O financiamento para a publicação é fornecida por Cerus Corp, fabricante do Sistema de Sangue INTERCEPT.

1. Sangue Total <ol><li> Coletar sangue total de doadores voluntários em 450 ml coleção topo / fundo define de acordo com a diretrizes de coleta de sangue locais. </li><li> O sangue total é armazenado durante um período mínimo de 2 horas em uma placa de arrefecimento antes da centrifugação e separação. </li></ol> 2. Buffy Preparação Brasão <ol><li> Centrifuga-se o sangue total utilizando uma rotação difícil separar o sangue em três camadas: as células vermelhas do sangue, buffy coat e plasma. Parâmetros de centrífuga foram utilizados 4880 RCF durante 11 minutos à temperatura de 22 ± 2 ° C. </li><li> Utilizar um separador de sangue automatizado para expressar o plasma para dentro do saco de satélite superior e as células vermelhas do sangue (RBC) na bolsa de satélite inferior, deixando a cobertura amarelada no recipiente de recolha. Alvo significam as faixas de volume e hematócrito para casacos buffy são aproximadamente 48 ml e 37%, respectivamente. </li><li> Os buffy-revestimentos são armazenadas durante a noite num agitador de plaquetas a 22 ± 2 ° C. </li></ol><ol><li> Estéril de conexão 7 flogística e 300 ml de solução de aditivo SSP + plaquetas (PAS), em uma configuração comboio com linhas paralelas para reduzir o comprimento do comboio, o PAS deve estar no topo do trem. Prenda a linha entre o PAS eo revestimento buffy primeiro. </li><li> Abrir as ligações entre as unidades estéreis buffy coat e permitir que o revestimento buffy escorrer para o recipiente anterior. </li><li> Abrir a solda e o grampo entre a PAS e a crosta inflamatória primeiro. Permitir que um terço da solução de aditivo de lavar por meio de cada um dos recipientes de camada leuco-plaquetária sequencialmente. Repita duas vezes mais de cada vez utilizando metade da PAS restante. </li><li> A média buffy coat volume da piscina deve ser aproximadamente 600 ml. Se o volume do alvo e do hematócrito dos revestimentos individuais buffy forem satisfeitas, o rácio de plasma será de 32 - 47%, conforme necessário para o tratamento de inactivação INTERCEPT patógeno mais tarde no processo. </li><li> Descarte o vazio SSP + e buffyrecipientes casaco. </li><li> Para a recuperação de plaquetas ideal, mantenha a piscina do agitador durante 1 hora antes da centrifugação. </li><li> Estéril ligar um recipiente de armazenagem de plaquetas com filtro leucorredução integrada para a piscina buffy coat. </li><li> Executar um &quot;spin suave&quot; do conjunto de buffy coat para separar as células vermelhas do sangue a partir das plaquetas na suspensão (462 RCF durante 9 min, 20 seg.) Expressar a suspensão de plaquetas usando um separador de sangue automatizado através do filtro leucorredução no recipiente de armazenagem de plaquetas. </li><li> Os requisitos de processamento descritas anteriormente assegurar que a suspensão de plaquetas satisfaz as especificações de processamento INTERCEPT de 300 ml - 420 ml de volume, 2,5-7,0 x 10 11 dose de plaquetas, e ≤ a 4 x 10 6 / ml de glóbulos vermelhos. </li></ol> 4. INTERCEPTAR Tratamento <ol><li> Realizar o tratamento INTERCEPT antes do final do 1 º dia após a coleta (dia 0 é o dia da coleta). </li><li> Desembrulhe o Conjunto de Processamento INTERCEPTcom recipientes de armazenamento dupla da bolsa de plástico transparente. </li><li> Conectar o recipiente estéril suspensão de plaquetas aos tubos do recipiente amotosalen sobre o conjunto de processamento INTERCEPT. </li><li> Rotular a interceptação de processamento de recipientes de armazenamento conjunto com a identificação adequada de sangue produto seguindo as exigências locais. </li><li> Pendurar as plaquetas e quebrar primeiro a cânula inferior no recipiente amotosalen, permitindo que a solução amotosalen flua para o recipiente de iluminação. Quebrar a cânula de topo no recipiente amotosalen permitindo que as plaquetas a fluir através do recipiente para o recipiente amotosalen iluminação. </li><li> Misturar cuidadosamente a mistura de plaquetas e amotosalen e expressar o ar a partir do recipiente para o recipiente de iluminação amotosalen. </li><li> Expressam uma pequena quantidade da mistura de plaquetas à tubagem, enchendo cerca de 4 cm da tubagem. Isto assegura plaquetas em ambos os tubos e submeter-se ao recipiente de iluminação inactivati ​​patógenoem tratamento. </li><li> Selar o tubo entre o recipiente de iluminação e do recipiente amotosalen. Deixar não mais do que cerca de 4 cm de tubo que se prolongam a partir do recipiente de iluminação. Retire e descarte a plaquetas e recipientes vazios amotosalen e fechar os grampos nas bolsas de amostragem. </li><li> Colocar o conjunto de processamento para o iluminador com o recipiente de iluminação no compartimento grande no lado esquerdo e do organizador no compartimento mais pequeno, no lado direito. </li><li> Use o dispositivo de código de barras de mão para inserir a ID doação, código do produto, número de lote e processamento conjunto para o iluminador. Feche a tampa de metal e, quando solicitado na interface gráfica iluminador, fechar a gaveta. Pressione o botão &quot;Iniciar&quot; para iniciar a Iluminação. </li><li> Depois de iluminação, retirar o conjunto de processamento a partir do iluminador. O iluminador imprime automaticamente o relatório para a unidade de tratamento tratados com plaquetas (s). </li><li> Desembrulhar os recipientes do organizador e pendurar a platelets e conjunto de processamento, quebrar a cânula na saída do recipiente de iluminação, e permitir que as plaquetas a fluir para dentro do dispositivo composto de adsorção (CAD) do recipiente. </li><li> Tomando cuidado para não dobrar o wafer CAD, expressar o ar a partir do recipiente para o recipiente CAD iluminação utilizando um extractor de plasma. </li><li> Selar o tubo, próximo da abertura de entrada do recipiente de CAD. Retire e descarte o recipiente vazio iluminação. </li><li> Colocar o recipiente de CAD com os recipientes de armazenamento conectados em um agitador de plaquetas, pelo menos, 6 horas, mas não mais de 16 horas. Isto irá resultar na redução da amotosalen residual a uma concentração de ≤ 2 uM. </li><li> Após o tratamento da DAC, remover as unidades de plaquetas a partir do agitador. Pendure as plaquetas. Quebrar a cânula e permitir que as plaquetas a fluir para os recipientes de armazenamento. </li><li> Exprime-se o ar a partir dos recipientes de armazenamento para o recipiente de CAD. Deixe que a parte de trás do fluxo residual concentrado de plaquetas nos recipientes de armazenamento,gravidade. Selar o tubo acima da Y-encaixe e remova o recipiente vazio CAD. </li><li> Volume de redistribuir entre os recipientes de armazenamento, conforme necessário. Os ajustes de volume são feitas através da pesagem dos recipientes de armazenamento. Selar o tubo em cada recipiente de armazenamento de alguns centímetros acima da entrada do recipiente de armazenamento, o que facilita a obtenção de uma amostra estéril do produto final, tal como descrito em 5.2. </li></ol> 5. Amostragem produto <ol><li> Para os testes de rotina QC, os recipientes de armazenamento final pode ser amostrada uma vez, utilizando o saco de amostragem nos recipientes de armazenamento. Para fazer isso, assegurar que a unidade de plaquetas é bem misturada e, em seguida abrir o grampo para a bolsa e apertar várias vezes. Selar o tubo após a bolsa ter enchido com as plaquetas. Transfira a amostra das plaquetas para um tubo de laboratório adequado e realizar ensaios de imediato. </li><li> Para obter amostras em múltiplos pontos temporais ao longo de armazenamento, tal como um estudo de validação, conectar estérilum recipiente de amostragem de novo para o tubo do recipiente de armazenagem de plaquetas. Certifique-se de que as plaquetas são bem misturados antes de serem transferidos para o recipiente de recolha. </li></ol> 6. Avaliação in vitro da função <ol><li> Para este estudo de validação, a avaliação in vitro foi realizada após CAD tratamento (Dia 1 ou Dia 2, dependendo da duração CAD) e novamente no Dia 4 (ou 5 º dia) e no dia 7. Em medições in vitro incluiu volume, a contagem de plaquetas, pH, gás de sangue (PO 2, PCO 2), glicose, lactato, e rodando. </li><li> O volume foi determinado pelo peso, utilizando 1,01 g / ml, tal como a gravidade específica de plaquetas na solução de aditivo. </li><li> Contaminação da hemoglobina foi avaliado visualmente por comparação com uma escala de cores. </li><li> Roda foi determinada visualmente. </li><li> Consulte &quot;Tabela de equipamentos&quot; para a metodologia de outros ensaios. </li></ol> 7. Resultados representativos O processo de produção de double dose de buffy coat plaquetas inicia-se com a produção de revestimentos individuais buffy que satisfazem as especificações de destino para o volume e o hematócrito. Como não é prático para medir o hematócrito do indivíduo flogística durante o processo de validação final, começou a realizar um esforço separado para otimizar a nossa buffy casacos para garantir que poderiam atender de forma consistente volume alvo e hematócrito. Como mostrado na Tabela 1, os casacos optimizado buffy comparados favoravelmente com os valores alvo para o volume e hematócrito a 46 ± 2 mL e 37 ± 3%, respectivamente. Depois de partilha, o volume do hematócrito e da piscina buffy coat deve ser de aproximadamente 600 ml e 20%, respectivamente, antes da centrifugação, rotação suave. Como ilustrado na Tabela 2, os conjuntos de buffy coat em média 615 ± 5 ml, o hematócrito em média de 19 ± 1%. Os resultados de spin suaves centrifugação em um conc dose dupla de plaquetasEntrate que preencham os requisitos de entrada para a inativação de patógenos que utilizam o Sistema de Sangue INTERCEPT DS conjunto de processamento. Parâmetros de entrada chave para o tratamento INTERCEPT incluem contagem, volume de plaquetas, plasma relação e conteúdo RBC. Além disso, pretende-se recuperar ≥ 75% das plaquetas no concentrado de plaquetas, em comparação com o pool de buffy coat. Por exigências locais, a contaminação de glóbulos brancos (WBC) deve ser &lt;1x10 6 / unidade. O concentrado de plaquetas na nossa validação preencheram os parâmetros chave para o tratamento INTERCEPT, bem como os alvos de WBC contaminação e recuperação das plaquetas, como mostrado na Tabela 3. O processo de inactivação de agentes patogénicos INTERCEPT é executada no concentrado de dose dupla de plaquetas utilizando um conjunto único de processamento INTERCEPT. O conjunto de processamento contém dois recipientes de armazenamento integrado que permitem que a unidade tratada para ser dividida em duas doses individuais terapêuticas de plaquetas após a conclusão do caminhoOgen processo de inativação. Orientações europeias exigem que 75% das unidades testadas contêm ≥ 200x10 9 plaquetas por terapêutica dose1; requisitos locais na Suécia exigem que 75% das unidades testadas contêm&gt; 240x10 9 plaquetas por dose. Após o tratamento INTERCEPT, o teor médio de plaquetas foi de 265 ± 22 x10 9 (n = 24). Além disso, 88% das unidades alcançado ou ultrapassado 240x10 9 plaquetas por dose terapêutica, o que está bem dentro de ambas as diretrizes e regulamentos europeus suecos. Veja as Figuras 1 e 2 para uma ilustração da dupla preparação casaco dose de Buffy e processos INTERCEPT tratamento, respectivamente. Para esta validação, medimos o em características in vitro do concentrado de plaquetas após o tratamento INTERCEPT (isto é, após a separação entre os recipientes de armazenamento individuais); parâmetros foram medidos ao longo de 7 dias de armazenamento. A média eo desvio-padrão foram coletadas paradosagem de plaquetas, pH, PO 2, PCO 2, a produção de lactato e consumo de glicose. A Figura 3 mostra a média de uma dose inicial de plaquetas do concentrado de plaquetas dose dupla antes do tratamento INTERCEPT e a dose média de plaquetas em cada um dos produtos da divisão após tratamento INTERCEPT ao longo de 7 dias de armazenamento. Perda de plaquetas durante a armazenagem foi de aproximadamente 9%. Essa redução não é diferente da esperada perda de plaquetas durante a armazenagem de plaquetas convencionais. 2 A Tabela 4 resume as características in vitro em plaquetas dos INTERCEPT após o tratamento e dividindo-se em unidades individuais. Por requisitos europeus, o pH de plaquetas deve ser superior a 6,4 através do fim da vida útil de prateleira. Durante o processamento, o pH do concentrado de plaquetas cai um pouco dependendo da concentração de plaquetas, volume, e a permeabilidade ao gás do sto plaquetáriarecipiente raiva. Figura 4 ilustra o pH dos produtos da divisão de plaquetas ao longo de 7 dias de armazenamento. Durante o armazenamento, o pH é mantido estável e bem dentro das exigências de processamento. Como mostrado nas Figuras 5A e 5B, o consumo de O2 de plaquetas e produção de CO 2 indicam a respiração continuada pelas plaquetas intercepto no recipiente PL2410 durante 7 dias de armazenamento. Figuras 6A e 6B mostram os níveis de lactato e de glucose, ao longo de 7 dias de armazenamento . O consumo de glucose e produção de lactato de plaquetas são consistentes com o outro, durante os 7 dias de armazenamento. 5 unidades tinham níveis de glicose inferior a 1,11 mmol / l (o limite inferior para o doseamento de glucose). A preparação buffy coat e plaquetas validação agrupamento produzido concentrados que preencheram os critérios de entrada para tratamento INTERCEPT, especificamente, volume, contagem de plaquetas, plasma relação, e vermelho blood contaminação celular. As unidades finais preencheram os critérios de validação ao longo de 7 dias de armazenamento, incluindo a dose de plaquetas e pH. <table border="1"><tbody><tr><td> Parâmetro </td><td> Target Range </td><td> Resultados A média ± DP </td></tr><tr><td> Volume (ml) </td><td> ~ 48 </td><td> 46 ± 2 </td></tr><tr><td> Hematócrito (%) </td><td> ~ 37 </td><td> 37 ± 3 </td></tr><tr><td> Tempo de espera antes de partilha </td><td> Pernoite em agitador </td><td> Pernoite em agitador </td></tr></tbody></table> Tabela 1. Características do indivíduo Buffy Coats (n = 19). <table border="1"><tbody><tr><td> Parâmetro </td><td> Target Range </td><td> Resultados A média ± DP </td></tr><tr><td> Volume (ml) </td><td> ~ 600 </td><td> 615 ± 5 </td></tr><tr><td> Hematocrit (%) </td><td> ~ 20 </td><td> 19 ± 1 </td></tr><tr><td> Tempo de espera antes da centrifugação </td><td> 1 hora em agitador </td><td> 1 hora em agitador </td></tr></tbody></table> Tabela 2. Características das Piscinas Buffy Coat (n = 12). <table border="1"><tbody><tr><td> Parâmetro </td><td> Alvo </td><td> Resultados A média ± DP </td></tr><tr><td> Volume (ml) </td><td> 370-420 </td><td> 404 ± 8 </td></tr><tr><td> A contagem de plaquetas (x10 9 / unidade) </td><td> 250-700 </td><td> 577 ± 62 </td></tr><tr><td> A média de recuperação de plaquetas (%) </td><td> ≥ 75 </td><td> 75 ± 4 </td></tr><tr><td> Plasma proporção (%) </td><td> 32-47 </td><td> 38 ± 1 </td></tr><tr><td> RBC (x10 6 / ml) </td><td> ≤ 4 </td><td> 1,2 ± 0,4 </td></tr><tr><td> WBC (x10 6 </saté&gt; Unidade /) </td><td> ≤ 1 </td><td> 0,11 ± 0,1 </td></tr><tr><td> Tempo de espera antes da Interceptação (hr) </td><td> ≤ final do dia 1 </td><td> ≤ final do dia 1 </td></tr></tbody></table> Tabela 3. Características da Plaquetas Double-Dose Concentrados (n = 12). <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Média ± DP </td><td> Min </td><td> Max </td></tr><tr><td> Volume (ml) </td><td> 199 ± 16 </td><td> 182 </td><td> 236 </td></tr><tr><td> A contagem de plaquetas (x10 9 / unidade) </td><td> 265 ± 22 </td><td> 225 </td><td> 292 </td></tr><tr><td> pH (22 ° C) </td><td> 6,9 ± 0,1 </td><td> 6,8 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> pO 2 (kPa) </td><td> 21,4 ± 4,8 </td><td> 12,8 </td><td> 27,3 </td></tr><tr><td> pCO 2 (kPa) </td><td> 4,3 e plusmn, 0,4 </td><td> 3,3 </td><td> 4,9 </td></tr><tr><td> De lactato (mmol / l) </td><td> 9,1 ± 1,7 </td><td> 6,8 </td><td> 12,4 </td></tr><tr><td> Glucose (mmol / l) </td><td> 5,3 ± 0,9 </td><td> 3,7 </td><td> 6,5 </td></tr></tbody></table> Tabela 4. Características do INTERCEPT Dia plaquetas tratadas 1/2 (em unidades individuais, n = 24). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig1.jpg" /> Figura 1. Produção de um concentrado duas vezes a dose de plaquetas a partir de um pool de 7 flogística. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig2.jpg" /> Figura 2. Inativação de patógenos de um concentrado de plaquetas dose dupla com o Sistema de Sangue INTERCEPT. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig3.jpg" /> Figura 3. A dose média de plaquetas antes e durante7 dias após o tratamento INTERCEPT (n = 12 antes INTERCEPT, n = 24 depois INTERCEPT). <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig4.jpg" /> Figura 4. A média ± DP de pH de plaquetas após INTERCEPT tratamento (n = 24). <img alt="Figura 5A" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig5a.jpg" /> Figura 5A. Média ± SD pO 2 INTERCEPT após tratamento (n = 24). <img alt="A Figura 5B" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig5b.jpg" /> Figura 5B. Média ± SD pO 2 INTERCEPT após tratamento (n = 24). <img alt="Figura 6A" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig6a.jpg" /> Figura 6a. Níveis médios de lactato ± DP depois da interceptação de tratamento (n = 24). <img alt="Figura 6B" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig6b.jpg" /> Figura 6B. Os níveis médios de glicose &amp;plusmn; SD após o tratamento INTERCEPT (n = 24).

<ol>
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Produção e livre acesso a este artigo é patrocinado pela Cerus.

Plaquetas Buffy Coat exigem várias etapas de processamento que resultam em pós de coleta de custos, incluindo o pessoal de tempo, materiais de consumo, equipamentos e resíduos, que deve ser tido em conta o custo total de produção das unidades de plaquetas. Melhorar a produção de plaquetas a partir de cada buffy coat (via optimização do volume de buffy coat e hematócrito) permite a produção de uma unidade de revestimento duplo de dose buffy plaquetas a partir de um conjunto de sete camadas leuco-plaquetária. Quando esta optimização é realizada, o número de flogística requerida para produzir um determinado número de doses de plaquetas pode ser reduzida, desse modo melhorando a utilização geral de buffy casacos e permitindo a produção de plaquetas adicionais concentrados (PCs). Pessoal tempo, bem como os custos de consumíveis e equipamentos, tais como aparelhos de agrupamento, a solução de aditivo de plaquetas, plaquetas de conexão estéreis, conjuntos de filtros, e os procedimentos de centrifugação são reduzidos em até 50%. Além de otimizar a produção de plaquetas e reduzindo os custos associados, thio método pode gerar uma pool de concentrado de plaquetas (PC), que satisfaz os requisitos de entrada para utilização com o conjunto de armazenamento de duplo processamento INTERCEPT recipiente, permitindo-nos fornecer uma maior protecção aos receptores de transfusão nossos também. O Sistema de Sangue INTERCEPT para inactivação patógeno utiliza amotosalen e luz ultravioleta A (UVA), a ligação cruzada de ADN covalentemente e RNA, prevenindo a replicação do ácido nucleico e de agentes patogénicos de processamento incapazes de causar doença. 3 É inactivar eficazmente um amplo espectro de agentes patogénicos, incluindo os vírus, bactérias , parasitas e contaminantes doadores células brancas do sangue. 4-6 INTERCEPT fornece uma alternativa ao paradigma atual de testes para patógenos emergentes, que historicamente envolve um atraso substancial, enquanto um novo teste é desenvolvido e, finalmente, requer um investimento financeiro significativo para implementar quando um teste torna-se disponível. 7,8 Ele também pode fornecer uma alternativa para a segurança redundante medires, como a detecção de bactérias 9 e radiação gama. 10-12 Além disso, INTERCEPT nos permite tratar unidades de plaquetas duplas dose que beneficia a nossa eficiência de produção e nos ajuda a aderir a nossos orçamentos. INTERCEPT ea dose dupla método buffy coat pode ser adaptado a uma variedade de fluxos de trabalho do centro de sangue. Como exemplos, os conjuntos de sangue total pode ser aumentado para 500 ml; coleções também pode ser armazenado durante a noite a 22 ° C antes da separação. Além disso, um método alternativo buffy coat agrupamento é possível (por exemplo, um método polvo, em vez de um método de comboio) e / ou um dispositivo automático (por exemplo, tacsi) pode ser utilizada para a segunda centrifugação e separação da suspensão de plaquetas a partir de células vermelhas restantes . Se o conteúdo de plaquetas aumentada se necessário, várias técnicas disponíveis incluindo a pré-selecção de dadores com base na contagem de plaquetas, a incubação durante a noite do sangue total, adjustamento de configurações de centrifugação, ou a utilização de uma piscina de 8 de buffy coats em vez de 7. Devido à limitação de pooling define actualmente disponíveis e a capacidade dos recipientes de centrífuga, o volume total do conjunto de buffy coat deve ser aproximadamente 600 ml. O processo de centrifugação e configurações descritas neste protocolo foram otimizadas para obter o produto que atenda aos parâmetros de interceptação para uma piscina de 7 casacos de Buffy. As configurações de centrifugação deve ser modificada, se o número de flogística na piscina é modificado. Em alguns países, a dose mínima de plaquetas é maior e os requisitos de CQ são mais rigorosos do que na Suécia. Como tal, os nossos resultados podem não ser universalmente aplicável. Nesses países, o PC dose dupla antes do tratamento INTERCEPT terá de conter um número maior de plaquetas, a fim de atender às exigências locais após o tratamento interceptar e divisão. Uma vez que o teor máximo de plaquetas e volume de tratamento de for INTERCEPT são 7x10 11 plaquetas e 420 ml, respectivamente, o percentual de unidades que excedem os requisitos de processamento interceptar ou ter conteúdo de plaquetas suficiente para ser dividida em duas doses terapêuticas, variam de acordo com fatores como os requisitos locais para a dose de plaquetas, os critérios de CQ, buffy coat resultados de otimização e estabilidade de produção. Se um PC dose dupla excede os requisitos de processamento INTERCEPT, pode ser ajustado manualmente para satisfazer os requisitos e subsequentemente tratada. Em poucas ocasiões onde a piscina casaco 7-buffy rende plaquetas insuficientes para um produto dose dupla depois da interceptação, que optar por não realizar o tratamento interceptar. Alternativamente, outros centros de sangue pode optar por tratar o PC com um único conjunto de processamento de doses INTERCEPT (ou seja, o conjunto de grande volume) e armazenar o PC como uma maior dose única terapêutica, assim, a realização inativação de patógenos em todas as unidades. A fim de garantir o cumprimento nossoCQ e requisitos para inativar patógenos como muitos de nossas unidades de plaquetas quanto possível, nós selecionamos casacos buffy com base nas contagens de plaquetas do doador, que, quando reunidos, resultarão em um conteúdo mínimo de plaquetas de 5.6x10 11 plaquetas na piscina. Isso garante conteúdo de plaquetas suficiente para produzir duas doses terapêuticas após o tratamento interceptar. Nosso validação demonstra que 7 unidades de sangue total do revestimento buffy derivados podem com sucesso ser reunidas e tratadas com o processo de INTERCEPT para plaquetas, que resulta em dois produtos de plaquetas inactivados patógenos que satisfazem os critérios de aceitação para a fabricação de (requisitos suecas e orientações europeias), para o apoio dos pacientes necessidade de transfusão de plaquetas de acordo com a diretrizes de prática clínica e padrão de métodos de infusão de plaquetas na Suécia.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material / Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Whole blood donation, primary separation, and platelet production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection pack</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>R6485</td>
			<td>Top/Bottom set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated component extractor</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>Optipress-II</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood mixer and balance system</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>Easymix V3</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet leukocyte filtration set</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>K4R7042</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Hettich</td>
			<td>Roto Silenta 63 RS</td>
			<td>Version 5.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet additive solution - SSP+</td>
			<td>MacoPharma</td>
			<td>SSP2030U</td>
			<td>300 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile tubing welder</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>T-SCD</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>INTERCEPT treatment &amp; storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INTERCEPT processing set</td>
			<td>Cerus</td>
			<td>INT2503</td>
			<td>Dual Storage (DS) set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INTERCEPT Illuminator</td>
			<td>Cerus</td>
			<td>INT100</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC sample pack</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>FTX 1122</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Helmer</td>
			<td>PC2200/PC3200</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agitator</td>
			<td>Helmer</td>
			<td>PF48H/PF96H</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Evaluation of in vitro Platelet Function</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood gas analyzer</td>
			<td>Radiometer</td>
			<td>ABL 735</td>
			<td>Used for pH, blood gases, and lactate measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemistry system</td>
			<td>Ortho Clinical Diagnostic</td>
			<td>Vitros 5.1</td>
			<td>Used for glucose measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematology analyzer</td>
			<td>Boule Medical AB</td>
			<td>Medonic CA620-Cellguard</td>
			<td>Used for platelet count measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>FACSCanto</td>
			<td>Used for white blood cell measurement</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation and pathogen inactivation of double dose buffy coat platelet products using the intercept blood system

Centros de sangue são confrontados com muitos desafios, incluindo rendimento de produção maximização das doações de sangue de produtos que recebem, bem como assegurar o mais elevado nível de segurança para os pacientes de transfusão, incluindo a proteção de doenças transmissíveis de transfusão. Isso deve ser feito de uma forma fiscalmente responsável, que minimiza as despesas operacionais, incluindo consumíveis, equipamentos, resíduos e custos de pessoal, entre outros. Vários métodos estão disponíveis para a produção de concentrados de plaquetas à transfusão. Uma das mais comuns é o método buffy coat em que uma unidade única terapêutica de plaquetas (≥ 2,0 x10 11 plaquetas por unidade ou por regulamentação local) é preparada através da conjugação da camada buffy coat de até seis doações de sangue total. Um procedimento para a produção de &quot;duplo&quot; de dose de plaquetas derivadas de sangue total foi recentemente desenvolvido. Aqui apresentado é um novo método para a preparaçãodose dupla de plaquetas derivadas de sangue total concentrados de piscinas de 7 casacos Buffy e posteriormente tratar as unidades de dose dupla com o Sistema de Sangue INTERCEPT para inativação de patógenos. INTERCEPÇÃO foi desenvolvido para inactivar os vírus, bactérias, parasitas, e as células brancas de doadores contaminantes que podem estar presentes no sangue doado. Emparelhamento interceptar com o dobro da dose buffy coat método, utilizando o processamento de intercepção definido com recipientes de armazenamento Duplas (o &quot;set DS&quot;), permite aos centros de sangue para tratar cada uma de suas unidades de dose dupla em um conjunto de processamento patógeno inativação único, maximizando assim a segurança do paciente minimizando os custos. A dose dupla método buffy coat, requer menos camadas Buffy e reduz o uso de materiais de consumo em até 50% (por exemplo, conjuntos de pooling, conjuntos de filtros, a solução de aditivo de plaquetas, e wafers de conexão estéreis) em relação ao preparo e tratamento de dose única unidades buffy coat de plaquetas . Outras economias de custos incluem menos resíduos, menos equipamentos manutence, baixo consumo de energia, redução do tempo de pessoal, e menor custo de cobrança, em comparação com a técnica de aférese.

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Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Este artigo descreve o processo utilizado por Örebro University Hospital para produzir dose dupla de plaquetas buffy coat concentra preparados a partir de doações de sangue total e tratados com o Sistema de Sangue INTERCEPT para inativação de patógenos. O<em&gt; In vitro</em&gt; Qualidade das unidades de plaquetas finais são avaliados ao longo de 7 dias de armazenamento.

Preparação e inativação de patógenos de dose dupla de Buffy produtos de plaquetas revestimento utilizando o Sistema de Sangue INTERCEPT

Blood centers are faced with many challenges including maximizing production yield from the blood product donations they receive as well as ensuring the ...

preparation-pathogen-inactivation-double-dose-buffy-coat-platelet

Research

JoVE Journal

Medicine

28.6K visualizações.  Örebro University Hospital. Este artigo descreve o processo utilizado por Örebro University Hospital para produzir dose dupla de plaquetas buffy coat concentra preparados a partir de doações de sangue total e tratados com o Sistema de Sangue INTERCEPT para inativação de patógenos. O In vitro Qualidade das unidades de plaquetas finais são avaliados ao longo de 7 dias de armazenamento.

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Minimal Erythema Dose (MED) Testing

Ultraviolet radiation (UV) therapy is sometimes used as a treatment for various common skin conditions, including psoriasis, acne, and eczema. The dosage of UV light is prescribed according to an individual's skin sensitivity. Thus, to establish the proper dosage of UV light to administer to a patient, the patient is sometimes screened to determine a minimal erythema dose (MED), which is the amount of UV radiation that will produce minimal erythema (sunburn or redness caused by engorgement of capillaries) of an individual's skin within a few hours following exposure. This article describes how to conduct minimal erythema dose (MED) testing. There is currently no easy way to determine an appropriate UV dose for clinical or research purposes without conducting formal MED testing, requiring observation hours after testing, or informal trial and error testing with the risks of under- or over-dosing. However, some alternative methods are discussed.

Minimal Erythema Dose MED Testing

This article describes how to conduct minimal erythema dose (MED) testing in order to determine the lowest dose of ultraviolet radiation that will cause erythema (burning) when administered to an individual.

Eritema Dose (MED), testes mínimos

Ultraviolet radiation (UV) therapy is  sometimes used as a treatment for various common skin conditions, including  psoriasis, acne, and eczema. The ...

Medicina

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow (ischemia) 1. Middle cerebral artery (MCA) delivers a great majority of blood to the lateral surface of the cortex 2, is the most common site of human stroke 3, and ischemia within its territory can result in extensive dysfunction or death 1,4,5. Survivors of ischemic stroke often suffer loss or disruption of motor capabilities, sensory deficits, and infarct. In an effort to capture these key characteristics of stroke, and thereby develop effective treatment, a great deal of emphasis is placed upon animal models of ischemia in MCA.
Here we present a method of permanently occluding a cortical surface blood vessel. We will present this method using an example of a relevant vessel occlusion that models the most common type, location, and outcome of human stroke, permanent middle cerebral artery occlusion (pMCAO). In this model, we surgically expose MCA in the adult rat and subsequently occlude via double ligature and transection of the vessel. This pMCAO blocks the proximal cortical branch of MCA, causing ischemia in all of MCA cortical territory, a large portion of the cortex. This method of occlusion can also be used to occlude more distal portions of cortical vessels in order to achieve more focal ischemia targeting a smaller region of cortex. The primary disadvantages of pMCAO are that the surgical procedure is somewhat invasive as a small craniotomy is required to access MCA, though this results in minimal tissue damage. The primary advantages of this model, however, are: the site of occlusion is well defined, the degree of blood flow reduction is consistent, functional and neurological impairment occurs rapidly, infarct size is consistent, and the high rate of survival allows for long-term chronic assessment.

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

We describe a highly reproducible method for the permanent occlusion of a rodent major cerebral blood vessel. This technique can be accomplished with very little peripheral damage, minimal blood loss, a high rate of long-term survival, and consistent infarct volume commensurate with the human clinical population.

Permanente oclusão vascular cerebral<em&gt; Via</em&gt; Dupla ligadura e transecção

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The goal of computational methods for drug repurposing is to enable solutions for safer, cheaper and faster drug discovery. Towards this end, we developed a novel method that integrates genetic and clinical phenotype data from large-scale GWAS and PheWAS studies with detailed drug information on the concept of transitive Drug-Gene-Disease triads. We created "RE:fine Drugs," a freely available, interactive dashboard that automates gene, disease and drug-based searches to identify drug repurposing candidates. This web-based tool supports a user-friendly interface that includes an array of advanced search and export options. Results can be prioritized in a variety of ways, including but not limited to, biomedical literature support, strength and statistical significance of GWAS and/or PheWAS associations, disease indications and molecular drug targets. Here we provide a protocol that illustrates the functionalities available in the "RE:fine Drugs" system and explores the different advanced options through a case study.

Here we describe a protocol using the web-based drug repurposing hypothesis generation tool: "RE:fine Drugs." This protocol can be modified to a user's preferences at the level of the query type (gene, drug or disease) and/or the range of available advanced options.

Drogas Repurposing Hipótese Geração Usando o &quot;RE: Drogas finos&quot; System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

Turbidimetry on Human Washed Platelets: The Effect of the Pannexin1-inhibitor Brilliant Blue FCF on Collagen-induced Aggregation

Turbidimetry is a laboratory technique that is applied to measure the aggregation of platelets suspended in either plasma (platelet-rich plasma, PRP) or in buffer (washed platelets), by the use of one or a combination of agonists. The use of washed platelets separated from their plasma environment and in the absence of anticoagulants allows for studying intrinsic platelet properties. Among the large panel of agonists, arachidonic acid (AA), adenosine di-phosphate (ADP), thrombin and collagen are the most frequently used. The aggregation response is quantified by measuring the relative optical density (OD) over time of platelet suspension under continuous stirring. Platelets in homogeneous suspension limit the passage of light after the addition of an agonist, platelet shape change occurs producing a small transitory increase in OD. Following this initial activation step, platelet clots form gradually, allowing the passage of light through the suspension as a result of decreased OD. The aggregation process is ultimately expressed as a percentage, compared to the OD of platelet-poor plasma or buffer. Rigorous calibration is thus essential at the beginning of each experiment. As a general rule: calibration to 0% is set by measuring the OD of a non-stimulated platelet suspension while measuring the OD of the suspension medium containing no platelets represents a value of 100%. Platelet aggregation is generally visualized as a real-time aggregation curve. Turbidimetry is one of the most commonly used laboratory techniques for the investigation of platelet function and is considered as the historical gold standard and used for the development of new pharmaceutical agents aimed at inhibiting platelet aggregation. Here, we describe detailed protocols for 1) preparation of human washed platelets and 2) turbidimetric analysis of collagen-induced aggregation of human washed platelets pretreated with the food dye Brilliant Blue FCF that was recently identified as an inhibitor of Pannexin1 (Panx1) channels.

We describe a straightforward method for the isolation of washed platelets from human blood followed by agonist-induced platelet aggregation measurements by turbidimetry. As an example we apply this method for studying the aggregation response of human platelets to collagen after a pre-incubation with the Pannexin1 channel inhibitor Brilliant Blue FCF.

Turbidimetria em plaquetas humanas lavadas: O efeito do inibidor Pannexin1-Brilliant Blue FCF na agregação induzida por colagénio

Turbidimetry is a laboratory technique that is applied to measure the aggregation of platelets suspended in either plasma (platelet-rich plasma, PRP) or ...

Using Retinal Imaging to Study Dementia

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central nervous system (CNS) and shares prominent similarities with the brain in terms of embryological origin, anatomical features and physiological properties.&#160; The vascular and neuronal structure in the retina can now be visualized easily and non-invasively using retinal imaging techniques, including fundus photography and optical coherence tomography (OCT), and quantified semi-automatically using computer-assisted analysis programs. Studying the associations between vascular and neuronal changes in the retina and dementia could improve our understanding of dementia and, potentially, aid in diagnosis and risk assessment.&#160; This protocol aims to describe a method of quantifying and analyzing retinal vasculature and neuronal structure, which are potentially associated with dementia. This protocol also provides examples of retinal changes in subjects with dementia, and discusses technical issues and current limitations of retinal imaging.

The retina shares prominent similarities with the brain and thus represents a unique window to study vasculature and neuronal structure in the brain non-invasively. This protocol describes a method to study dementia using retinal imaging techniques. This method can potentially aid in diagnosis and risk assessment of dementia.

Utilizando imagens da retina para estudar a demência

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status epilepticus (SE) is frequently selected to recapitulate spontaneous recurrent seizures (SRS). Here we present a protocol of SE induction by intraperitoneal (i.p.) injection of pilocarpine and monitoring of chronic recurring seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram (EEG) system. We demonstrated notable behavioral changes that need attention after pilocarpine injection and their correlation with hippocampal neuronal loss at 7 days and 6 weeks post-pilocarpine. We also describe the experimental procedures of electrode implantation for video and EEG recording, and analysis of the frequency and duration of chronic recurrent seizures. Finally, we discuss the possible reasons why the expected results are not achieved in each case. This provides a basic overview of modeling chronic epilepsy in mice and guidelines for troubleshooting. We believe this protocol can serve as a baseline for suitable models of chronic epilepsy and epileptogenesis.

This manuscript describes a method of inducing status epilepticus by systemic pilocarpine injection and of monitoring spontaneous recurrent seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram system. This protocol can be utilized for studying the pathophysiologic mechanisms of chronic epilepsy, epileptogenesis, and acute seizures.

O modelo de pilocarpina de epilepsia do lobo Temporal e EEG monitoramento usando sistema de radiotelemetria em ratos

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

Método de triagem para micropartículas em transfusões de plaquetas de rotina

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Preparation, Procedures and Evaluation of Platelet-Rich Plasma Injection in the Treatment of Knee Osteoarthritis

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department. Existing non-surgical treatments have a limited effect on the repair of cartilage and on bone regeneration. Platelet-rich plasma (PRP) is an autologous bioactive substance that can repair cartilage injury and accelerate bone regeneration effectively. However, reporting of PRP preparation protocols in clinical studies is highly inconsistent, with the majority of studies providing insufficient information to allow the protocol to be reproduced. We describe a repeatable method of preparing PRP visually, the treatment of KOA using PRP intra-articular injection, and methods of evaluating the outcome. PRP was prepared using manual double centrifugation. The PRP layer was extracted from peripheral blood and used for knee joint cavity injection. Evaluations included assessments of blood platelet concentrations and clinical outcomes. Preparation of PRP by manual centrifugation requires less apparatus and is less costly than plasma filtration or centrifugation using equipment. The centrifugation time of our double centrifugation method was 6 and 5 minutes for the respective centrifugations at forces of 800 and 1400 x g, respectively, to allow for the consistent preparation of standardized PRP. However, a manual method is susceptible to operator error, and PRP batch preparation is not available. Intra-articular injection of PRP proved to be an effective treatment for knee osteoarthritis. The entire treatment procedure took less than 30 minutes, the blood platelet concentration of PRP could be standardized, and treatment was proven to be effective when evaluated by follow-up.

Knee osteoarthritis is frequently seen in the orthopedic department. We introduce in detail the entire knee osteoarthritis treatment process with platelet-rich plasma injection, including preparation, procedures, and evaluation.

Preparação, procedimentos e avaliação da injeção de Plasma rico em plaquetas no tratamento da osteoartrose do joelho

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department. Existing non-surgical treatments have a limited ...

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity is disturbed in gastrointestinal, cardiovascular and metabolic diseases, which may result in easier access of biologically active compounds, such as gut bacterial metabolites, to the bloodstream. Thus, the permeability of the GBB may be a marker of both intestinal and extraintestinal diseases. Furthermore, the increased penetration of bacterial metabolites may affect the functioning of the entire organism.
Commonly used methods for studying the GBB permeability are performed ex vivo. The accuracy of those methods is limited, because the functioning of the GBB depends on intestinal blood flow. On the other hand, commonly used in vivo methods may be biased by liver and kidney performance, as those methods are based on evaluation of urine or/and peripheral blood concentrations of exogenous markers. Here, we present a direct measurement of GBB permeability in rats using an in vivo method based on portal blood sampling, which preserves intestinal blood flow and is virtually not affected by the liver and kidney function. 
Polyurethane catheters are inserted into the portal vein and inferior vena cava just above the hepatic veins confluence. Blood is sampled at baseline and after administration of a selected marker into a desired part of the gastrointestinal tract. Here, we present several applications of the method including (1) evaluation of the colon permeability to TMA, a gut bacterial metabolite, (2) evaluation of liver clearance of TMA, and (3) evaluation of a gut-portal blood-liver-peripheral blood pathway of gut bacteria-derived short-chain fatty acids. Furthermore, the protocol may also be used for tracking intestinal absorption and liver metabolism of drugs or for measurements of portal blood pressure.

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The access of nutrients, microbiota metabolites and medicines to the circulation is controlled by the gut-blood barrier (GBB). We describe a direct method for measuring the GBB permeability in vivo, which, in contrast to commonly used indirect methods, is virtually not affected by liver and kidney functions.

Um método In Vivo para avaliar a barreira de sangue do intestino e metabolismo hepático da Microbiota produtos

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent vasoactive agents, nitric oxide (NO), can also act as a powerful inhibitor of platelet aggregation. Direct NO detection in blood is very challenging due to its high reactivity with cell-free hemoglobin that limits NO half-life to the millisecond range. Currently, NO changes after interventions are only estimated based on measured changes of nitrite and nitrate (members of the nitrate-nitrite-NO metabolic pathway). However precise, these measurements are rather difficult to interpret vis a vis actual NO changes, due to the naturally high baseline nitrite and nitrate levels that are several orders of magnitude higher than expected changes of NO itself. Therefore, the development of direct and simple methods that would allow one to detect NO directly is long overdue. This protocol addresses a potential use of platelets as a highly sensitive NO sensor in blood. It describes initial platelet rich plasma (PRP) and washed platelet preparations and the use of nitrite and deoxygenated red blood cells as NO generators. Phosphorylation of VASP at serine 239 (P-VASPSer239) is used to detect the presence of NO. The fact that VASP protein is highly expressed in platelets and that it is rapidly phosphorylated when NO is present leads to a unique opportunity to use this pathway to directly detect NO presence in blood.

Here, we present a protocol to address the potential use of platelets as a highly sensitive nitric oxide sensor in blood. It describes initial platelet preparation and the use of nitrite and deoxygenated red blood cells as nitric oxide generators.

Detecção baseada em plaquetas de óxido nítrico no sangue, medindo-se a fosforilação VASP

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...