Die Forschung im Labor Ghanim wurde von Forschungsstipendium nicht unterstützt. 908-42.12/2006 von der Deutsch-Israelischen Stiftung (GIF), gewähren keine. IS-4062 bis 07 aus den Vereinigten Staaten und Israel Binationale Agrarforschung und Entwicklungsfonds (BARD) und Forschungsförderung nicht. 884/07 aus Israel Science Foundation (ISF) in MG

1. Allgemeine Whitefly, Pflanze, Virus und Vorbereitungen für die FISH-Analyse <ol><li> Rück B-und Q-Biotyp Weiße Fliegen auf Baumwolle Sämlinge (Gossypium hirsutum L. cv. Acala) und innerhalb insektendichte Käfige und Wachstums Zimmer unter Standardbedingungen von 25 ± 2 ° C, 60% relativer Luftfeuchtigkeit zu halten und eine 14-Stunden Licht / 10-Stunden-Photoperiode dunkel. </li><li> Führen Sie die PCR auf eine Infektion mit Endosymbionten mit Endosymbionten-spezifische Primer, wie oben beschrieben 15-19 testen. </li><li> Kaufen Sie Tomatensetzlinge (Solanum esculentum cv. Beefsteak) von einer kommerziellen Kindergarten oder Pflanzentomatensamen. </li><li> Pflegen Sie unter den oben beschriebenen gleichen Haltungsbedingungen, bis die Pflanzen erreichen die vier echten Blattstadium, das Alter am besten geeignet für Weiße Fliege-vermittelte Inokulation von TYLCV 15 (siehe Abschnitt 4.1). </li></ol> 2. Insekten-Handling, Fixierung, Design-Sonde, Hybridisierung und Visualisierung für EndoSymbionten FISH <ol><li> Sammeln Sie 10 erwachsenen Weißen Fliegen durch Aspiration von Baumwollpflanzen, oder wählen 10 3. oder 4. Larvenstadium Nymphen aus Baumwolle Blätter. </li><li> Unmittelbar in Carnoy-Fixiermittel (Chloroform-Ethanol-Eisessig, 06.03.01, v / v) in Eppendorf-Röhrchen eintauchen. Fix für 2 h bis über Nacht (am besten über Nacht). </li><li> Vollständig entfernen Sie die Fixiermittel und entfärben in 6% H 2 O 2 in Ethanol für 2 Stunden. </li><li> Aufbewahren der Proben in absolutem Ethanol für mehrere Tage bis mehrere Wochen bei Raumtemperatur oder zum nächsten Schritt. </li><li> Design Sonden komplementäre DNA Reverse Primer auf der Grundlage der 16S-ribosomalen RNA-Genen von jedem Bakterium. Für die Gestaltung der Sonden, nehmen Sie das Konto die gleichen Überlegungen für die Gestaltung von PCR-Primern. Verwenden Sie die Oligonukleotid-Sonden BTP1 5&#39;-Cy5-TGTCAGTGTCAGCCCAGAAG-3 &#39;, 5&#39;-Cy3 RB1-TCCACGTCGCCGTCTTGC-3&#39;, 5&#39;-Cy3 BTH-CCAGATTCCCAGACTTTACTCA-3 &#39;und 5&#39;-ARS2 cy3-TCATGACCACAACCTCCAAA-3 &#39;für spezifische Ausrichtung der Portiera, Rickettsien, Hamilonella und Arsenophonus sind. </li><li> Hybridisieren Proben über Nacht im Dunkeln in Hybridisierungspuffer (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 0,9 M NaCl, 0,01% [w / v] Natriumdodecylsulfat, 30% [Vol / Vol] formamid), enthaltend 10 pmol fluoreszierenden Sonde pro ml . Kombinieren mehr als eine Sonde mit unterschiedlichen Fluoreszenzfarbstoffen, falls erforderlich. Verwenden Sie nicht-infizierten Weißen Fliegen mit der gezielten Bakterium und kein-Sonde Proben als negative Kontrollen. </li><li> Montieren Sie die Proben insgesamt, auf einen Objektträger, mit einer Flüssigkeit in Blocker enthalten Hybridisierungspuffer, Abdeckung mit einem Deckglas, Dichtung mit Nagellack, und Blick unter einem Fluoreszenz-oder konfokalen Mikroskop. </li></ol> 3. Whitefly Orgel Dissection, Fixierung, Hybridisierung und Visualisierung für TYLCV FISH <ol><li> Sammeln erwachsenen Weißen Fliegen kontinuierlich auf TYLCV-infizierten Tomatenpflanzen durch Aspiration und ane aufgezogensthetize durch Bestrahlung mit Papiertuch mit Aceton getränkt. Expose Weiße Fliegen nur für 1-2 Minuten wie zu lange Einwirkung von Aceton Weiße Fliegen Gewebe zu beheben. Verwenden nonviruliferous Weiße Fliegen auf nicht-infizierten Tomatenpflanzen und keine Sonde Proben für Kontrollen aufgezogen, um spezifische Hybridisierung bestätigen. </li><li> Berg Weiße Fliegen auf die Depression Objektträger für Orgel Dissektion mit einem Stereo-Mikroskop. </li><li> Ziehen Sie die Insektenkopf von der prothorax sezieren und Speicheldrüsen in 1x PBS, ergänzt mit 1% Toluidinblau-Färbung für eine bessere Visualisierung, die aufgrund ihrer geringen Größe. Lassen Absorption der Fleck für 2-3 min. </li><li> Ziehen Sie den Insekten auseinander an der Verbindungsstelle zwischen dem Brustkorb und den Bauch zu beobachten und zu vertreiben die Mitteldarm. Vertreibt die Inhalte des Bauches durch Drücken mit der Zange auf den Bauch Spitze. </li><li> Entfernen Sie vorsichtig das PBS und Toluidinblau von erfolgreichen Dissektionen und sanft hinzufügen 300 ul Carnoy-Fixiermittel, die Organe für 5 min zu beheben. </li><li> Add die Fixiermittel von einer Seite der gedrückten gut und nicht von oben nach unkontrollierte Bewegung der präparierten Organe zu verhindern. Nach Berühren der Fixiermittel, werden die Organe auf das Glas halten, und während des gesamten Prozesses sie sich nicht bewegen. </li><li> Entfernen Fixiermittel und füge 500 &amp;mgr; l Hybridisierungspuffer mit 10 pmol des fluoreszierenden DNA-Sonde 5&#39;-Cy5-GGAACATCAGGGCTTCGATA-3 &#39;, die komplementär zu einer Sequenz in TYLCV-Hüllprotein-Gen ergänzt. </li><li> Hybridisierung über Nacht bei Raumtemperatur im Dunkeln durch Inkubation der Objektträger mit der Probe in einem kleinen feuchten Kammer von kleinen Kunststoff-Box zusammen mit nassem Tuch Papier an der Unterseite. </li><li> Nach der Hybridisierung, holen die Organe mit einem feinen Dissektionsinstrument und schnell verschieben Sie sie in einem frischen Mikroskop-Objektträger mit 30 ul der neuen Hybridisierungspuffer mit DAPI (0,1 mg / ml in 1x PBS) ergänzt und mit Flüssigkeit Blocker enthalten. </li><li> Decken Sie die Proben mit einem Deckglas, Dichtung Witzh Nagellack und Ansicht unter einem Fluoreszenz-oder konfokalen Mikroskop. </li></ol> 4. Pflanzenbehandlung, Hand-Schnitte, Fixierung und Hybridisierung für TYLCV FISH <ol><li> Impfen Tomatenjungpflanzen mit TYLCV mit virustragender Weiße Fliege-vermittelte Impfung. Das Virus kann mit dieser FISH-Methode in Pflanzen symptomlos eine Woche nach der Impfung nachgewiesen werden. Typische Krankheitssymptome sichtbar sind 3 Wochen nach der Inokulation. Verwenden Sie nicht-infizierten Tomatenpflanzen und keine Sonde Proben für die Kontrollen an spezifische Hybridisierung bestätigen. </li><li> Mit einem scharfen histologischen Rasierklinge für die Herstellung von Hand geschnitten 2-4 cm lange Längs-oder Querschnitte von Tomaten Stängel und Blätter. </li><li> In Eppendorf-Röhrchen, fixieren Sie die Abschnitte in Carnoy-Fixiermittel für 2 Stunden, über Nacht bei Raumtemperatur. </li><li> Entfernen Fixiermittel und bewahren Sie die Abschnitte in absolutem Ethanol für mehrere Tage bis mehrere Wochen bei Raumtemperatur, oder fahren Sie mit dem nächsten Schritt. </li><li> Waschen Sie die Abschnittedreimal, jeweils 1 min, in Hybridisierungspuffer. </li><li> Hybridisieren die Abschnitte mit 500 ul Hybridisierungspuffer mit 10 pmol des fluoreszierenden Oligonukleotid-Sonde 5&#39;-Cy3-GGAACATCAGGGCTTCGATA-3 &#39;, die komplementär zu einer Sequenz in TYLCV-Hüllprotein-Gen ergänzt. </li><li> Dreimal mit je 1 min Waschen Sie die Abschnitte, in Hybridisierungspuffer. </li><li> Berg ganze Abschnitte in Hybridisierungspuffer mit DAPI (0,1 mg / ml in 1x PBS) ergänzt und mit Flüssigkeit Blocker enthalten, decken Sie mit einem Deckglas, mit Nagellack versiegeln und Blick unter einem Fluoreszenz-oder konfokalen Mikroskop. </li></ol>

<ol>
	<li>Czosnek, H., Laterrot, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+worldwide+survey+of+Tomato+yellow+leaf+curl+viruses.">A worldwide survey of Tomato yellow leaf curl viruses.</a> Arch. Virol. 142, 1391-1406 (1997).</li><li>Ling, K. S., Simmons, A. M., Hassell, R. L., Keinath, A. P., Polston, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+report+of+Tomato+Yellow+Leaf+Curl+Virus+in+South+Carolina.">First report of Tomato Yellow Leaf Curl Virus in South Carolina.</a> Plant Dis. 90, 379 (2006).</li><li>Polston, J. E., McGovern, R. J., Brown, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+Tomato+yellow+leaf+curl+virus+in+Florida+and+implications+for+the+spread+of+this+and+other+geminiviruses+of+tomato.">Introduction of Tomato yellow leaf curl virus in Florida and implications for the spread of this and other geminiviruses of tomato.</a> Plant Dis. 83, 984-988 (1999).</li><li>Polston, J. E., Rosebrock, T. R., Sherwood, T., Creswell, T., Shoemaker, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appearance+of+Tomato+yellow+leaf+curl+virus+in+North+Carolina.">Appearance of Tomato yellow leaf curl virus in North Carolina.</a> Plant Dis. 86, 73 (2002).</li><li>Frohlich, D. R., Torres-Jerez, I., Bedford, I. D., Markham, P. G., Brown, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phylogeographical+analysis+of+the+Bemisia+tabaci+species+complex+based+on+mitochondrial+DNA+markers.">A phylogeographical analysis of the Bemisia tabaci species complex based on mitochondrial DNA markers.</a> Mol. Ecol. 8, 1683-1691 (2002).</li><li>Ghanim, M., Morin, S., Czosnek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rate+of+Tomato+yellow+leaf+curl+virus+translocation+in+the+circulative+transmission+pathway+of+its+vector,+the+whitefly+Bemisia+tabaci.">Rate of Tomato yellow leaf curl virus translocation in the circulative transmission pathway of its vector, the whitefly Bemisia tabaci.</a> Phytopathology. 91, 188-196 (2001).</li><li>Ghanim, M., Rosell, R. C., Campbell, L. R., Czosnek, H., Brown, J. K., Ullman, D. 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K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+pathway+of+geminivirus+in+whitefly+extracts,+saliva,+hemolymph+and+honeydew.">Temporal pathway of geminivirus in whitefly extracts, saliva, hemolymph and honeydew.</a> Phytopathology. 89, 239-246 (1999).</li><li>Czosnek, H., Ghanim, M., Ghanim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circulative+pathway+of+begomoviruses+in+the+whitefly+vector+Bemisia+tabaci&#8212;insights+from+studies+with+Tomato+yellow+leaf+curl+virus.">The circulative pathway of begomoviruses in the whitefly vector Bemisia tabaci&#8212;insights from studies with Tomato yellow leaf curl virus.</a> Ann. Appl. Biol. 140, 215-231 (2002).</li><li>Gottlieb, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transmission+efficiency+of+Tomato+yellow+leaf+curl+virusby+the+whitefly+Bemisiatabaciis+correlated+with+the+presence+of+aspecificsymbiotic+bacterium+species.">The transmission efficiency of Tomato yellow leaf curl virusby the whitefly Bemisiatabaciis correlated with the presence of aspecificsymbiotic bacterium species.</a> J. Virol. 84, 9310-9317 (2010).</li><li>Brumin, M., Levy, M., Ghanim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transovarial+transmission+of+Rickettsia+spp.+and+organ-specific+infection+of+the+whitefly+Bemisia+tabaci.">Transovarial transmission of Rickettsia spp. and organ-specific infection of the whitefly Bemisia tabaci.</a> Appl. Environ. Microbiol. 78, 5565-5574 (2012).</li><li>Ghanim, M., Medina, V., Czosnek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Localization of Tomato yellow leaf curl virus in its whitefly vector Bemisia tabaci. In Tomato Yellow Leaf Curl Virus Disease, Management, Molecular Biology, Breeding for Resistance. , 175-187 (2007).</li><li>Ghanim, M., Brumin, M., Popovski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+rapid+and+inexpensive+method+for+localization+of+Tomato+yellow+leaf+curl+virus+and+Potato+leafroll+virus+in+plant+and+insect+vectors.">A simple, rapid and inexpensive method for localization of Tomato yellow leaf curl virus and Potato leafroll virus in plant and insect vectors.</a> J. Virol. Methods. 159, 311-314 (2009).</li><li>Gotz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implication+of+Bemisia+tabaci+heat+shock+protein+70+in+Begomovirus-whitefly+interactions.">Implication of Bemisia tabaci heat shock protein 70 in Begomovirus-whitefly interactions.</a> J. Virol. 86, 13241-13252 (2012).</li><li>Nirgianaki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wolbachia+infections+of+the+whitefly+Bemisia+tabaci.">Wolbachia infections of the whitefly Bemisia tabaci.</a> Curr. Microbiol. 47, 93-101 (2003).</li><li>Baumann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+bacteriocyte-associated+endosymbionts+of+plant+sap-sucking+insects.">Biology of bacteriocyte-associated endosymbionts of plant sap-sucking insects.</a> Ann. Rev. Microbiol. 59, 155-189 (2005).</li><li>Gottlieb, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+localization+of+a+Rickettsia+sp.+in+Bemisia+tabaci+(Homoptera)+Aleyrodidae).">Identification and localization of a Rickettsia sp. in Bemisia tabaci (Homoptera) Aleyrodidae).</a> App. Environ. Microbiol. 72, 3646-3652 (2006).</li><li>Li, Z. X., Lin, H. Z., Guo, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+Wolbachia+infection+in+Bemisia+tabaci.">Prevalence of Wolbachia infection in Bemisia tabaci.</a> Curr. Microbiol. 54, 467-471 (2007).</li><li>Skaljac, M., Zanic, K., Hrncic, S., Radonjic, S., Perovic, T., Ghanim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+and+localization+of+bacterial+symbionts+in+three+whitefly+species+(Hemiptera:+Aleyrodidae)+from+the+east+coast+of+the+Adriatic.">Diversity and localization of bacterial symbionts in three whitefly species (Hemiptera: Aleyrodidae) from the east coast of the Adriatic.</a> Bull. Entomol. Res. 103, 48-59 (2013).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Die für die Lokalisierung eines Pflanzenvirus in ihrer Wirtspflanze und Insektenvektor und endosymbiontischen Bakterien in ihrem spezifischen Weiße Fliege Wirts hier beschriebene Protokoll kann zur Lokalisierung von anderen Viren in Pflanzen und auch im tierischen Gewebe angepasst werden. Weiterhin kann das Protokoll verwendet, um endosymbiontischen und pathogene Bakterien und andere Mikroorganismen in Pflanzen-und Tiersystemen zu lokalisieren. Die beschriebenen Verfahren beruhen auf einfache Konzept der Hybridisierun...

Bei der Untersuchung der Wechselwirkungen zwischen Pflanze Viren und andere Pathogene mit infizierten Wirtspflanzen ist es wichtig, die Pathogene und ihre entsprechenden Nukleinsäuren in situ sichtbar, egal ob sie negative Auswirkungen auf ihre Wirte führen. Dies ist besonders wichtig bei der Untersuchung Pathogen Bewegung in und zwischen den Pflanzenzellen. In situ-Lokalisierung von Genprodukten des Pathogens ist ein wesentlicher Schritt, die andere Ansätze zur Untersuchung der Pathogenität Verfahren ergänzt. Viele Pflanzenkrankheitserreger, insbesondere Viren, werden von Insekten übertragen werden, mit komplexen und intimen Interaktionen mit ihren Vektoren. Lokalisierung dieser Viren in ihrer Vektoren ist wichtig für die Untersuchung der Pfad für die Übertragung, und die möglichen Wechselwirkungsstellen innerhalb des Vektors. Die Übertragung von einigen Insekten vectored Pflanzenviren wird durch Bakterien, die endosymbiontischen innerhalb dieser Insekten wohnen unterstützt. Um die Übertragung von diesen Pflanzenviren b besser studiereny deren Vektoren, ist es auch wichtig, die endosymbiontischen Bakterien im allgemeinen sichtbar zu machen, und die im Virus-Übertragung beteiligt sind, insbesondere. Kolokalisation der Viren-und Bakterien endosymbiontischen ist somit für die Untersuchung der möglichen Beziehungen zwischen diesen Organismen innerhalb ihrer Wirtsinsekten gewünscht. Abgesehen von der Übertragung des Virus, verschiedene Aspekte der Biologie der Insektenvektoren beeinflussen endosymbiontischen Bakterien, ist von hohem Interesse und Bedeutung somit räumliche Lokalisierung dieser Bakterien innerhalb von Insekten. Tomato Yellow Leaf Curl Virus (TYLCV) (Begomovirus, Geminiviridae) ist die häufigste virale Krankheitskomplex der Kulturtomate weltweit 4.1. TYLCV ist eine Bast-Virus begrenzt und wird ausschließlich von der Weißen Fliege Bemisia tabaci 5,6 vektorisiert. Ein Modell, das die Translokation des Begomoviren in ihrer Weiße Fliege Vektoren beschreiben, wurde vorgeschlagen, 09.06. Zwei spezifische Barrieren aktiv während gekreuztten diese zirkulativen Übertragung: die Mitteldarm / Hämolymphe und die Hämolymphe / Speicheldrüse Barrieren. Dieser Übertragungsprozess wird angenommen, dass sie von unbekannten Rezeptoren, die das Virus-Kapsid erkennen vermittelt werden. TYLCV wird gedacht, um B. zu überqueren tabaci Darm 6,10 und wird durch die Primärspeicheldrüse 6 absorbiert, bevor es in die Anlage eingespritzt wird. In der Weißen Fliege Hämolymphe, interagiert mit einem TYLCV durch das Insekt Sekundär endosymbiontischen Bakterium produziert Hamiltonella GroEL Protein. Dieses Zusammenspiel sorgt für einen sicheren Transport von TYLCV in der Hämolymphe, und schützt sie vor Angriffen durch das Insekt Immunsystem 11. Hamiltonella und Portiera, die primäre Endosymbionten von Weißen Fliegen, sind in bacteriocytes untergebracht, Insektenzellen in der Hämolymphe und Haus endosymbiontischen 11 Bakterien. B. gefunden tabaci birgt zusätzliche endosymbiontischen Bakterien einschließlich Rickettsien, Arsenophonus, Wolbachia, und Fritschea, die innerhalb oder außerhalb der bacteriocytes lokalisiert werden kann, und haben unterschiedliche Auswirkungen auf die Biologie der Insekten 12. Mehrere Berichte haben versucht, die Lokalisierung von TYLCV in Pflanzen und Weißen Fliegen unter Verwendung der Zeit-und kostenaufwendig Protokolle wie Transmissionselektronenmikroskopie (TEM), Antikörper und RNA in situ auf mikroskopischer dicken Abschnitt 10,13 untersuchen, eine neue Studie beschrieben, die Lokalisierung von Pflanzenviren in ihren Anlage-und Vektor-Rechner mit einem einfachen Protokoll 14. Hier beschreiben wir ein einfaches Protokoll für die Lokalisierung von TYLCV in B. tabaci seziert midguts und Speicheldrüsen und in Abschnitte von TYLCV-infizierten Pflanzen vorbereitet. Wir beschreiben die Lokalisation von Portiera, die primäre Endosymbionten von B. tabaci und seine Sekundär Endosymbionten Hamitonella, Rickettsien und Arsenophonus. Dieses Protokoll wird auf Verwendung von kurzen DNA-Sonden auf der Basis, dassfluoreszierend an ihrem 5&#39;-Ende markiert ist und spezifisch an komplementäre Sequenzen in viralen oder bakteriellen Gen-Sequenzen zu hybridisieren. Die Probenverarbeitung relativ einfach ist, und das erhaltene Signal ist hoch spezifisch. Das beschriebene Protokoll kann verwendet werden, um Viren, Bakterien und andere Krankheitserreger in der Pflanzen-, Tier-und Insekten Hosts zu lokalisieren, und kann weiter verwendet werden, um mRNA in einem bestimmten Gewebe zu lokalisieren.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="653">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Fluorescently labeled&#160; Probes</td>
			<td style="width:95px;">Metabion</td>
			<td style="width:129px;">20 bp HPLC purified</td>
			<td style="width:212px;">Sequence designed by customer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Toluidine blue</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:129px;">89640</td>
			<td style="width:212px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">sodium dodecyl sulfate</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:129px;">L3771</td>
			<td style="width:212px;">Molecular Biology Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Formamide</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:129px;">F9037</td>
			<td style="width:212px;">Molecular Biology Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Tris-HCl</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:129px;">T5941</td>
			<td style="width:212px;">Molecular Biology Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Glacial Acetic Acid</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:129px;">320099</td>
			<td style="width:212px;">Molecular Biology Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Liquid Blocker</td>
			<td>Ted Pella Inc.</td>
			<td>22309</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fluorescence in situ hybridizations (fish) for the localization of viruses and endosymbiotic bacteria in plant and insect tissues

Fluoreszenz-in situ-Hybridisierung (FISH) ein Name, der einer Vielzahl von Techniken, die üblicherweise für die Visualisierung Gentranskripten in eukaryotischen Zellen und kann weiter modifiziert werden, um andere Komponenten in der Zelle, wie eine Infektion mit Viren und Bakterien zu visualisieren verwendet gegeben. Räumliche Lokalisierung und Visualisierung von Viren und Bakterien während der Infektion ist ein wesentlicher Schritt, die Genexpressionsexperimente wie Microarrays und RNAseq ergänzt in Reaktion auf verschiedene Reize. Das Verständnis der raumzeitlichen Infektionen mit diesen Mitteln ergänzt biologische Experimente auf das Verständnis ihrer Wechselwirkung mit zellulären Komponenten ab. Verschiedene Techniken zur Visualisierung von Viren und Bakterien, wie Reportergen-Systeme oder immunhistochemische Verfahren sind zeitaufwendig, und einige sind auf die Verwendung mit Modellorganismen und arbeiten mit komplexen Methoden. Fische, die RNA oder DNA-Spezies Ziele in der Zelle ist eine relativ einfache und schnelle mirthode zur Untersuchung der raum-zeitlichen Lokalisierung von Genen und für diagnostische Zwecke. Diese Methode kann robust und relativ einfach zu implementieren, wenn die Protokolle beschäftigen kurze Hybridisierungs, im Handel gekauft Sonden, die nicht teuer sind, sein. Dies ist besonders robust, wenn die Probenvorbereitung, Fixierung, Hybridisierung und mikroskopische Visualisierung beinhalten keine komplexe Schritte. Hier beschreiben wir ein Protokoll für die Lokalisierung von Bakterien und Viren in Insekten-und Pflanzengeweben. Die Methode basiert auf einfachen Zubereitung, Fixierung und Hybridisierung von Insekten ganzen Halterungen und seziert Organe oder handgefertigte Anlagenteile, mit 20 Basenpaaren kurzen DNA-Sonden zur Fluoreszenzfarbstoffe auf ihren 5 &#39;oder 3&#39; konjugiert endet basiert. Dieses Protokoll wurde erfolgreich in einer Reihe von Insekten-und Pflanzengewebe aufgebracht wird, und kann verwendet werden, um die Expression von mRNA oder anderen RNA-oder DNA-Spezies in der Zelle zu analysieren.

Das System untersucht in diesem Manuskript ist in Abbildung 1 dargestellt und enthält eine infizierte Pflanze mit TYLCV, eine Erwachsenen-und eine Nymphe der Weißen Fliege B. tabaci und der inneren Anatomie der Weißen Fliege, die den Weg für TYLCV Translokation in der Insekten. Abbildung 2 zeigt Doppel FISH in einem erwachsenen Weißen Fliege für den primären Symbionten Portiera und der sekundären Symbionten Arsenophonus. Abbildung 3 ze...

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Fluorescence in situ Hybridizations FISH for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues | Immunology and Infection | Video

Fluorescence in situ Hybridizations FISH for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Wir beschreiben hier ein einfaches Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH)-Verfahren zur Lokalisierung von Viren und Bakterien in Insekten-und Pflanzengeweben. Dieses Protokoll kann für die Visualisierung von mRNA in ganze Berg und mikroskopische Abschnitte erweitert werden.

Fluoreszenz<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisierungen (FISH) für die Lokalisierung von Viren und Bakterien in Endosymbiotic Pflanzen-und Insekten Gewebe

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a name given to a variety of techniques commonly used for visualizing gene transcripts in eukaryotic cells ...

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Fluorescence in situ Hybridizations (FISH) for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

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Serie: Fluorescence in situ Hybridizations FISH for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular environment. In order to increase throughput, FISH can be combined with flow cytometry (flow-FISH) to enable the detection of targeted nucleic acid sequences in thousands of individual cells. As a result, flow-FISH offers a distinct advantage over lysate/ensemble-based nucleic acid detection methods because each cell is treated as an independent observation, thereby permitting stronger statistical and variance analyses. These attributes have prompted the use of FISH and flow-FISH methods in a number of different applications and the utility of these methods has been successfully demonstrated in telomere length determination1,2, cellular identification and gene expression3,4, monitoring viral multiplication in infected cells5, and bacterial community analysis and enumeration6.
Traditionally, the specificity of FISH and flow-FISH methods has been imparted by DNA oligonucleotide probes. Recently however, the replacement of DNA oligonucleotide probes with nucleic acid analogs as FISH and flow-FISH probes has increased both the sensitivity and specificity of each technique due to the higher melting temperatures (Tm) of these analogs for natural nucleic acids7,8. Locked nucleic acid (LNA) probes are a type of nucleic acid analog that contain LNA nucleotides spiked throughout a DNA or RNA sequence9,10. When coupled with flow-FISH, LNA probes have previously been shown to outperform conventional DNA probes7,11 and have been successfully used to detect eukaryotic mRNA12 and viral RNA in mammalian cells5.
Here we expand this capability and describe a LNA flow-FISH method which permits the specific detection of RNA in bacterial cells (Figure 1). Specifically, we are interested in the detection of small non-coding regulatory RNA (sRNA) which have garnered considerable interest in the past few years as they have been found to serve as key regulatory elements in many critical cellular processes13. However, there are limited tools to study sRNAs and the challenges of detecting sRNA in bacterial cells is due in part to the relatively small size (typically 50-300 nucleotides in length) and low abundance of sRNA molecules as well as the general difficulty in working with smaller biological cells with varying cellular membranes. In this method, we describe fixation and permeabilzation conditions that preserve the structure of bacterial cells and permit the penetration of LNA probes as well as signal amplification steps which enable the specific detection of low abundance sRNA (Figure 2).

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

A novel high-throughput method is described that enables the detection and relative quantitation of small RNA and mRNA expression from single bacterial cells using locked nucleic acid probes and flow cytometry-fluorescence in situ hybridization.

Locked Nucleic Acid Durchflusszytometrie-Fluoreszenz In situ Hybridisierung (LNA Flow-FISH): Eine Methode für die bakterielle RNA-Detektion

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols to address these questions include colony count assays, gentamicin protection assays, and electron microscopy. Colony count and gentamicin protection assays only assess the viability of the entire bacterial population and are unable to determine individual bacterial viability. Electron microscopy can be used to determine the viability of individual bacteria and provide information regarding their localization in host cells. However, bacteria often display a range of electron densities, making assessment of viability difficult. This article outlines protocols for the use of fluorescent dyes that reveal the viability of individual bacteria inside and associated with host cells. These assays were developed originally to assess survival of Neisseria gonorrhoeae in primary human neutrophils, but should be applicable to any bacterium-host cell interaction. These protocols combine membrane-permeable fluorescent dyes (SYTO9 and 4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole [DAPI]), which stain all bacteria, with membrane-impermeable fluorescent dyes (propidium iodide and SYTOX Green), which are only accessible to nonviable bacteria. Prior to eukaryotic cell permeabilization, an antibody or fluorescent reagent is added to identify extracellular bacteria. Thus these assays discriminate the viability of bacteria adherent to and inside eukaryotic cells. A protocol is also provided for using the viability dyes in combination with fluorescent antibodies to eukaryotic cell markers, in order to determine the subcellular localization of individual bacteria. The bacterial viability dyes discussed in this article are a sensitive complement and/or alternative to traditional microbiology techniques to evaluate the viability of individual bacteria and provide information regarding where bacteria survive in host cells.

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. This article outlines protocols for the use of fluorescent dyes that reveal the viability of individual bacteria inside and associated with host cells.

Fluoreszenz-Mikroskopie-Methoden zur Bestimmung der Lebensfähigkeit der Bakterien in Verbindung mit Säugerzellen

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the physiological mechanisms that mediate immune responses to vaccines perhaps due to the overall success of vaccination, which has reduced interest into the molecular and physiological mechanisms of vaccine immunity. However, several important human pathogens including influenza virus still pose a challenge for vaccination, and may benefit from immune-based strategies. 
Although influenza reverse genetics has been successfully applied to the generation of live-attenuated influenza vaccines (LAIVs), the addition of molecular tools in vaccine preparations such as tracer components to follow up the kinetics of vaccination in vivo, has not been addressed. In addition, the recent generation of mouse models that allow specific depletion of leukocytes during kinetic studies has opened a window of opportunity to understand the basic immune mechanisms underlying vaccine-elicited protection. Here, we describe how the combination of reverse genetics and chimeric mouse models may help to provide new insights into how vaccines work at physiological and molecular levels, using as example a recombinant, cold-adapted, live-attenuated influenza vaccine (LAIV). We utilized laboratory-generated LAIVs harboring cell tracers as well as competitive bone marrow chimeras (BMCs) to determine the early kinetics of vaccine immunity and the main physiological mechanisms responsible for the initiation of vaccine-specific adaptive immunity. In addition, we show how this technique may facilitate gene function studies in single animals during immune responses to vaccines. We propose that this technique can be applied to improve current prophylactic strategies against pathogens for which urgent medical countermeasures are needed, for example influenza, HIV, Plasmodium, and hemorrhagic fever viruses such as Ebola virus.

There is an overall lack of knowledge about how vaccines work. Here we propose the combined use of reverse genetics and bone marrow chimeric mice to gain insight into the early host immune responses to vaccines with a special focus on dendritic cells and T cell immunity.

Die intranasale Verabreichung von rekombinantem Influenza Vaccines in chimären Maus-Modelle zu Mucosale Immunität Studieren

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

In Situ Detection of Bacteria within Paraffin-embedded Tissues Using a Digoxin-labeled DNA Probe Targeting 16S rRNA

The presence of bacteria within the pocket epithelium and underlying connective tissue in gingival biopsies from patients with periodontitis has been reported using various methods, including electron microscopy, immunohistochemistry or immunofluorescence using bacteria-specific antibodies, and fluorescent in situ hybridization (FISH) using a fluorescence-labeled oligonucleotide probe. Nevertheless, these methods are not widely used due to technical limitation or difficulties. Here a method to localize bacteria within paraffin-embedded tissues using DIG-labeled DNA probes has been introduced. The paraffin-embedded tissues are the most common form of biopsy tissues available from pathology banks. Bacteria can be detected either in a species-specific or universal manner. Bacterial signals are detected as either discrete forms (coccus, rod, fusiform, and hairy form) of bacteria or dispersed forms. The technique allows other histological information to be obtained: the epithelia, connective tissue, inflammatory infiltrates, and blood vessels are well distinguished. This method can be used to study the role of bacteria in various diseases, such as periodontitis, cancers, and inflammatory immune diseases.

In Situ Detection of Bacteria within Paraffin-embedded Tissues Using a Digoxin-labeled DNA Probe Targeting 16S rRNA

Here a method to localize bacteria within paraffin-embedded tissues using DIG-labeled 16S rRNA-targeting DNA probes has been described. This protocol can be applied to study the role of bacteria in various diseases such as periodontitis, cancers, and inflammatory immune diseases.

In-situ-Nachweis von Bakterien in Paraffin eingebetteten Geweben Unter Verwendung eines Digoxin-markierte DNA-Sonde Targeting 16S rRNA

The presence of bacteria within the pocket epithelium and underlying connective tissue in gingival biopsies from patients with periodontitis has been ...

Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins In Planta

Plasmodesmata (Pd) are cell-to-cell connections that function as gateways through which small and large molecules are transported between plant cells. Whereas Pd transport of small molecules, such as ions and water, is presumed to occur passively, cell-to-cell transport of biological macromolecules, such proteins, most likely occurs via an active mechanism that involves specific targeting signals on the transported molecule. The scarcity of identified plasmodesmata (Pd) localization signals (PLSs) has severely restricted the understanding of protein-sorting pathways involved in plant cell-to-cell macromolecular transport and communication. From a wealth of plant endogenous and viral proteins known to traffic through Pd, only three PLSs have been reported to date, all of them from endogenous plant proteins. Thus, it is important to develop a reliable and systematic experimental strategy to identify a functional PLS sequence, that is both necessary and sufficient for Pd targeting, directly in the living plant cells. Here, we describe one such strategy using as a paradigm the cell-to-cell movement protein (MP) of the Tobacco mosaic virus (TMV). These experiments, that identified and characterized the first plant viral PLS, can be adapted for discovery of PLS sequences in most Pd-targeted proteins.

Identification of Plasmodesmal Localization Sequences in Proteins In Planta

Plant intercellular connections, the plasmodesmata (Pd), play central roles in plant physiology and plant-virus interactions. Critical to Pd transport are sorting signals that direct proteins to Pd. However, our knowledge about these sequences is still in its infancy. We describe a strategy to identify Pd localization signals in Pd-targeted proteins.

Identifizierung von Plasmodesmal Lokalisierung Sequenzen in Proteine In Planta

Plasmodesmata (Pd) are cell-to-cell connections that function as gateways through which small and large molecules are transported between plant cells. ...

Protocols for Investigating the Host-tissue Distribution, Transmission-mode, and Effect on the Host Fitness of a Densovirus in the Cotton Bollworm

Many novel viruses have been discovered in animal hosts using next-generation sequencing technologies. Previously, we reported a mutualistic virus, Helicoverpa armigera densovirus (HaDV2), in a lepidopteran species, the cotton bollworm, Helicoverpa armigera (Hubner). Here, we describe the protocols that are currently used to study the effect of HaDV2 on its host. First, we establish a HaDV2-free cotton bollworm colony from a single breeding pair. Then, we orally inoculate some neonate larval offspring with HaDV2-containing filtered liquid to produce two colonies with the same genetic background: one HaDV2-infected, the other uninfected. A protocol to compare life table parameters (e.g., larval, pupal, and adult periods and fecundity) between the HaDV2-infected and -uninfected individuals is also presented, as are the protocols for determining the host-tissue distribution and transmission efficiency of HaDV2. These protocols would also be suitable for investigating the effects of other orally transmitted viruses on their insect hosts, lepidopteran hosts in particular.

Here, we present a protocol to investigate the host-tissue distribution, transmission mode, and effect on the host fitness of a densovirus within a lepidopteran species, the cotton bollworm. This protocol can also be used for studying the interaction between other orally-transmitted viruses and their insect hosts.

Protokolle für die Untersuchung die Host-Gewebeverteilung, Transmission-Modus und Effekt auf der Host-Fitness eines Densovirus im Cotton Bollworm

Many novel viruses have been discovered in animal hosts using next-generation sequencing technologies. Previously, we reported a mutualistic virus, ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against currently circulating strains. In addition to their use in treating seasonal influenza, the NA inhibitors have been stockpiled by a number of countries for use in the event of a pandemic. It is therefore important to monitor the susceptibility of circulating influenza viruses to this class of antivirals. There are different types of assays that can be used to assess the susceptibility of influenza viruses to the NA inhibitors, but the enzyme inhibition assays using either a fluorescent substrate or a chemiluminescent substrate are the most widely used and recommended. This protocol describes the use of a fluorescence-based assay to assess influenza virus susceptibility to NA inhibitors. The assay is based on the NA enzyme cleaving the 2&#8242;-(4-Methylumbelliferyl)-&#945;-D-N-acetylneuraminic acid (MUNANA) substrate to release the fluorescent product 4-methylumbelliferone (4-MU). Therefore, the inhibitory effect of an NA inhibitor on the influenza virus NA is determined based on the concentration of the NA inhibitor that is required to reduce 50% of the NA activity, given as an IC50 value.

We describe the use of a phenotypic fluorescence-based neuraminidase inhibition assay to assess the susceptibility of influenza A and B viruses to the neuraminidase inhibitor class of antivirals.

Fluoreszenz-basierte Neuraminidase-Inhibitionsassay die Empfänglichkeit der Influenza-Viren an die Neuraminidase-Inhibitor-Klasse von Anti-Virus zu beurteilen

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Quantitative Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) and Immunofluorescence (IF) of Specific Gene Products in KSHV-Infected Cells

Mechanistic insight arrives from careful study and quantification of specific RNAs and proteins. The relative locations of these biomolecules throughout the cell at specific times can be captured with fluorescence in situ hybridization (FISH) and immunofluorescence (IF). During lytic herpesvirus infection, the virus hijacks the host cell to preferentially express viral genes, causing changes in cell morphology and behavior of biomolecules. Lytic activities are centered in nuclear factories, termed viral replication compartments, which are discernable only with FISH and IF. Here we describe an adaptable protocol of RNA FISH and IF techniques for Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV)-infected cells, both adherent and in suspension. The method includes steps for the development of specific anti-sense oligonucleotides, double RNA FISH, RNA FISH with IF, and quantitative calculations of fluorescence intensities. This protocol has been successfully applied to multiple cell types, uninfected cells, latent cells, lytic cells, time-courses, and cells treated with inhibitors to analyze the spatiotemporal activities of specific RNAs and proteins from both the human host and KSHV.

Quantitative Fluorescence In Situ Hybridization FISH and Immunofluorescence IF of Specific Gene Products in KSHV-Infected Cells

We describe a protocol utilizing fluorescence in situ hybridization (FISH) to visualize multiple herpesviral RNAs within lytically infected human cells, either in suspension or adherent. This protocol includes quantification of fluorescence producing a nucleocytoplasmic ratio and can be extended for simultaneous visualization of host and viral proteins with immunofluorescence (IF).

Quantitative Fluoreszenz In Situ Hybridisierung (FISH) und Immunfluoreszenz (IF) spezifischer Genprodukte in KSHV-infizierten Zellen

Mechanistic insight arrives from careful study and quantification of specific RNAs and proteins. The relative locations of these biomolecules throughout ...

Live-Cell Fluorescence Microscopy to Investigate Subcellular Protein Localization and Cell Morphology Changes in Bacteria

Investigations of factors influencing cell division and cell shape in bacteria are commonly performed in conjunction with high-resolution fluorescence microscopy as observations made at a population level may not truly reflect what occurs at a single cell level. Live-cell timelapse microscopy allows investigators to monitor the changes in cell division or cell morphology which provide valuable insights regarding subcellular localization of proteins and timing of gene expression, as it happens, to potentially aid in answering important biological questions. Here, we describe our protocol to monitor phenotypic changes in Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus using a high-resolution deconvolution microscope. The objective of this report is to provide a simple and clear protocol that can be adopted by other investigators interested in conducting fluorescence microscopy experiments to study different biological processes in bacteria as well as other organisms.

This article provides a step-by-step guide to investigate protein subcellular localization dynamics and to monitor morphological changes using high-resolution fluorescence microscopy in Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus.

Live-Cell Fluoreszenzmikroskopie zur Untersuchung subzellulärer Proteinlokalisierung und Zellmorphologie Veränderungen in Bakterien

Investigations of factors influencing cell division and cell shape in bacteria are commonly performed in conjunction with high-resolution fluorescence ...

Localization and Quantification of Begomoviruses in Whitefly Tissues by Immunofluorescence and Quantitative PCR

Begomoviruses (genus Begomovirus, family Geminiviridae) are transmitted by whiteflies of the Bemisia tabaci complex in a persistent, circulative manner. Considering the extensive damage caused by begomoviruses to crop production worldwide, it is imperative to understand the interaction between begomoviruses and their whitefly vector. To do so, localization and quantification of the virus in the vector tissues is crucial. Here, using tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) as an example, we describe a detailed protocol to localize begomoviruses in whitefly midguts, primary salivary glands, and ovaries by immunofluorescence. The method is based on the use of specific antibodies against a virus coat protein, dye-labeled secondary antibodies, and a confocal microscope. The protocol can also be used to colocalize begomoviral and whitefly proteins. We further describe a protocol for the quantification of TYLCV in whitefly midguts, primary salivary glands, hemolymph, and ovaries by quantitative PCR (qPCR). Using primers specifically designed for TYLCV, the protocols for quantification allow the comparison of the amount of TYLCV in different tissues of the whitefly. The described protocol is potentially useful for the quantification of begomoviruses in the body of a whitefly and a virus-infected plant. These protocols can be used to analyze the circulation pathway of begomoviruses in the whitefly or as a complement to other methods to study whitefly-begomovirus interactions.

We describe an immunofluorescence and quantitative PCR method for the localization and quantification of begomoviruses in insect tissues. The immunofluorescence protocol can be used to colocalize viral and vector proteins. The quantitative PCR protocol can be extended to quantify viruses in whole whitefly bodies and virus-infected plants.

Lokalisation und Quantifizierung von Begomoviren in Whitefly-Geweben durch Immunfluoreszenz und quantitative PCR

Begomoviruses (genus Begomovirus, family Geminiviridae) are transmitted by whiteflies of the Bemisia tabaci complex in a persistent, circulative manner. ...