department. We introduce in detail the entire knee osteoarthritis treatment process with platelet-rich plasma injection, including preparation, procedures, and evaluation.

Vorbereitung, Verfahren und Bewertung von Platelet-Rich Plasma-Injektion bei der Behandlung von Knie-Arthrose

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department. Existing non-surgical treatments have a limited ...

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity is disturbed in gastrointestinal, cardiovascular and metabolic diseases, which may result in easier access of biologically active compounds, such as gut bacterial metabolites, to the bloodstream. Thus, the permeability of the GBB may be a marker of both intestinal and extraintestinal diseases. Furthermore, the increased penetration of bacterial metabolites may affect the functioning of the entire organism.
Commonly used methods for studying the GBB permeability are performed ex vivo. The accuracy of those methods is limited, because the functioning of the GBB depends on intestinal blood flow. On the other hand, commonly used in vivo methods may be biased by liver and kidney performance, as those methods are based on evaluation of urine or/and peripheral blood concentrations of exogenous markers. Here, we present a direct measurement of GBB permeability in rats using an in vivo method based on portal blood sampling, which preserves intestinal blood flow and is virtually not affected by the liver and kidney function. 
Polyurethane catheters are inserted into the portal vein and inferior vena cava just above the hepatic veins confluence. Blood is sampled at baseline and after administration of a selected marker into a desired part of the gastrointestinal tract. Here, we present several applications of the method including (1) evaluation of the colon permeability to TMA, a gut bacterial metabolite, (2) evaluation of liver clearance of TMA, and (3) evaluation of a gut-portal blood-liver-peripheral blood pathway of gut bacteria-derived short-chain fatty acids. Furthermore, the protocol may also be used for tracking intestinal absorption and liver metabolism of drugs or for measurements of portal blood pressure.

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The access of nutrients, microbiota metabolites and medicines to the circulation is controlled by the gut-blood barrier (GBB). We describe a direct method for measuring the GBB permeability in vivo, which, in contrast to commonly used indirect methods, is virtually not affected by liver and kidney functions.

Eine In Vivo -Methode zur Bewertung der Darm-Blut-Schranke und LEBERSTOFFWECHSEL Mikrobiota Produkte

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent vasoactive agents, nitric oxide (NO), can also act as a powerful inhibitor of platelet aggregation. Direct NO detection in blood is very challenging due to its high reactivity with cell-free hemoglobin that limits NO half-life to the millisecond range. Currently, NO changes after interventions are only estimated based on measured changes of nitrite and nitrate (members of the nitrate-nitrite-NO metabolic pathway). However precise, these measurements are rather difficult to interpret vis a vis actual NO changes, due to the naturally high baseline nitrite and nitrate levels that are several orders of magnitude higher than expected changes of NO itself. Therefore, the development of direct and simple methods that would allow one to detect NO directly is long overdue. This protocol addresses a potential use of platelets as a highly sensitive NO sensor in blood. It describes initial platelet rich plasma (PRP) and washed platelet preparations and the use of nitrite and deoxygenated red blood cells as NO generators. Phosphorylation of VASP at serine 239 (P-VASPSer239) is used to detect the presence of NO. The fact that VASP protein is highly expressed in platelets and that it is rapidly phosphorylated when NO is present leads to a unique opportunity to use this pathway to directly detect NO presence in blood.

Here, we present a protocol to address the potential use of platelets as a highly sensitive nitric oxide sensor in blood. It describes initial platelet preparation and the use of nitrite and deoxygenated red blood cells as nitric oxide generators.

Thrombozyten-basierte Erkennung von Stickoxid im Blut durch die Messung VASP Phosphorylierung

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans

In living organisms, intestinal hyperpermeability is a serious symptom that leads to many inflammatory bowel diseases (IBDs). Caenorhabditis elegans is a nonmammalian animal model that is widely used as an assay system due to its short lifespan, transparency, cost-effectiveness, and lack of animal ethics issues. In this study, a method was developed to investigate the effects of different bacteria and 3,3'-diindolylmethane (DIM) on the intestinal permeability of C. elegans with a high-throughput image analysis system. The worms were infected with different gut bacteria or cotreated with DIM for 48 h and fed with fluorescein isothiocyanate (FITC)-dextran overnight. Then, the intestinal permeability was examined by comparing the fluorescence images and the fluorescence intensity inside the worm bodies. This method may also have the potential to identify probiotic and pathogenic intestinal bacteria that affect intestinal permeability in the animal model and is effective for examining the effects of harmful or health-promoting chemicals on intestinal permeability and intestinal health. However, this protocol also has some considerable limitations at the genetic level, especially for determining which genes are altered to control illness, because this method is mostly used for phenotypic determination. In addition, this method is limited to determining exactly which pathogenic substrates cause inflammation or increase the permeability of the worms' intestines during infection. Therefore, further in-depth studies, including investigation of the molecular genetic mechanism using mutant bacteria and nematodes as well as chemical component analysis of bacteria, are required to fully evaluate the function of bacteria and chemicals in determining intestinal permeability.

Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans

This protocol describes how to measure intestinal permeability of Caenorhabditis elegans. This method is helpful for basic biological research on intestinal health related to the interaction between intestinal bacteria and their host and for screening to identify probiotic and chemical agents to cure leaky gut syndrome and inflammatory bowel diseases.

Messung der Auswirkungen von Bakterien und Chemikalien auf die Darmdurchlässigkeit von Caenorhabditis elegans

In living organisms, intestinal hyperpermeability is a serious symptom that leads to many inflammatory bowel diseases (IBDs). Caenorhabditis elegans is a ...

Laminectomy for the Removal of Thoracic Ossification of the Ligamentum Flavum (TOLF) Using Ultrasonic and Conventional Osteotomes

Thoracic ossification of the ligamentum flavum (TOLF) is a common cause of progressive thoracic myelopathy. TOLF is typically treated with surgical decompression. A variety of surgical techniques, including laminoplasty, laminectomy, and lamina fenestration, are used for the effective treatment of TOLF. However, traditional methods are associated with a substantial risk of perioperative complications, including dural laceration and/or iatrogenic spinal cord injury. Therefore, it is important to develop an efficient and secure surgical technique for TOLF. Herein, we describe a method for laminectomyperformed at the thoracic spine using an ultrasonic osteotome combined with a conventional osteotome. This technique can reduce intraoperative complications. This is a relatively safe and easy-to-learn method that should be recommended for the treatment of TOLF.

Laminectomy for the Removal of Thoracic Ossification of the Ligamentum Flavum TOLF Using Ultrasonic and Conventional Osteotomes

We present a methodology for using an ultrasonic osteotome combined with a conventional osteotome for laminectomy in thoracic ossification of the ligamentum flavum. This is a relatively safe and easy-to-learn method that avoids the perioperative complications associated with the conventional method.

Laminektomie zur Entfernung der thorakalen Ossifikation des Ligamentum flavum (TOLF) mittels Ultraschall und konventionellen Osteotomen

Thoracic ossification of the ligamentum flavum (TOLF) is a common cause of progressive thoracic myelopathy. TOLF is typically treated with surgical ...