I finanziamenti per la pubblicazione è fornita da Cerus Corp, produttore del sistema INTERCEPT Blood.

1. Raccolta di sangue intero <ol><li> Raccogliere il sangue intero da donatori volontari in 450 ml di top / bottom collezione imposta secondo le direttive locali di raccolta del sangue. </li><li> Il sangue intero è memorizzato per un minimo di 2 ore su una piastra di raffreddamento prima della centrifugazione e separazione. </li></ol> 2. Buffy Coat Preparazione <ol><li> Centrifugare il sangue intero con un giro difficile separare il sangue in tre livelli: globuli rossi, buffy coat e plasma. Parametri utilizzati sono stati centrifuga 4880 RCF per 11 min a 22 ± 2 ° C. </li><li> Utilizzare un separatore automatico sangue per esprimere il plasma nella sacca satellite superiore ei globuli rossi (RBC) nel sacco satellite fondo, lasciando il buffy coat nel contenitore di raccolta. Medio obiettivo range di volume e di ematocrito per buffy coats sono circa 48 ml e 37%, rispettivamente. </li><li> Gli buffy coats vengono memorizzati durante la notte su un agitatore delle piastrine a 22 ± 2 ° C. </li></ol><ol><li> Sterile connect 7 buffy cappotti e 300 ml di soluzione additiva SSP + piastrine (PAS) in una configurazione treno con linee parallele di ridurre la lunghezza del convoglio e il PAS dovrebbe essere in cima al treno. Bloccare la linea di demarcazione tra la PAS e la prima mano buffy. </li><li> Aprire i collegamenti tra le unità sterili ricoprono le buffy e consentire cappotti buffy per scaricare nel contenitore ultima. </li><li> Aprire la saldatura e il morsetto tra la PAS e la prima mano buffy. Consentire un terzo della soluzione additiva per sciacquare attraverso ciascuna delle buffy coat contenitori in sequenza. Ripetere 2 più volte ogni volta utilizzando la metà del restante PAS. </li><li> Il volume medio di buffy coat piscina dovrebbe essere di circa 600 ml. Se il volume di destinazione e di ematocrito dei singoli strati buffy sono soddisfatte, il rapporto di plasma saranno 32 - 47%, come richiesto per il trattamento INTERCEPT inattivazione dei patogeni più avanti nel processo. </li><li> Eliminare il vuoto SSP + e buffycappotto contenitori. </li><li> Per ottimizzare il recupero delle piastrine, tenere la piscina sulla agitatore per 1 ora prima della centrifugazione. </li><li> Sterile collegare un contenitore di stoccaggio delle piastrine con filtro integrato leucoriduzione alla piscina buffy coat. </li><li> Effettuare un &quot;giro soft&quot; del pool di buffy coat per separare i globuli rossi da piastrine in sospensione (462 RCF per 9 min, 20 sec). Esprimono la sospensione di piastrine mediante un separatore automatico sangue attraverso il filtro leucoriduzione nel serbatoio di stoccaggio piastrinica. </li><li> I requisiti di elaborazione precedentemente descritti modo che la sospensione di piastrine soddisfa le specifiche di elaborazione intercetta su 300 ml - 420 ml di volume, 2,5-7,0 x 10 11 dosi piastrinica, e ≤ 4 x 10 6 cellule / ml rossi. </li></ol> 4. INTERCETTARE Trattamento <ol><li> Eseguire il trattamento INTERCEPT prima della fine del 1 ° giorno dopo il prelievo (giorno 0 è il giorno della raccolta). </li><li> Scartare il Set INTERCEPT Processingcon contenitori di stoccaggio doppio dal sacchetto di plastica trasparente. </li><li> Collegare il contenitore sterile piastrinica sospensione al tubo del contenitore amotosalen sul set INTERCEPT elaborazione. </li><li> Etichettare l&#39;intercetta di elaborazione contenitori insieme con l&#39;identificazione del prodotto appropriato sangue dopo requisiti di legge locali. </li><li> Appendere le piastrine e rompere la prima cannula fondo sul contenitore amotosalen, permettendo alla soluzione amotosalen di fluire nel contenitore di illuminazione. Rompere la cannula superiore sul contenitore amotosalen consentendo alle piastrine di fluire attraverso il contenitore amotosalen nel contenitore illuminazione. </li><li> Mescolare delicatamente la miscela piastrinica e amotosalen ed esprimere l&#39;aria dal contenitore illuminazione nel contenitore amotosalen. </li><li> Una piccola quantità della miscela piastrinica alla tubazione di riempimento di circa 4 cm del tubo. Questo assicura piastrine sia il tubo e contenitore illuminazione subiscono il patogeno inactivatiil trattamento. </li><li> Sigillare il tubo tra il contenitore e il contenitore amotosalen illuminazione. Lasciare non più di circa 4 cm di tubo che si estendono dal contenitore illuminazione. Rimuovere e gettare il piastrine vuoto e contenitori amotosalen e chiudere le fascette sui sacchetti di campionamento. </li><li> Posizionare il gruppo di elaborazione nel illuminatore con il contenitore illuminazione nel vano grande sulla sinistra e l&#39;organizzatore nel vano inferiore sul lato destro. </li><li> Utilizzare il dispositivo portatile di codici a barre per inserire l&#39;ID donazione, codice prodotto, e impostare il numero di elaborazione lotto nella illuminatore. Chiudere il coperchio di metallo e quando richiesto sull&#39;interfaccia grafica illuminatore, chiudere il cassetto. Premere il tasto &quot;Start&quot; per avviare l&#39;Illuminazione. </li><li> Dopo l&#39;illuminazione, rimuovere il set di trasformazione dal illuminatore. L&#39;illuminatore stampa automaticamente il rapporto di trattamento per l&#39;unità trattata piastrinica (s). </li><li> Scartare i contenitori da parte dell&#39;organizzatore e appendere la platelets e set di trasformazione, rompere la cannula all&#39;uscita del contenitore illuminazione, e consentire le piastrine di fluire nel dispositivo di adsorbimento composto (CAD) contenitore. </li><li> Facendo attenzione a non piegare il wafer CAD, esprimono l&#39;aria dal contenitore CAD nel contenitore illuminazione usando un estrattore di plasma. </li><li> Sigillare il tubo vicino alla porta di entrata del contenitore CAD. Rimuovere e gettare il contenitore vuoto illuminazione. </li><li> Porre il recipiente CAD con i contenitori di memorizzazione collegati su un agitatore piastrinica per almeno 6 ore, ma non più di 16 ore. Questo comporta la riduzione di amotosalen residua ad una concentrazione di ≤ 2 pM. </li><li> Dopo il trattamento CAD, rimuovere le unità di piastrine dal agitatore. Appendere le piastrine. Rompere la cannula e consentire piastrine di fluire in contenitori di conservazione. </li><li> Esprimere l&#39;aria dai contenitori di stoccaggio nel contenitore CAD. Lasciate che il piastrinica residua riflusso concentrato nei contenitori storagegravità. Sigillare il tubo sopra il raccordo a Y e rimuovere il contenitore vuoto CAD. </li><li> Ridistribuire il volume tra i contenitori di stoccaggio in base alle esigenze. Le regolazioni del volume sono fatte da pesatura dei contenitori di stoccaggio. Sigillare la tubazione di ogni contenitore pochi centimetri sopra l&#39;entrata del contenitore di stoccaggio, che facilita l&#39;ottenimento di un campione sterile dal prodotto finale come descritto al punto 5.2. </li></ol> 5. Prodotto di campionamento <ol><li> Per il controllo di qualità di routine, i contenitori di stoccaggio finali si possono degustare una volta usando il sacchetto di campionamento sui contenitori di stoccaggio. Per fare ciò, assicurarsi che l&#39;unità delle piastrine è ben amalgamato, quindi aprire il morsetto per la sacca e spremere più volte. Sigillare il tubo dopo che il sacchetto è pieno di piastrine. Trasferire il campione di piastrine in una provetta di laboratorio adeguato ed eseguire test immediatamente. </li><li> Per ottenere campioni a tempi diversi nel corso di memorizzazione, ad esempio per uno studio di convalida, collegare sterileun contenitore di campionamento nuovo al tubo del contenitore di stoccaggio piastrinica. Garantire che le piastrine sono ben miscelati prima del trasferimento al contenitore di campionamento. </li></ol> 6. Valutazione della funzione in vitro <ol><li> Per questo studio di validazione, valutazione in vitro è stata effettuata dopo il trattamento CAD (giorno 1 giorno o due, a seconda della durata CAD) e nuovamente il giorno 4 (o giorno 5) e 7 giorni. Misurazioni in vitro inclusi volume, conta piastrinica, pH, gas del sangue (pO 2, pCO 2), glucosio, lattato, e vorticoso. </li><li> Volume è stato determinato dal peso utilizzando 1,01 g / ml come il peso specifico della soluzione additiva di piastrine. </li><li> Contaminazione emoglobina è stata valutata visivamente con rispetto ad una tabella di colore. </li><li> Turbine è stata determinata visivamente. </li><li> Vedere &quot;Tabella di apparecchiature&quot; per la metodologia di altri saggi. </li></ol> 7. Risultati rappresentativi Il processo di produzione double dose di buffy coat piastrine inizia con la produzione di singoli buffy coats che soddisfano le specifiche bersaglio per volume ed ematocrito. Poiché non è pratico per misurare l&#39;ematocrito del singolo buffy cappotti durante il processo di convalida finale, abbiamo iniziato effettuando un intervento separato per ottimizzare la nostra buffy cappotti per garantire che abbiamo sempre incontrare volume di destinazione e dell&#39;ematocrito. Come mostrato nella Tabella 1, i cappotti ottimizzati buffy rispetto favorevole ai valori bersaglio per volume ed ematocrito 46 ± 2 ml e 37 ± 3%, rispettivamente. Dopo pooling, il volume e l&#39;ematocrito del pool di buffy coat dovrebbe essere di circa 600 ml e 20%, rispettivamente, prima della centrifugazione rotazione morbida. Come illustrato nella Tabella 2, le nostre piscine buffy coat media di 615 ± 5 ml; l&#39;ematocrito media di 19 ± 1%. Le morbide centrifugazione risultati di spin in un conc doppia dose di piastrineEntrate in grado di soddisfare i requisiti in ingresso alla inattivazione dei patogeni che utilizzano il INTERCEPT Blood System DS di elaborazione impostata. Parametri di input fondamentali per il trattamento INTERCETTA comprendono il volume, conta delle piastrine, plasma il rapporto, e il contenuto RBC. Inoltre, intendiamo recuperare ≥ 75% delle piastrine nel concentrato di piastrine rispetto al pool di buffy coat. Per fabbisogno locale, dei globuli bianchi (WBC) la contaminazione deve essere &lt;1x10 6 / unità. Il concentrati piastrinici nella nostra convalida incontrato i parametri chiave per trattamento INTERCEPT nonché gli obiettivi di contaminazione WBC e recupero delle piastrine, come mostrato nella Tabella 3. Il processo di inattivazione INTERCEPT patogeno viene eseguita sul concentrato di piastrine doppia dose utilizzando un unico set di elaborazione INTERCEPT. Il set di elaborazione contiene due contenitori integrali che consentono all&#39;unità trattata per essere diviso in due singole dosi terapeutiche piastrinica al completamento del percorsoogen inattivazione processo. Linee guida europee richiedono che il 75% delle unità testate contiene ≥ 200x10 9 piastrine per dose1 terapeutico; alle prescrizioni locali in Svezia richiedono che il 75% delle unità testate con contenuto&gt; 240x10 9 piastrine per dose. Dopo il trattamento INTERCETTA, il tenore medio delle piastrine era 265 ± 22 x10 9 (n = 24). Inoltre, l&#39;88% delle unità raggiunto o superato 240x10 9 piastrine per dose terapeutica, questo è ben all&#39;interno di entrambe le linee guida e regolamenti europei svedesi. Vedere le figure 1 e 2 per l&#39;illustrazione della doppia dose di preparazione buffy coat e dei processi di gestione delle intercettazioni, rispettivamente. Per questo la validazione, abbiamo misurato la caratteristiche in vitro del concentrati piastrinici dopo il trattamento INTERCETTA (vale a dire dopo la scissione nei contenitori individuali); parametri sono stati misurati oltre 7 giorni di conservazione. La media e la deviazione standard sono stati raccolti perDose piastrinica, pH, pO 2, pCO 2, produzione di lattato e consumo di glucosio. La figura 3 mostra la media dose iniziale del concentrato piastrinico doppia dose piastrinica prima del trattamento INTERCEPT e la dose media piastrinica in ciascuno dei prodotti parziali dopo trattamento INTERCEPT oltre 7 giorni di conservazione. Perdita delle piastrine durante la conservazione è stato di circa il 9%. Questa riduzione non è diversa dalla perdita attesa di piastrine durante la conservazione delle piastrine convenzionali. 2 La tabella 4 riassume le caratteristiche in vitro delle piastrine INTERCEPT dopo il trattamento e la divisione in unità singole. Per i requisiti europei, il pH delle piastrine deve rimanere al di sopra 6,4 fino alla fine della durata di conservazione. Durante la lavorazione, il pH della concentrati piastrinici scende leggermente basata sulla concentrazione piastrinica, il volume e la permeabilità ai gas della piastrina stocontenitore rabbia. Figura 4 illustra il pH dei prodotti divisi piastriniche oltre 7 giorni di conservazione. Durante l&#39;immagazzinamento, il pH è stabile e ben mantenuta nei requisiti di elaborazione. Come mostrato nelle figure 5A e 5B, la piastrina consumo di O 2 e CO 2 produzione indicare respirazione continuato dalle piastrine intercetta nel contenitore PL2410 durante 7 giorni di conservazione. Figure 6A e 6B mostrano i livelli di lattato e glucosio oltre 7 giorni di conservazione . Consumo di glucosio piastrinica e la produzione di lattato sono coerenti tra di loro durante i 7 giorni di conservazione. 5 unità avevano livelli di glucosio inferiore a 1,11 mmol / l (il limite inferiore per il dosaggio del glucosio). La preparazione buffy coat e delle piastrine convalida pooling prodotto concentra in grado di soddisfare i criteri di ingresso per il trattamento INTERCETTA, in particolare, il volume, conta delle piastrine, plasma il rapporto, e rosso blood cella contaminazione. Le unità finali incontrato i criteri di convalida oltre 7 giorni di conservazione tra cui la dose delle piastrine e del pH. <table border="1"><tbody><tr><td> Parametro </td><td> Obiettivo Gamma </td><td> Risultati media ± DS </td></tr><tr><td> Volume (ml) </td><td> ~ 48 </td><td> 46 ± 2 </td></tr><tr><td> Ematocrito (%) </td><td> ~ 37 </td><td> 37 ± 3 </td></tr><tr><td> Tempo di mantenimento prima di mettere in comune </td><td> Pernottamento in agitatore </td><td> Pernottamento in agitatore </td></tr></tbody></table> Caratteristiche Tabella 1. Dell&#39;individuo Buffy Coats (n = 19). <table border="1"><tbody><tr><td> Parametro </td><td> Obiettivo Gamma </td><td> Risultati media ± DS </td></tr><tr><td> Volume (ml) </td><td> ~ 600 </td><td> 615 ± 5 </td></tr><tr><td> Hematocrit (%) </td><td> ~ 20 </td><td> 19 ± 1 </td></tr><tr><td> Tempo di mantenimento prima della centrifugazione </td><td> 1 ora su agitatore </td><td> 1 ora su agitatore </td></tr></tbody></table> Caratteristiche Tabella 2. Delle piscine Rivestire le Buffy (n = 12). <table border="1"><tbody><tr><td> Parametro </td><td> Obiettivo </td><td> Risultati media ± DS </td></tr><tr><td> Volume (ml) </td><td> 370-420 </td><td> 404 ± 8 </td></tr><tr><td> Conta piastrinica (x10 9 / unità) </td><td> 250-700 </td><td> 577 ± 62 </td></tr><tr><td> Media di recupero delle piastrine (%) </td><td> ≥ 75 </td><td> 75 ± 4 </td></tr><tr><td> Plasma ratio (%) </td><td> 32-47 </td><td> 38 ± 1 </td></tr><tr><td> RBC (x10 6 / ml) </td><td> ≤ 4 </td><td> 1,2 ± 0,4 </td></tr><tr><td> WBC (x10 6 </sup&gt; / unità) </td><td> ≤ 1 </td><td> 0,11 ± 0,1 </td></tr><tr><td> Tempo di attesa prima di INTERCETTA (hr) </td><td> ≤ fine del giorno 1 </td><td> ≤ fine del giorno 1 </td></tr></tbody></table> Caratteristiche Tabella 3. Della doppia dose concentrati piastrinici (n = 12). <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Media ± DS </td><td> Min </td><td> Max </td></tr><tr><td> Volume (ml) </td><td> 199 ± 16 </td><td> 182 </td><td> 236 </td></tr><tr><td> Conta piastrinica (x10 9 / unità) </td><td> 265 ± 22 </td><td> 225 </td><td> 292 </td></tr><tr><td> pH (22 ° C) </td><td> 6,9 ± 0,1 </td><td> 6,8 </td><td> 7.0 </td></tr><tr><td> pO 2 (kPa) </td><td> 21,4 ± 4,8 </td><td> 12,8 </td><td> 27,3 </td></tr><tr><td> pCO 2 (kPa) </td><td> 4,3 &amp; plusmn; 0,4 </td><td> 3,3 </td><td> 4,9 </td></tr><tr><td> Lattato (mmol / l) </td><td> 9,1 ± 1,7 </td><td> 6,8 </td><td> 12,4 </td></tr><tr><td> Glucosio (mmol / l) </td><td> 5,3 ± 0,9 </td><td> 3,7 </td><td> 6,5 </td></tr></tbody></table> Caratteristiche Tabella 4. Del INTERCEPT giorno trattata Piastrine 1/2 (Unità singole, n = 24). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig1.jpg" /> Figura 1. Produzione di un concentrato piastrinico doppio della dose da un pool di 7 buffy cappotti. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig2.jpg" /> Figura 2. Inattivazione dei patogeni di un concentrato piastrinico doppio della dose con il sistema INTERCEPT Blood. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig3.jpg" /> Figura 3. Dose media piastrinica prima e per7 giorni dopo il trattamento INTERCETTA (n = 12 prima INTERCETTA, n = 24 dopo INTERCEPT). <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig4.jpg" /> Figura 4. Media piastrinica pH ± DS dopo il trattamento INTERCETTA (n = 24). <img alt="Figura 5A" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig5a.jpg" /> Figura 5A. Media pO 2 ± DS dopo il trattamento INTERCETTA (n = 24). <img alt="Figura 5B" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig5b.jpg" /> Figura 5B. Media pO 2 ± DS dopo il trattamento INTERCETTA (n = 24). <img alt="Figura 6A" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig6a.jpg" /> Figura 6A. Livelli medi di lattato ± DS dopo il trattamento INTERCETTA (n = 24). <img alt="Figura 6B" src="/files/ftp_upload/4414/4414fig6b.jpg" /> Figura 6B. Livelli medi di glucosio eplusmn; SD dopo il trattamento INTERCETTA (n = 24).

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide to the preparation, use and quality assurance of blood components. , (2010).</li><li>Van Rhenen, D. J., Vermeij, J., Mayaudon, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characteristics+of+S-59+photochemically+treated+platelet+concentrates+derived+from+buffy+coats.">Functional characteristics of S-59 photochemically treated platelet concentrates derived from buffy coats.</a> Vox Sang. 79, 206-214 (2000).</li><li>Wollowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+DNA+and+RNA+in+pathogens:+mode+of+action+of+amotosalen+HCl.">Targeting DNA and RNA in pathogens: mode of action of amotosalen HCl.</a> Transfus. Med. Rev. 31, 11-16 (2004).</li><li>Irsch, J., Lin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+Inactivation+of+Platelet+and+Plasma+Blood+Components+for+Transfusion+Using+the+INTERCEPT+Blood+SystemTM.">Pathogen Inactivation of Platelet and Plasma Blood Components for Transfusion Using the INTERCEPT Blood SystemTM.</a> Transfus. Med. Hemother. 38, (2011).</li><li>Lin, L., Dikeman, R., Molini, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemical+treatment+of+platelet+concentrates+with+amotosalen+and+long-wavelength+ultraviolet+light+inactivates+a+broad+spectrum+of+pathogenic+bacteria.">Photochemical treatment of platelet concentrates with amotosalen and long-wavelength ultraviolet light inactivates a broad spectrum of pathogenic bacteria.</a> Transfusion. 44, 1496-1504 (2004).</li><li>Lin, L., Hanson, C., Alter, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+viruses+in+platelet+concentrates+by+photochemical+treatment+with+amotosalen+and+long-wavelength+ultraviolet+light.">Inactivation of viruses in platelet concentrates by photochemical treatment with amotosalen and long-wavelength ultraviolet light.</a> Transfusion. 45, 580-590 (2005).</li><li>Allain, J. P., Cianco, C., Blajchman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protecting+the+blood+supply+from+emerging+pathogens:+the+role+of+pathogen+inactivation.">Protecting the blood supply from emerging pathogens: the role of pathogen inactivation.</a> Transfus. Med. Rev. 19, 110-126 (2005).</li><li>Stramer, S., Hollinger, F., Katz, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+infectious+disease+agents+and+their+potential+threat+to+transfusion+safety.">Emerging infectious disease agents and their potential threat to transfusion safety.</a> Transfusion. 49, 1S-29S (2009).</li><li>Nussbaumer, W., Allesdorfer, D., Grabmer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+transfusion+of+platelet+components+contaminated+with+low+levels+of+bacteria:+a+comparison+of+bacteria+culture+and+pathogen+inactivation+methods.">Prevention of transfusion of platelet components contaminated with low levels of bacteria: a comparison of bacteria culture and pathogen inactivation methods.</a> Transfusion. 47, 1125-1133 (2007).</li><li>Schlenke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+against+Transfusion-Associated+Graft-versus-Host+Disease+in+Blood+transfusion:+Is+Gamma-Irradiation+the+Only+Answer?+Transfus.">Protection against Transfusion-Associated Graft-versus-Host Disease in Blood transfusion: Is Gamma-Irradiation the Only Answer? Transfus.</a> Med. Hemother. 31, 24-31 (2004).</li><li>Lin, L., Corash, L., Osselear, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+Against+TA-GVHD+Due+to+Platelet+Transfusion+By+Using+Pathogen+Inactivation+with+the+INTERCEPT+Blood+SystemTM+-+Gamma+Irradiation+is+Not+the+Only+Answer.">Protection Against TA-GVHD Due to Platelet Transfusion By Using Pathogen Inactivation with the INTERCEPT Blood SystemTM - Gamma Irradiation is Not the Only Answer.</a> Haematologica. 95 (Extra 1), 230-237 (2010).</li><li>Corash, L., Lin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+processes+for+inactivation+of+leukocytes+to+prevent+transfusion-associated+graft-verus-host+disease.">Novel processes for inactivation of leukocytes to prevent transfusion-associated graft-verus-host disease.</a> Bone Marrow Transplant. 33, 1-7 (2004).</li></ol>

Produzione e l&#39;accesso gratuito a questo articolo è sponsorizzato da Cerus.

Piastrine buffy coat richiedono diverse fasi di lavorazione che portano in post-raccolta costi, compreso il tempo personale, consumabili, attrezzature e rifiuti, che devono essere presi in considerazione nel costo complessivo di produzione delle unità di piastrine. Migliorare la resa piastrinica da ciascun buffy coat (tramite ottimizzare il volume di buffy coat e ematocrito) permette la produzione di una doppia dose unitaria buffy coat piastrinica da un pool di sette buffy coats. Quando questa ottimizzazione viene eseguita, il numero di strati buffy richiesta per produrre un numero fisso di dosi piastrinica può essere ridotta, migliorando così l&#39;utilizzo complessivo di buffy cappotti e consentendo la produzione di piastrine supplementari concentrati (PC). Tempo del personale, nonché i costi di consumo e di attrezzature come i set di pooling, soluzione additiva per piastrine, piastrine di connessione sterili, set di filtri, e le procedure di centrifugazione sono ridotti fino al 50%. Oltre a ottimizzare la produzione di piastrine e riducendo i costi associati, this metodo di pooling può generare un concentrato di piastrine (PC) che soddisfa il requisito di ingresso per l&#39;uso con il doppio set di trattamento INTERCEPT contenitore di stoccaggio, che ci permette di fornire una maggiore protezione ai nostri destinatari trasfusioni pure. Il sistema INTERCEPT Blood System per l&#39;inattivazione dei patogeni utilizza amotosalen e raggi ultravioletti A (UVA) si accendono per covalentemente cross-link di DNA e RNA, impedendo la replicazione degli acidi nucleici e gli agenti patogeni di rendering non sono in grado di causare la malattia. 3 Si inattivare efficacemente un ampio spettro di agenti patogeni tra cui virus, batteri , parassiti, e contaminanti globuli bianchi del donatore. 4-6 INTERCETTA fornisce una alternativa al paradigma attuale testing per gli agenti patogeni emergenti, che coinvolge storicamente un notevole ritardo, mentre un nuovo test è stato sviluppato e richiede in ultima analisi, un significativo investimento finanziario per la realizzazione, quando un test di diventa disponibile. 7,8 Può anche fornire un&#39;alternativa alla sicurezza ridondante misures quali il rilevamento di batteri 9 e raggi gamma. 10-12 Inoltre, INTERCETTA ci permette di trattare doppie unità di piastrine di dose che si avvale la nostra efficienza produttiva e ci aiuta a rispettare i nostri bilanci. INTERCETTA e la doppia dose di metodo del buffy coat può essere adattato ad una varietà di workflow Blood Center. Come esempi, collezioni di sangue intero può essere aumentato a 500 ml; collezioni potrebbe anche essere conservato durante la notte a 22 ° C prima della separazione. Inoltre, un metodo alternativo buffy coat pooling è possibile (per esempio un metodo polpo invece di un metodo treno) e / o un dispositivo automatico (ad es Tacsi) può essere utilizzata per la seconda centrifugazione e separazione della sospensione di piastrine dalle restanti globuli rossi . Se un aumento contenuto di piastrine è necessario, sono disponibili diverse tecniche tra cui pre-selezione dei donatori in base al numero delle piastrine, notte di incubazione del sangue intero, adjustment delle impostazioni centrifugazione, o utilizzando un pool di 8 mani buffy al posto di 7. A causa della limitazione di pooling imposta attualmente disponibili e la capacità dei secchi centrifuga, il volume totale del pool di buffy coat dovrebbe essere di circa 600 ml. Il processo di centrifugazione e le impostazioni descritte in questo protocollo sono stati ottimizzati per ottenere prodotti che soddisfano i parametri di intercettazione per un pool di 7 buffy coats. Le impostazioni di centrifugazione deve essere modificato se il numero di buffy mani della piscina viene modificato. In alcuni paesi, la dose minima delle piastrine è maggiore ed i requisiti di qualità sono più severi che in Svezia. In quanto tale, i nostri risultati potrebbero non essere universalmente applicabile. In questi paesi, il PC dose doppia prima del trattamento INTERCEPT dovrà essere dotato di un maggior numero di piastrine, al fine di soddisfare i requisiti locali dopo il trattamento INTERCETTA e split. Poiché il contenuto massimo piastrinica e trattamento del volume for INTERCETTA sono 7x10 11 piastrine e 420 ml, rispettivamente, la percentuale di unità che superano i requisiti di elaborazione intercettare o hanno insufficiente contenuto di piastrine per essere diviso in due dosi terapeutiche, può variare a seconda di fattori come i requisiti locali per la dose di piastrine, criteri di QC, buffy coat risultati di ottimizzazione e la stabilità di produzione. Se un PC doppia dose supera i requisiti di elaborazione intercetta, può essere regolato manualmente per soddisfare i requisiti e successivamente trattati. In quelle poche occasioni in cui il 7-buffy coat piscina rese piastrine insufficienti per un prodotto di doppia dose dopo INTERCETTA, noi scegliere di non eseguire il trattamento INTERCEPT. In alternativa, i centri del sangue può scegliere di trattare il PC con un solo set di trasformazione INTERCETTA dose (cioè l&#39;insieme Large Volume) e memorizzare il PC come una singola dose maggiore terapeutica, eseguendo così inattivazione dei patogeni su tutte le unità. Al fine di garantire che incontriamo il nostroI requisiti di qualità e di inattivare agenti patogeni come molte delle nostre unità di piastrine possibili, selezioniamo buffy coats in base ai donatori conta piastrinica, che, una volta messe in comune, si tradurrà in un contenuto minimo di piastrine di 5.6x10 11 piastrine in piscina. In questo modo sufficiente contenuto di piastrine per produrre due dosi terapeutiche dopo il trattamento INTERCEPT. La validazione dimostra che 7 unità di sangue intero derivati ​​buffy coat possono essere raggruppati e trattati con successo con il processo di INTERCEPT per le piastrine, con conseguente in 2 prodotti patogeni inattivati ​​piastrine che soddisfano i criteri di accettazione per la produzione (requisiti svedesi e linee guida europee) e per il supporto dei pazienti che richiedono trasfusioni di piastrine secondo le linee guida di pratica clinica e di standard, metodi di infusione di piastrine in Svezia.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material / Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Whole blood donation, primary separation, and platelet production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection pack</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>R6485</td>
			<td>Top/Bottom set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated component extractor</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>Optipress-II</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood mixer and balance system</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>Easymix V3</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet leukocyte filtration set</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>K4R7042</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Hettich</td>
			<td>Roto Silenta 63 RS</td>
			<td>Version 5.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet additive solution - SSP+</td>
			<td>MacoPharma</td>
			<td>SSP2030U</td>
			<td>300 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile tubing welder</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>T-SCD</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>INTERCEPT treatment &amp; storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INTERCEPT processing set</td>
			<td>Cerus</td>
			<td>INT2503</td>
			<td>Dual Storage (DS) set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INTERCEPT Illuminator</td>
			<td>Cerus</td>
			<td>INT100</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC sample pack</td>
			<td>Fenwal</td>
			<td>FTX 1122</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Helmer</td>
			<td>PC2200/PC3200</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agitator</td>
			<td>Helmer</td>
			<td>PF48H/PF96H</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Evaluation of in vitro Platelet Function</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood gas analyzer</td>
			<td>Radiometer</td>
			<td>ABL 735</td>
			<td>Used for pH, blood gases, and lactate measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemistry system</td>
			<td>Ortho Clinical Diagnostic</td>
			<td>Vitros 5.1</td>
			<td>Used for glucose measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematology analyzer</td>
			<td>Boule Medical AB</td>
			<td>Medonic CA620-Cellguard</td>
			<td>Used for platelet count measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>FACSCanto</td>
			<td>Used for white blood cell measurement</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation and pathogen inactivation of double dose buffy coat platelet products using the intercept blood system

Centri di sangue sono di fronte a molte sfide tra cui massimizzare la resa di produzione da donazioni di prodotti del sangue che ricevono oltre a garantire il massimo livello possibile di sicurezza per i pazienti trasfusione, compresa la protezione dalle malattie a trasmissione trasfusionale. Questo deve essere realizzato in modo da ridurre al minimo fiscalmente responsabile dei costi operativi tra cui materiali di consumo, attrezzature, dei rifiuti e dei costi del personale, tra gli altri. Sono disponibili diversi metodi per la produzione di concentrati piastrinici per la trasfusione. Uno dei più comuni è il metodo del buffy coat in cui viene elaborata una singola unità terapeutica piastrinica (≥ 2,0 x10 11 piastrine per unità o per norme locali), mettendo in comune lo strato di buffy coat da un massimo di sei donazioni di sangue intero. Una procedura per la produzione di &quot;doppia dose&quot; piastrine del sangue intero ottenuti solo recentemente è stato sviluppato. Qui presentato è un nuovo metodo per la preparazionedoppia dose di piastrine nel sangue intero derivato concentrati prodotti da pool di buffy 7 mani e successivamente trattare le unità di dose doppia con il sistema INTERCEPT Blood per l&#39;inattivazione dei patogeni. INTERCEPT stato sviluppato per inattivare virus, batteri, parassiti e cellule donatrici contaminanti bianchi che possono essere presenti nel sangue donato. Associazione INTERCETTARE con il doppio metodo a dose buffy coat utilizzando trattamento INTERCEPT Set con contenitori di stoccaggio Dual (il &quot;set DS&quot;), permette ai centri di sangue per il trattamento di ciascuna unità di dose doppia in un unico agente patogeno inattivazione di elaborazione, in modo da massimizzare la sicurezza del paziente riducendo al minimo i costi. La doppia dose di metodo del buffy coat richiede meno buffy coats e riduce l&#39;uso di materiali di consumo fino al 50% (ad esempio gruppi di pool, set di filtri, soluzione additiva per piastrine, e cialdine di connessione sterili) rispetto alla preparazione e il trattamento di singole dosi di unità di buffy coat piastrine . Risparmi Tra gli altri meno rifiuti, meno attrezzature manuce, richiede una minor potenza, ridotto tempo personale, e costo inferiore di raccolta rispetto alla tecnica di aferesi.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System at JoVE.com

Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Questo articolo viene descritto il processo utilizzato da Örebro University Hospital per la produzione di piastrine doppia dose di buffy coat concentrati preparati a partire da donazioni di sangue intero e trattati con il sistema INTERCEPT Blood per l&#39;inattivazione dei patogeni. Il<em&gt; In vitro</em&gt; Qualità delle unità finali piastrine vengono valutati oltre 7 giorni di conservazione.

Preparazione e inattivazione dei patogeni di Double Dose Buffy prodotti piastrinici cappotto con il sistema INTERCEPT Blood System

Blood centers are faced with many challenges including maximizing production yield from the blood product donations they receive as well as ensuring the ...

preparation-pathogen-inactivation-double-dose-buffy-coat-platelet

Research

JoVE Journal

Medicine

28.6K Views.  Örebro University Hospital. Questo articolo viene descritto il processo utilizzato da Örebro University Hospital per la produzione di piastrine doppia dose di buffy coat concentrati preparati a partire da donazioni di sangue intero e trattati con il sistema INTERCEPT Blood per l'inattivazione dei patogeni. Il In vitro Qualità delle unità finali piastrine vengono valutati oltre 7 giorni di conservazione.

Video: Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Minimal Erythema Dose (MED) Testing

Ultraviolet radiation (UV) therapy is sometimes used as a treatment for various common skin conditions, including psoriasis, acne, and eczema. The dosage of UV light is prescribed according to an individual's skin sensitivity. Thus, to establish the proper dosage of UV light to administer to a patient, the patient is sometimes screened to determine a minimal erythema dose (MED), which is the amount of UV radiation that will produce minimal erythema (sunburn or redness caused by engorgement of capillaries) of an individual's skin within a few hours following exposure. This article describes how to conduct minimal erythema dose (MED) testing. There is currently no easy way to determine an appropriate UV dose for clinical or research purposes without conducting formal MED testing, requiring observation hours after testing, or informal trial and error testing with the risks of under- or over-dosing. However, some alternative methods are discussed.

Minimal Erythema Dose MED Testing

This article describes how to conduct minimal erythema dose (MED) testing in order to determine the lowest dose of ultraviolet radiation that will cause erythema (burning) when administered to an individual.

Minimal Eritema Dose (MED) Testing

Ultraviolet radiation (UV) therapy is  sometimes used as a treatment for various common skin conditions, including  psoriasis, acne, and eczema. The ...

Ricerca

Medicina

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow (ischemia) 1. Middle cerebral artery (MCA) delivers a great majority of blood to the lateral surface of the cortex 2, is the most common site of human stroke 3, and ischemia within its territory can result in extensive dysfunction or death 1,4,5. Survivors of ischemic stroke often suffer loss or disruption of motor capabilities, sensory deficits, and infarct. In an effort to capture these key characteristics of stroke, and thereby develop effective treatment, a great deal of emphasis is placed upon animal models of ischemia in MCA.
Here we present a method of permanently occluding a cortical surface blood vessel. We will present this method using an example of a relevant vessel occlusion that models the most common type, location, and outcome of human stroke, permanent middle cerebral artery occlusion (pMCAO). In this model, we surgically expose MCA in the adult rat and subsequently occlude via double ligature and transection of the vessel. This pMCAO blocks the proximal cortical branch of MCA, causing ischemia in all of MCA cortical territory, a large portion of the cortex. This method of occlusion can also be used to occlude more distal portions of cortical vessels in order to achieve more focal ischemia targeting a smaller region of cortex. The primary disadvantages of pMCAO are that the surgical procedure is somewhat invasive as a small craniotomy is required to access MCA, though this results in minimal tissue damage. The primary advantages of this model, however, are: the site of occlusion is well defined, the degree of blood flow reduction is consistent, functional and neurological impairment occurs rapidly, infarct size is consistent, and the high rate of survival allows for long-term chronic assessment.

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

We describe a highly reproducible method for the permanent occlusion of a rodent major cerebral blood vessel. This technique can be accomplished with very little peripheral damage, minimal blood loss, a high rate of long-term survival, and consistent infarct volume commensurate with the human clinical population.

Cerebrale permanente occlusione di vasi<em&gt; Via</em&gt; Doppio Legatura e resezione

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The goal of computational methods for drug repurposing is to enable solutions for safer, cheaper and faster drug discovery. Towards this end, we developed a novel method that integrates genetic and clinical phenotype data from large-scale GWAS and PheWAS studies with detailed drug information on the concept of transitive Drug-Gene-Disease triads. We created "RE:fine Drugs," a freely available, interactive dashboard that automates gene, disease and drug-based searches to identify drug repurposing candidates. This web-based tool supports a user-friendly interface that includes an array of advanced search and export options. Results can be prioritized in a variety of ways, including but not limited to, biomedical literature support, strength and statistical significance of GWAS and/or PheWAS associations, disease indications and molecular drug targets. Here we provide a protocol that illustrates the functionalities available in the "RE:fine Drugs" system and explores the different advanced options through a case study.

Here we describe a protocol using the web-based drug repurposing hypothesis generation tool: "RE:fine Drugs." This protocol can be modified to a user's preferences at the level of the query type (gene, drug or disease) and/or the range of available advanced options.

Drug Repurposing Ipotesi Generation Con il &quot;RE: Drugs sottili&quot; Sistema

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

Turbidimetry on Human Washed Platelets: The Effect of the Pannexin1-inhibitor Brilliant Blue FCF on Collagen-induced Aggregation

Turbidimetry is a laboratory technique that is applied to measure the aggregation of platelets suspended in either plasma (platelet-rich plasma, PRP) or in buffer (washed platelets), by the use of one or a combination of agonists. The use of washed platelets separated from their plasma environment and in the absence of anticoagulants allows for studying intrinsic platelet properties. Among the large panel of agonists, arachidonic acid (AA), adenosine di-phosphate (ADP), thrombin and collagen are the most frequently used. The aggregation response is quantified by measuring the relative optical density (OD) over time of platelet suspension under continuous stirring. Platelets in homogeneous suspension limit the passage of light after the addition of an agonist, platelet shape change occurs producing a small transitory increase in OD. Following this initial activation step, platelet clots form gradually, allowing the passage of light through the suspension as a result of decreased OD. The aggregation process is ultimately expressed as a percentage, compared to the OD of platelet-poor plasma or buffer. Rigorous calibration is thus essential at the beginning of each experiment. As a general rule: calibration to 0% is set by measuring the OD of a non-stimulated platelet suspension while measuring the OD of the suspension medium containing no platelets represents a value of 100%. Platelet aggregation is generally visualized as a real-time aggregation curve. Turbidimetry is one of the most commonly used laboratory techniques for the investigation of platelet function and is considered as the historical gold standard and used for the development of new pharmaceutical agents aimed at inhibiting platelet aggregation. Here, we describe detailed protocols for 1) preparation of human washed platelets and 2) turbidimetric analysis of collagen-induced aggregation of human washed platelets pretreated with the food dye Brilliant Blue FCF that was recently identified as an inhibitor of Pannexin1 (Panx1) channels.

We describe a straightforward method for the isolation of washed platelets from human blood followed by agonist-induced platelet aggregation measurements by turbidimetry. As an example we apply this method for studying the aggregation response of human platelets to collagen after a pre-incubation with the Pannexin1 channel inhibitor Brilliant Blue FCF.

Turbidimetria su Human Lavato Piastrine: l&#39;effetto della Pannexin1-inibitore blu brillante FCF sul livello di aggregazione indotta dal collagene

Turbidimetry is a laboratory technique that is applied to measure the aggregation of platelets suspended in either plasma (platelet-rich plasma, PRP) or ...

Using Retinal Imaging to Study Dementia

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central nervous system (CNS) and shares prominent similarities with the brain in terms of embryological origin, anatomical features and physiological properties.&#160; The vascular and neuronal structure in the retina can now be visualized easily and non-invasively using retinal imaging techniques, including fundus photography and optical coherence tomography (OCT), and quantified semi-automatically using computer-assisted analysis programs. Studying the associations between vascular and neuronal changes in the retina and dementia could improve our understanding of dementia and, potentially, aid in diagnosis and risk assessment.&#160; This protocol aims to describe a method of quantifying and analyzing retinal vasculature and neuronal structure, which are potentially associated with dementia. This protocol also provides examples of retinal changes in subjects with dementia, and discusses technical issues and current limitations of retinal imaging.

The retina shares prominent similarities with the brain and thus represents a unique window to study vasculature and neuronal structure in the brain non-invasively. This protocol describes a method to study dementia using retinal imaging techniques. This method can potentially aid in diagnosis and risk assessment of dementia.

Usando la formazione immagine retinica per studiare la demenza

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status epilepticus (SE) is frequently selected to recapitulate spontaneous recurrent seizures (SRS). Here we present a protocol of SE induction by intraperitoneal (i.p.) injection of pilocarpine and monitoring of chronic recurring seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram (EEG) system. We demonstrated notable behavioral changes that need attention after pilocarpine injection and their correlation with hippocampal neuronal loss at 7 days and 6 weeks post-pilocarpine. We also describe the experimental procedures of electrode implantation for video and EEG recording, and analysis of the frequency and duration of chronic recurrent seizures. Finally, we discuss the possible reasons why the expected results are not achieved in each case. This provides a basic overview of modeling chronic epilepsy in mice and guidelines for troubleshooting. We believe this protocol can serve as a baseline for suitable models of chronic epilepsy and epileptogenesis.

This manuscript describes a method of inducing status epilepticus by systemic pilocarpine injection and of monitoring spontaneous recurrent seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram system. This protocol can be utilized for studying the pathophysiologic mechanisms of chronic epilepsy, epileptogenesis, and acute seizures.

Il modello di pilocarpina di epilessia del lobo temporale e monitoraggio EEG utilizzando il sistema di radiotelemetria in topi

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

Routine di metodo di Screening per microparticelle in trasfusioni della piastrina

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Preparation, Procedures and Evaluation of Platelet-Rich Plasma Injection in the Treatment of Knee Osteoarthritis

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department. Existing non-surgical treatments have a limited effect on the repair of cartilage and on bone regeneration. Platelet-rich plasma (PRP) is an autologous bioactive substance that can repair cartilage injury and accelerate bone regeneration effectively. However, reporting of PRP preparation protocols in clinical studies is highly inconsistent, with the majority of studies providing insufficient information to allow the protocol to be reproduced. We describe a repeatable method of preparing PRP visually, the treatment of KOA using PRP intra-articular injection, and methods of evaluating the outcome. PRP was prepared using manual double centrifugation. The PRP layer was extracted from peripheral blood and used for knee joint cavity injection. Evaluations included assessments of blood platelet concentrations and clinical outcomes. Preparation of PRP by manual centrifugation requires less apparatus and is less costly than plasma filtration or centrifugation using equipment. The centrifugation time of our double centrifugation method was 6 and 5 minutes for the respective centrifugations at forces of 800 and 1400 x g, respectively, to allow for the consistent preparation of standardized PRP. However, a manual method is susceptible to operator error, and PRP batch preparation is not available. Intra-articular injection of PRP proved to be an effective treatment for knee osteoarthritis. The entire treatment procedure took less than 30 minutes, the blood platelet concentration of PRP could be standardized, and treatment was proven to be effective when evaluated by follow-up.

Knee osteoarthritis is frequently seen in the orthopedic department. We introduce in detail the entire knee osteoarthritis treatment process with platelet-rich plasma injection, including preparation, procedures, and evaluation.

Preparazione, procedure e valutazione dell'iniezione di Plasma ricco di piastrine nel trattamento dell'osteoartrite del ginocchio

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department. Existing non-surgical treatments have a limited ...

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity is disturbed in gastrointestinal, cardiovascular and metabolic diseases, which may result in easier access of biologically active compounds, such as gut bacterial metabolites, to the bloodstream. Thus, the permeability of the GBB may be a marker of both intestinal and extraintestinal diseases. Furthermore, the increased penetration of bacterial metabolites may affect the functioning of the entire organism.
Commonly used methods for studying the GBB permeability are performed ex vivo. The accuracy of those methods is limited, because the functioning of the GBB depends on intestinal blood flow. On the other hand, commonly used in vivo methods may be biased by liver and kidney performance, as those methods are based on evaluation of urine or/and peripheral blood concentrations of exogenous markers. Here, we present a direct measurement of GBB permeability in rats using an in vivo method based on portal blood sampling, which preserves intestinal blood flow and is virtually not affected by the liver and kidney function. 
Polyurethane catheters are inserted into the portal vein and inferior vena cava just above the hepatic veins confluence. Blood is sampled at baseline and after administration of a selected marker into a desired part of the gastrointestinal tract. Here, we present several applications of the method including (1) evaluation of the colon permeability to TMA, a gut bacterial metabolite, (2) evaluation of liver clearance of TMA, and (3) evaluation of a gut-portal blood-liver-peripheral blood pathway of gut bacteria-derived short-chain fatty acids. Furthermore, the protocol may also be used for tracking intestinal absorption and liver metabolism of drugs or for measurements of portal blood pressure.

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The access of nutrients, microbiota metabolites and medicines to the circulation is controlled by the gut-blood barrier (GBB). We describe a direct method for measuring the GBB permeability in vivo, which, in contrast to commonly used indirect methods, is virtually not affected by liver and kidney functions.

Un metodo In Vivo per valutare la Gut-barriera e metabolismo epatico del Microbiota prodotti

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent vasoactive agents, nitric oxide (NO), can also act as a powerful inhibitor of platelet aggregation. Direct NO detection in blood is very challenging due to its high reactivity with cell-free hemoglobin that limits NO half-life to the millisecond range. Currently, NO changes after interventions are only estimated based on measured changes of nitrite and nitrate (members of the nitrate-nitrite-NO metabolic pathway). However precise, these measurements are rather difficult to interpret vis a vis actual NO changes, due to the naturally high baseline nitrite and nitrate levels that are several orders of magnitude higher than expected changes of NO itself. Therefore, the development of direct and simple methods that would allow one to detect NO directly is long overdue. This protocol addresses a potential use of platelets as a highly sensitive NO sensor in blood. It describes initial platelet rich plasma (PRP) and washed platelet preparations and the use of nitrite and deoxygenated red blood cells as NO generators. Phosphorylation of VASP at serine 239 (P-VASPSer239) is used to detect the presence of NO. The fact that VASP protein is highly expressed in platelets and that it is rapidly phosphorylated when NO is present leads to a unique opportunity to use this pathway to directly detect NO presence in blood.

Here, we present a protocol to address the potential use of platelets as a highly sensitive nitric oxide sensor in blood. It describes initial platelet preparation and the use of nitrite and deoxygenated red blood cells as nitric oxide generators.

Rilevazione basata su piastrine di ossido nitrico nel sangue misurando VASP fosforilazione

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...