Diese Arbeit wurde durch Betriebskostenzuschüsse zur KJ aus den Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC) und der Morbus Crohn und Colitis Foundation of Canada (CCFC) unterstützt. VM wird von einem CFRI Fellowship und GB ein Absolvent Stipendium von der kanadischen Institutes für Gesundheitsforschung (CIHR) unterstützt. BAV ist ein Kinder mit Darm-und Leber-Erkrankungen Foundation (KIND) Lehrstuhl für Pädiatrische IBD Forschung und dem Canada Research Chair in Pädiatrische Gastroenterologie und KJ ist Senior Scientist Kliniker von Kind und die Kinder-und Familienforschungsinstitut (CFRI) Arzt-Wissenschaftler Award-Programm unterstützt , University of British Columbia.

Verfahren, die Tier Themen folgen Tierpflege Richtlinien der Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) an der Universität von British Columbia skizziert. In diesem Protokoll genannten Verfahren wird sowohl für Ratten und Mäuse beschrieben werden, während die repräsentative Ergebnisse von Sprague-Dawley-Ratten dargestellt. 1. Vorbereitung der DNBS und Intrarectale Verwaltung <ol><li> Für die rektale Applikation von DNBS bei Ratten, frisch vorbereiten 15-30 mg DNBS/250 ul 50% Ethanol. Bei Mäusen, bereiten 2-6 mg DNBS/100 ul 50% Ethanol. Hinweis: Optimieren Sie die genaue DNBS Konzentration bei jeder Anlage verabreicht werden. Männliche Sprague-Dawley-Ratten und C57BL / 6 Mäuse sind für die Induktion von Kolitis DNBS bevorzugt, jedoch können auch andere Maus-und Rattenstämme verwendet werden. Mäuse und Ratten nur mit 50% Ethanol behandelt kann als Kontrollgruppen jedoch die Auswirkungen von Ethanol sind mild oder nicht vorhanden, kann man omi werdent die Einbeziehung dieser Gruppe für eine Studie 12. </li><li> Bringen Sie eine 1 ml Spritze zu einer 19 G-Nadel, die eine Polyethylen-Katheter (PE-90 - Ratten oder PE-50 - Mäuse), bis zu seinem Ende befestigt. </li><li> Leicht zu betäuben die Ratte oder Maus ruht auf einem Heizkissen (zB durch die Verabreichung von 1,5% Isofluran via Nasenkegel sollten die Tiere immer noch blinken und Schluckreflexe und zeigen regelmäßige Atmung). Bewerben Tränen Gel auf die Augen, die Augen zu vermeiden Austrocknen. </li><li> Druck mit den Fingerspitzen leicht anzuwenden, um das hintere Ende des Tieres zu jeder Hocker, der im distalen Kolon vorhanden sein können, zu entfernen. </li><li> Schieben Sie den Katheter intrarektal, mit dem Katheter erreicht ca. 8 cm proximal des Anus für Ratten oder 3-4 cm für Mäuse. Spritzen Sie eine kleine Menge der Lösung, während Einführen des Katheters zu schmieren, die einen leichteren Einführen. Hinweis: Wenn ein Widerstand beim Einführen des Katheters fühlte, nicht weiterhin legen, da dies zu Perforation derdie Darmwand. Entfernen Sie den Katheter und versuchen, vorsichtig wieder einsetzen, wieder Schmieren der Doppelpunkt als Sie fortfahren. </li><li> Langsam injizieren 250 (Ratten) bzw. 100 (Mäuse) ul DNBS oder ein gleiches Volumen oder 50% Ethanol für die Kontrollen. Nach dem Einspritzen der DNBS, positionieren Sie den Tierkopf-down für 90 Sekunden, um den Verlust des DNBS vermeiden. </li><li> Nach DNBS Verwaltung, die Tiere füttern 8% Saccharose-Wasser in 0,2% Kochsalzlösung, um eine Dehydratation in der ersten Woche zu verhindern. </li><li> Beachten Sie sorgfältig die Tiere mit täglichen Überwachung zur Gewichtsreduktion und Anzeichen von Austrocknung oder Leiden für die Dauer des Experiments. Hinweis: Gewichtsverlust können schnell nähern sich den Empfehlungen der CCAC maximal zulässige Gewichtsverlust. Da dies meist aus Dehydrierung stammt, Gewichtsverlust sollte als Indikator für die Verwaltung von Ringer-Laktat-Lösung, um eine Dehydratation zu begrenzen, verwendet werden. Bitte achten Sie darauf, mit der Möglichkeit zu Fragen der Gesundheit Tierarzt gegebenenfalls zu beraten. </li></ol> 2. Collecting Gewebe und histologische Beurteilung der Schäden in DNBS Herausgefordert Mäuse <ol><li> Bei der gewünschten Zeitpunkt nach der Herausforderung mit DNBS, einschläfern Tiere durch eine Überdosierung mit Isofluran in einem Narkosekammer ausreichend mit Sauerstoff ergänzt. Beobachten Sie das Tier, bis kein Steigen oder Fallen der Brust ist zu sehen, und es gibt keine spürbare Herzschlag. Zu bestätigen, das Tier wurde vollständig durch das Fehlen einer Reaktion auf Zehenklemm oder Berühren der Hornhaut und anschließend durch Genickbruch getötet. </li><li> Öffnen Sie die Bauchhöhle und entfernen Sie den gesamten Dickdarm. Öffnen des Darms Längs; makroskopischen Schleimhautgeschwüren sollte etwa 5-6 cm proximal von dem distalen Ende des Dickdarms von Ratten (2-3 cm in Mäusen) beobachtet werden. Hinweis: Nach dem Entfernen des Dickdarms, bewerten makroskopischen Schäden Partituren, falls gewünscht. Sammeln Segmente von Dick aus entsprechenden anatomischen Lage von Kontrolltieren. Hinweis: Die Punktwertung der einzelnen Gewebe für makroskopische Schaden Partituren sollteauf die Identität der Behandlungsgruppen geblendet werden. Ergebnis Gewebeschnitte mit folgenden oder ähnlichen Kriterien: Schwere und Umfang der Geschwürbildung (0-10) mit Noten für Abwesenheit oder Anwesenheit von Durchfall (0 oder 1), Verwachsungen (0, 1, oder 2) und maximale Darmwandstärke summiert in Millimetern 11. </li><li> Sammeln 0,5 cm Abschnitte proximal zu dem Ort der maximalen makroskopischen Schäden. Schnellfrost ein 0,5 cm Abschnitt in flüssigem Stickstoff zu einem späteren Zeitpunkt zu beurteilen Myeloperoxidase (MPO)-Aktivität (ein Maß für die neutrophile Infiltration) und legen den anderen Abschnitt in 10% neutral gepuffertem Formalin für die histologische Analyse. Hinweis: schockgefroren Gewebe für Myeloperoxidase-Assay bei -80 ° C für bis zu 1 Monat gelagert werden. </li><li> Lassen Sie die für die histologische Analyse in Schritt 2.3 entnommenen Gewebe in Formalin über Nacht beheben, und dann waschen mit 70% Ethanol. Gewebe in Paraffin einbetten und auf die gewünschte Dicke (3-5 um), Fleck mit Hemotoxylin und Eosin (HE) für die histologische Scoring geschnitten. </li&gt; <li> Haben zwei Beobachter Gäste mindestens drei Gewebeschnitte von jedem Tier unter einem Lichtmikroskop auf die histologischen Schäden Partituren für jede Gruppe bestimmen. Hinweis: Die Punktwertung der einzelnen Gewebe zur histologischen Schäden Partituren sollte auf die Identität der Behandlungsgruppen geblendet werden. Ergebnis Gewebeschnitte mit folgenden oder ähnlichen Kriterien: Umfang der Entzündungszellen infiltrieren (0 = nicht vorhanden, 3 = transmurale), Verlust der Schleimhaut-Architektur (0 = nicht vorhanden, 3 = schwer), der Anwesenheit oder Abwesenheit von Kryptenabszesse (0-1) und Becherzellverlust (0-3). Bestimmen Sie histologischen Schäden Punktzahl als die Summe dieser Werte 11. </li></ol> 3. Darstellende Myeloperoxidase (MPO)-Assay auf DNBS Herausgefordert Darmgewebe <ol><li> Assay MPO-Aktivität in den in Schritt 2.3 erhaltenen 0,5 cm Colonsegmente. Homogenisieren Gewebe MPO Homogenisierungspuffer (0,5% Hexadecyltrimethylammoniumbromid-ammonium-bromid in 50 mM Kaliumphosphatpuffer (pH 6,0)), um 50 mg Kolon segme gebennt / ml Homogenisationspuffer Federung. </li><li> Aliquot der homogenisierten Lösung in Portionen von 1 ml und zentrifugiert bei 4 ° C für 2 min bei 10.000 x g. </li><li> Mischungs 100 ul jedes Aliquot mit 2,9 ml 50 mM Phosphatpuffer (pH 6,0), enthaltend 0,167 mg / ml o-dianisidinedihydrochloride und 0,0005% Wasserstoffperoxid in einer Küvette. </li><li> Messung der Geschwindigkeit der Absorption unter Verwendung eines Spektrophotometers bei 460 nm auf. Hinweis: MPO-Aktivität wird als die Menge an Enzym abbau 1 &amp;mgr; mol / min H 2 O 2 zu H 2 O bei Raumtemperatur festgelegt und wird in Einheiten pro mg Gewebe ausgedrückt. </li></ol>

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E., Blennerhassett, P., Deng, Y., Verdu, E., Khan, W., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+inflammatory+bowel+disease+in+a+mouse+model+of+depression.">Reactivation of inflammatory bowel disease in a mouse model of depression.</a> Gastroenterology. 136 (7), 2280-2288 (2009).</li><li>Reber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+animal+models+of+inflammatory+bowel+disease-an+update+on+the+role+of+the+hypothalamo-pituitary-adrenal+axis.">Stress and animal models of inflammatory bowel disease-an update on the role of the hypothalamo-pituitary-adrenal axis.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (1), 1-19 (2012).</li><li>Qiu, B., Vallance, B., Blennerhassett, P., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+CD4++lymphocytes+in+the+susceptibility+of+mice+to+stress-induced+reactivation+of+experimental+colitis.">The role of CD4+ lymphocytes in the susceptibility of mice to stress-induced reactivation of experimental colitis.</a> Nat. 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Basic Clin. 124 (1-2), 56-68 (2006).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calpain+inhibitor+I+reduces+colon+injury+caused+by+dinitrobenzene+sulphonic+acid+in+the+rat.">Calpain inhibitor I reduces colon injury caused by dinitrobenzene sulphonic acid in the rat.</a> Gut. 48 (4), 478-488 (2001).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melatonin+reduces+dinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+colitis.">Melatonin reduces dinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis.</a> J. Pineal Res. 30 (1), 1-12 (2001).</li><li>Innis, S., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+lipids+in+early+development+and+intestinal+inflammatory+disease.">Dietary lipids in early development and intestinal inflammatory disease.</a> Nutr. Rev. 65, S188-S193 (2007).</li><li>Innis, S. M., de La Presa Owens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fatty+acid+composition+in+pregnancy+alters+neurite+membrane+fatty+acids+and+dopamine+in+newborn+rat+brain.">Dietary fatty acid composition in pregnancy alters neurite membrane fatty acids and dopamine in newborn rat brain.</a> J. Nutr. 131 (1), 118-122 (2001).</li><li>Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mundra+H.,Innis+S.M.+Intestinal+responsiveness+to+experimental+colitis+in+young+rats+is+altered+by+maternal+diet.">Mundra H.,Innis S.M. Intestinal responsiveness to experimental colitis in young rats is altered by maternal diet.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 289, 13-20 (2005).</li><li>Sanovic, S., Lamb, D. P., Blennerhassett, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Damage+to+the+enteric+nervous+system+in+experimentalcolitis.">Damage to the enteric nervous system in experimentalcolitis.</a> Am. J. Pathol. 155 (4), 1051-107 (1999).</li><li>Vilaseca, J., Salas, A., Guarner, F., Rodriguez, R., Martinez, M., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fish+oil+reduces+progression+of+chronic+inflammatory+lesions+in+a+rat+model+of+granulomatous+colitis.">Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.</a> Gut. 31, 539-544 (1990).</li><li>Andoh, A., Tsujikawa, T., Ishizuka, I., Araki, Y., Sasaki, M., Koyama, S., Fujiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-3+fatty+acid-rich+diet+prevents+early+response+of+interleukin-6+elevation+in+trinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+enteritis.">N-3 fatty acid-rich diet prevents early response of interleukin-6 elevation in trinitrobenzene sulfonic acid-induced enteritis.</a> Int. J. Mol. Med. 12, 721-725 (2003).</li><li>Barros, K. V., Xavier, R. A., Abreu, G. G., Martinez, C. A., Ribeiro, M. L., Gambero, A., Carvalho, P. O., Nascimento, C. M., Silveira, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soybean+and+fish+oil+mixture+increases+IL-10,+protects+against+DNA+damage+and+decreases+colonic+inflammation+in+rats+with+dextran+sulfate+sodium+(DSS)+colitis.">Soybean and fish oil mixture increases IL-10, protects against DNA damage and decreases colonic inflammation in rats with dextran sulfate sodium (DSS) colitis.</a> Lipids Health Dis. 9, 68 (2010).</li><li>Hekmatdoost, A., Wu, X., Morampudi, V., Innis, S. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+oils+modify+the+host+immune+response+and+colonic+tissue+damage+following+Citrobacter+rodentium+infection+in+mice.">Dietary oils modify the host immune response and colonic tissue damage following Citrobacter rodentium infection in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 304 (10), 917-928 (2013).</li><li>Innis, S. M., Dai, C., Wu, X., Buchan, A. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+lipid+nutrition+alters+early+intestinal+development+and+programs+the+response+to+experimental+colitis+in+young+adult+rats.">Perinatal lipid nutrition alters early intestinal development and programs the response to experimental colitis in young adult rats.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 299 (6), 1376-1385 (1152).</li></ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Die in diesem Protokoll beschrieben DNBS Modell ist ein wertvolles, kostengünstig und reproduzierbar Colitis-Modell, das verwendet werden kann, um verschiedene Aspekte der IBD zu untersuchen. Wenn intrarektal an Ratten oder Mäusen verabreicht, DNBS induziert einen wesentlichen Grad der Entzündung und Gewebeverletzung im Dickdarm, Menschen Morbus Crohn ähneln in Bezug auf die verschiedenen histologischen Merkmale einschließlich transmurale Infiltration von polymorphkernigen Zellen und vorherrschende NF-kB-abhängige...

Entzündliche Darmerkrankungen (IBD) ist durch eine chronische rezidivierende Entzündung im Magen-Darm-Trakt (GI) gekennzeichnet, was zu Symptome von Durchfall, Gewichtsverlust, und Bauchschmerzen. Colitis ulcerosa (UC) und Morbus Crohn (CD) sind die beiden Hauptformen von IBD und kann von dem Ort der Entzündung im Gastrointestinaltrakt zu unterscheiden. In UC-Patienten, die Entzündung umfasst in der Regel das Rektum und erstreckt sich lückenlos bis der Doppelpunkt für einen variablen Umfang, die nur die oberflächlichen Schleimhaut. Im Gegensatz dazu kann CD jeden Teil des GI-Trakt beeinflussen, obwohl es betrifft vor allem das Ileum und Blinddarm. CD häufig manifestiert sich als transmurale Entzündung häufig mit Granulome verbunden und führt zu Strikturen (fibrostenotischen) und / oder das Eindringen (Fistel) Krankheit. Obwohl die Ätiologie der IBD bleibt schwer zu fassen, ist es gut möglich, dass IBD ist multifaktoriell, an denen Wechselwirkungen zwischen den Hosts Immunsystems, genetische Anfälligkeit und verantwortungsses für Umwelt-und mikrobielle Faktoren. Bisher wurden verschiedene Modelle von IBD vorgeschlagen worden, die verschiedene klinische, histologische und Immunantworten Charakteristik UC und CD anzuzeigen. Die am häufigsten verwendeten Modelle sind mit genetisch veränderten Mäusen (IL-2, IL-10, SAMP / Yit), Infektionen induziert Modelle (Citrobacter rodentium, Salmonella typhimurium), Adoptivtransfermodelle (CD45 + RB High, CD62L +-Zelltransfer in SCID-Mäuse) und chemisch induzierte Colitis Modelle (Dextran-Natriumsulfat (DSS), Trinitrobenzolsulfonsäure (TNBS) und Dinitrobenzolsulfonsäurelösung (DNBS)). Aufgrund ihrer geringen Kosten und schnelles Einsetzen der Krankheit werden chemische Modelle als von unschätzbarem Wert für die Untersuchung der verschiedenen Aspekte der IBD. Jeder der chemischen ulcerosa Modelle aufgelistet hat Vorteile sowie Einschränkungen in einigen Aspekten ihrer klinischen, histologischen und immunologischen Bedeutung für IBD. DSS ist eines der eingesetzten coli zu induzieren häufigsten chemischen Methodentis bei Nagern ein. Die Verabreichung von 3-10% DSS (MW: 42 kDa) für 7-10 Tage im Trinkwasser von Mäusen können Symptome und Anzeichen einer Kolitis einschließlich Gewichtsverlust, Durchfall mit Blut, Darmverkürzung, Schleimhautgeschwüren und neutrophile Infiltration zu induzieren. Dieses Modell ist besonders nützlich für Wirkstoff-Screening-Studien, sowie die Erforschung der Mechanismen der epithelialen Regeneration, die Auswirkungen der angeborenen Immunität auf Schleimhaut-Homöostase und die Rolle von Entzündungen bei der Förderung der Darm Dysplasie und Adenokarzinom Entwicklung. Es gibt jedoch einige Nachteile, die DSS-Modell, einschließlich einer Variation der Konzentration des DSS erforderlich ulcerosa in verschiedenen Tiereinrichtungen zu induzieren, sowie inkonsistent Wasseraufnahme durch Mäuse und somit inkonsistent Einwirkung von DSS, was zu einer Variation in dem Ausmaß, Umfang und Verteilung der Schädigung der Schleimhaut und Geschwüre im Dickdarm. All diese Eigenschaften führen zu Heterogenität der Ergebnisse und die Fähigkeit, Ergebnisse in Studien fr vergleichen begrenzenom verschiedenen Forschungsgruppen. Eine Alternative zu der DSS-Modell ist die Hapten-induzierte DNBS oder TNBS Modelle ulcerosa. Dieses Modell setzt die rektale Applikation von der Schleimhaut Sensibilisierungsmitteln DNBS oder TNBS, in unterschiedlichen Konzentrationen von Ethanol verdünnt. Die Verabreichung von Ethanol ist eine Voraussetzung, um den Dickdarm Schleimhaut-Barriere zu brechen, um das Eindringen von DNBS oder TNBS in die Lamina propria zu ermöglichen. DNBS / TNBS dann haptenize die lokalisierten Kolon-und Darm mikrobielle Proteine ​​immunogen zu werden, wodurch die Gastgeber angeborenen und adaptiven Immunantworten Triggerung. In der Regel wird dieses Modell mit schweren und manchmal blutigen Durchfall, Gewichtsverlust und Darmwandverdickung jedoch Symptome variieren je nach der Art von Nagetier verwendet wird, als auch den Zeitpunkt, Dosis und der Grad der Belastung durch die DNBS oder TNBS in das verwendete verbunden Studie. Wichtige Unterschiede zwischen Ratten und Mäusen sollte angemerkt werden, mit den Vorteilen der geringeren Kosten für den Kauf und Verpflegung, sowie lower Körpermasse für abnehmende pro-Tier Kosten der Behandlung in vivo. Dies sollte gegen die schnelleren und schwereren Verlauf von Colitis bei Mäusen, denen die zerbrechlich und reaktions Tiere können schnell eine humane Endpunkt erreichen eingestellt werden. Die Darmentzündung führt zunächst aus Ethanol induzierte Schäden intestinalen Epithelzellen, was zu einer erhöhten Durchlässigkeit epithelialen, mikrobielle Eindringen in die Schleimhaut, haptenization von Wirtsproteinen, all dies was die Infiltration von Neutrophilen, Makrophagen und Th1-T-Lymphozyten in das geschädigte Schleimhaut. Im Vergleich zu DNBS wird TNBS als gefährliche Chemikalie aufgrund seiner hochoxidativen Eigenschaften, die eine Explosionsgefahr bei Kontakt mit Basen, wie Natrium-und Kaliumhydroxid darstellen kann betrachtet. Daher DNBS wird derzeit als bevorzugte Wahl von chemischen über TNBS Colitis induzieren angesehen. Bei Nagetieren ist DNBS ulcerosa als eine der günstigsten Methoden als die fol studierenFlügel IBD verbunden Modifikatoren der Krankheit: <ol><li> Depression und Reaktivierung von Colitis: Es hat sich gezeigt, dass Stress, Angst und Depression bei CED-Patienten sind häufig mit Krankheitsrückfall verbunden. DNBS ulcerosa ist ein geeignetes Modell, um die Rolle der Depression und ihre Auswirkungen auf die Reaktivierung von Colitis bei Mäusen untersucht. Das Verfahren beinhaltet typischerweise Anfangs Induktion von Colitis durch DNBS, gefolgt von der Auflösung des ulcerosa, indem man die Mäuse für 6-8 Wochen. Die Mäuse werden dann mit Depressionen verursachen Mittel wie Reserpin oder durch Geruchs Bulbektomie verabreicht, um die Depression, gefolgt von Testen sie für die Reaktivierung der Colitis durch Herausforderung mit einem subcolitic Dosis von 2 DNBS induzieren. </li><li> Stress und Reaktivierung von Colitis: Stress ist ein weiterer gemeinsamer Umweltfaktor, der Pathogenese IBD in Verbindung gebracht wurde. Es gibt eine wachsende Zahl von Hinweisen, die eine starke Assoziation zwischen chronischem Stress und dem Auftreten der Symptome von UC und CD in Nagetier schlägts sowie bei Menschen und nicht-menschlichen Primaten 3. DNBS ulcerosa ist ein gutes Modell, um Stress-assoziierte Kolitis Reaktivierung des in Mäusen und Ratten. Die Methode wird in der Regel in einer ähnlichen Weise, wie oben erwähnt, außer für Depressionen anstelle von Depressionen eingesetzt werden, werden die Tiere auf Stressfaktoren wie Schall-und Zurückhaltung Stress 4 ausgesetzt. </li><li> Neurogener Entzündung: Eine Reihe von Studien haben entweder vorübergehende oder dauernde Veränderungen in der enterische Nervensystem (ENS) Struktur und Funktion, wie in Gewebeproben von Tiermodellen und bei Patienten mit IBD ersichtlich beschrieben. DNBS ist ein gutes Modell, um die Auswirkungen der Entzündung auf der ENS 5 zu erkunden und sowohl noradrenerge und cholinerge Nervenbahnen 6 zu studieren. </li><li> Verletzungs-Reparaturmechanismen: Während IBD Pathogenese, Wirt stamm Verletzungen Mediatoren wie reaktive Sauerstoffspezies (ROS), Stickstoffmonoxid (NO), interzelluläres Adhäsionsmolekül 3 (ICAM-3), und P-Selektin sind alle p dargestelltlag eine Rolle in der epithelialen Darmstörungen. DNBS ist ein ausgezeichnetes Modell, um Verletzungen durch die Hochregulation dieser Mediatoren sowie Reparaturmechanismen, die durch den Einsatz von selektiven Inhibitoren Drogen oder 7,8 reguliert werden verursacht studieren. </li><li> Transmurale Entzündung: Zusätzlich zu den oben erwähnten Anwendungen der DNBS, das Modell kann auch angewendet werden, um eine transmurale Entzündung des Darms, eine klassische Funktion in Patienten mit CD studieren. Beide DNBS und TNBS-induzierte Colitis mit signifikanten Eindringen von Lymphozyten zugeordnet ist, in die Darmschleimhaut macht diese Modelle besonders nützlich, um T-Zell-abhängigen Immunmechanismen zu untersuchen. </li></ol> Im Vergleich mit dem DSS-Modell, die Vorteile der DNBS und TNBS-induzierte Colitis sind geringe Kosten, schnelle Entwicklung einer Kolitis (erfordert in der Regel 1-3 Tage, um reproduzierbare Geschwüre und Entzündungen zeigen) und konsistente lokalisierte Schäden an der distalen Dickdarm. Aber die Nachteile sind eine Voraussetzung für einehöheres Maß an technischem Know-how, die Optimierung der DNBS / TNBS-Dosis, und die Notwendigkeit für die Anästhesie für die rektale Verabreichung. In dieser Methodenpapier untersuchten wir die Wirkung von verschiedenen Konzentrationen von n-6 und n-3 mehrfach ungesättigten Fettsäuren auf die Änderung der Kolon-Schleimhaut Reaktion auf DNBS-induzierte Colitis bei Ratten unter Verwendung der Pflanzenöle Distelöl (SO) und Rapsöl (CO) und Fischöl (FO). Es ist gezeigt worden, dass n-6 und n-3-Fettsäuren sind wichtige Mediatoren von entzündlichen Darmerkrankungen durch ihre Rolle als Acylreste der Zellmembran Phospholipiden 9. Im Gegensatz zu der proinflammatorischen Potential der n-6-Fettsäuren, sind n-3-Fettsäuren bei ausreichend hohen Aufnahme potentiell wirksame entzündungshemmende Mittel. Die entzündungshemmenden Wirkungen von n-3-Fettsäuren werden direkt durch Austausch von Arachidonsäure als Substrat Eicosanoid-vermittelte Hemmung der Arachidonsäure-Metabolismus und indirekt über die Veränderung der proinflammatory Genexpression und Zellsignalisierung. Die n-3-Fettsäuren führen auch zu resolvins, eine Familie von antiinflammatorischen Mediatoren. Hohe Aufnahme von n-3-Fettsäuren mit einer Abnahme in der Produktion von proinflammatorischen Eicosanoiden, Zytokine, Chemokine, reaktiven Sauerstoffspezies und die Expression von Adhäsionsmolekülen verbunden. In dieser Studie wurden Ratten ad libitum Diäten in aller Nährstoffe identisch, außer Fettsäuren zugeführt, wobei als ein Prozent Energie aus Fett, 20% SO, 20% CO, 18% Fischöl plus 2% Distelöl (FO) 10-11 . In Prozent der täglichen Energie die SO Nahrung zuge 15% Linolsäure (LA), mit &lt;0,06% α-Linolensäure (ALA) und keine Eicosapentaensäure (EPA) oder Docosahexaensäure (DHA), die CO-Diät hatte 4,2 LA% und 1,9% ALA ohne EPA oder DHA, und die FO Ernährung vorgesehen 1,4% EPA, DHA 4,9%, 0,32% LA, und 0,12% ALA. Drei Wochen nach Beginn der Diät Lipid wurden die Mäuse intrarektale DNBS oder 50% igem Ethanol verabreicht und nach 5 Tagen geopfert. Der Einflammatory Antwort wurde durch Bewertung der Gewichtsverlust, histologischen Scores und Gewebeschäden Myeloperoxidaseaktivität ausgewertet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="627">
	<colgroup>
		<col />
		<col /> 
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:121px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">19 gauge needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-50</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427517</td>
			<td>for intra-rectal administration in mice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-90</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427519</td>
			<td>for intra-rectal administration in rat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNBS</td>
			<td>MP Bio</td>
			<td>150959</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">tear gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>63601662596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>5F93-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">warming pad</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>TPZ-0510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A-962.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hexadecyltrimethyl-ammonium bromide</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>H5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium phosphate buffer solution</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>79628-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">O-dianisidine dihydrochloride</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">30% H2O2</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>31642</td>
			<td>hydrogen peroxide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectrophotometer</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>Benchmarker Plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Image.Z1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Data analysis software program </td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td style="width:119px;"> GraphPad Prism Software Version 4.00 </td>
			<td><a href="http://www.graphpad.com/">San Diego California USA, www.graphpad.com</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dnbs/tnbs colitis models: providing insights into inflammatory bowel disease and effects of dietary fat

Chronisch entzündliche Darmerkrankungen (IBD), einschließlich Morbus Crohn und Colitis ulcerosa, sind seit langem mit einer genetischen Basis gebracht worden, und vor kurzem Gastgeber Immunantwort auf mikrobielle und Umweltfaktoren. Dinitrobenzolsulfonsäurelösung (DNBS)-induzierte Colitis ermöglicht es, die Pathogenese der IBD damit verbundenen Umwelt Auslöser wie Stress und Ernährung, die Auswirkungen von möglichen Therapien, und die zugrunde liegenden Mechanismen Darmentzündung und Schädigung der Schleimhaut zu studieren. In dieser Arbeit untersuchten wir die Wirkungen von diätetischen n-3 und n-6-Fettsäuren von der Kolon-Schleimhaut-entzündliche Reaktion auf DNBS-induzierte Colitis bei Ratten. Alle Ratten wurden identisch Diäten mit Ausnahme der verschiedenen Arten von Fettsäuren gefüttert [Färberdistelöl (SO), Rapsöl (CO), oder Fischöl (FO)] drei Wochen vor der Belichtung mit DNBS Intrarectale. Steuer Ratten intrarektalen Ethanol weiter an Gewicht über der 5-Tage-Studie, während DNBS behandelten Ratten Lipid Diäten alle lost Gewicht mit FO-und CO-gefütterten Ratten zeigen signifikanten Gewichtsverlust von 48 h und Ratten SO von 72 Stunden zugeführt. Gewichtszunahme wieder nach 72 Stunden nach DNBS, und um 5 Tage nach DNBS hatte der FO-Gruppe einen höheren Körpergewicht als SO oder CO-Gruppen. Darmabschnitten sammelte 5 Tage nach der Behandlung zeigte DNBS-Brenngeschwürbildung, Krypta Zerstörung, Becher-Zell-Depletion und Schleimhaut Infiltration von akuten und chronischen Entzündungszellen, die in ihrer Schwere unter Diätgruppen unterschieden. Die SO zugeführt Gruppe zeigte die schwersten Schäden, gefolgt von der CO und FO gefüttert Gruppen, die die mildesten Grad der Gewebeverletzung zeigte. Ebenso Kolon Myeloperoxidase (MPO)-Aktivität, einem Marker der Neutrophilen-Aktivität war signifikant höher in SO durch CO gefütterten Ratten gefolgt, mit LWL-gefütterten Ratten mit deutlich niedrigeren MPO-Aktivität. Diese Ergebnisse zeigen die Verwendung von DNBS-induzierte Colitis, wie in diesem Protokoll beschrieben, um den Einfluss der Ernährung bei der Pathogenese von IBD zu bestimmen.

Herausforderung von Ratten (Sprague-Dawley) oder Mäusen (C57BL / 6) mit DNBS führt in der Regel vorübergehenden Gewichtsverlust und Durchfall, manchmal mit vorliegenden Blut im Stuhl. Allerdings können Faktoren wie Genetik, Ernährung und intestinale Mikrobiota Anfälligkeit DNBS induzierte Colitis ändern. Daher wird in den Experimenten enthalten Tiere sollten von der gleichen Institution zu sein, entweder lokal abgeleitet oder von einem Tier Lieferanten bestellt. Alle Tiere müssen sorgfältig für den Grad der Ge...

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DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

DNBS / TNBS induzierte Colitis bietet eine alternative und kostengünstige Methode, um die Pathobiologie von entzündlichen Darmerkrankungen zu untersuchen. Die in diesem Papier diskutiert Protokoll beschreibt die erfolgreiche Anwendung von DNBS Colitis bei Mäusen und Ratten zu induzieren, und erlaubt es, Host-Mediated-Darm-Reaktionen gründlich zu studieren.

DNBS / TNBS Colitis-Modelle: Einblicke in chronisch entzündlichen Darmerkrankungen und Effekte von Nahrungsfett

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

46.8K Aufrufe.  BC Children's Hospital.  DNBS / TNBS induzierte Colitis bietet eine alternative und kostengünstige Methode, um die Pathobiologie von entzündlichen Darmerkrankungen zu untersuchen. Die in diesem Papier diskutiert Protokoll beschreibt die erfolgreiche Anwendung von DNBS Colitis bei Mäusen und Ratten zu induzieren, und erlaubt es, Host-Mediated-Darm-Reaktionen gründlich zu studieren. 

Serie: DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues as well as altered cytokine homeostasis. The innate immune system plays a crucial role in recognizing pathogens and other endogenous danger stimuli. One of the major cytokines released by innate immune cells is Interleukin (IL)-1. Therefore, we utilize a whole blood stimulation assay in order to measure the secretion of inflammatory cytokines and specifically of the pro-inflammatory cytokine IL-1&beta; 1, 2, 3.
Patients with genetic dysfunctions of the innate immune system causing autoinflammatory syndromes show an exaggerated release of mature IL-1&beta; upon stimulation with LPS alone. In order to evaluate the innate immune component of patients who present with inflammatory-associated pathologies, we use a specific immunoassay to detect cellular immune responses to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), such as the gram-negative bacterial endotoxin, lipopolysaccharide (LPS). These PAMPs are recognized by pathogen recognition receptors (PRRs), which are found on the cells of the innate immune system 4, 5, 6, 7. A primary signal, LPS, in conjunction with a secondary signal, ATP, is necessary for the activation of the inflammasome, a multiprotein complex that processes pro-IL-1&beta; to its mature, bioactive form 4, 5, 6, 8, 9, 10.
The whole blood assay requires minimal sample manipulation to assess cytokine production when compared to other methods that require labor intensive isolation and culturing of specific cell populations. This method differs from other whole blood stimulation assays; rather than diluting samples with a ratio of RPMI media, we perform a white blood cell count directly from diluted whole blood and therefore, stimulate a known number of white blood cells in culture 2. The results of this particular whole blood assay demonstrate a novel technique useful in elucidating patient cohorts presenting with autoinflammatory pathophysiologies.

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&amp;#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

We describe a simple immunoassay to measure the production of pro-inflammatory cytokines, such as IL-1 beta production, in patients presenting with autoinflammatory phenotypes. By activating cells in whole blood cultures with pathogen-associated molecular patterns, specifically with lipopolysaccharide, cytokine secretion can be conveniently evaluated in whole blood supernatants.

Genaue und einfache Messung der pro-inflammatorischen Zytokins IL-1β mit einem Vollblut Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Forschung

Medizin

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are associated with obesity, though the precise underlying mechanisms that contribute to the disease are currently being delineated.2,3 Several small animal models of obesity have been developed and are employed in a variety of studies.4 A critical component to these experiments involves the collection of regional and/or total animal fat content data under varied conditions.
Traditional experimental methods available for measuring fat content in small animal models of obesity include invasive (e.g. ex vivo measurement of fat deposits) and non-invasive (e.g. Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA), or Magnetic Resonance (MR)) protocols, each of which presents relative trade-offs. Current invasive methods for measuring fat content may provide details for organ and region specific fat distribution, but sacrificing the subjects will preclude longitudinal assessments. Conversely, current non-invasive strategies provide limited details for organ and region specific fat distribution, but enable valuable longitudinal assessment. With the advent of dedicated small animal X-ray computed tomography (CT) systems and customized analytical procedures, both organ and region specific analysis of fat distribution and longitudinal profiling may be possible. Recent reports have validated the use of CT for in vivo longitudinal imaging of adiposity in living mice.5,6 Here we provide a modified method that allows for fat/total volume measurement, analysis and visualization utilizing the Carestream Molecular Imaging Albira CT system in conjunction with PMOD and Volview software packages.

Fat content analysis is routinely conducted in studies utilizing murine obesity models. Emerging methods in small animal CT imaging and analysis are providing for longitudinal detail rich fat content analysis. Here we detail step by step procedures for performing small animal CT imaging, analysis, and visualization.

Segmentierung und Messung von FAT-Volumes in Murine Obesity Modellen mithilfe von Röntgen-Computertomographie

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson's Disease

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease (PD) pathogenesis are less understood. Gene-environment interaction models have utility in unmasking the impact of specific cellular pathways in toxicity that may not be observed using a solely genetic or toxicant disease model alone.&#160;To evaluate if distinct LOX isozymes selectively contribute to PD-related neurodegeneration, transgenic (i.e. 5-LOX and 12/15-LOX deficient) mice can be challenged with a toxin that mimics cell injury and death in the disorder.&#160;Here we describe the use of a neurotoxin, 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP), which produces a nigrostriatal lesion to elucidate the distinct contributions of LOX isozymes to neurodegeneration related to PD. The use of MPTP in mouse, and nonhuman primate, is well-established to recapitulate the nigrostriatal damage in PD.&#160;The extent of MPTP-induced lesioning is measured by HPLC analysis of dopamine and its metabolites and semi-quantitative Western blot analysis of striatum for tyrosine hydroxylase (TH), the rate-limiting enzyme for the synthesis of dopamine. To assess inflammatory markers, which may demonstrate LOX isozyme-selective sensitivity, glial fibrillary acidic protein (GFAP) and Iba-1 immunohistochemistry are performed on brain sections containing substantia nigra, and GFAP Western blot analysis is performed on striatal homogenates.&#160;This experimental approach can provide novel insights into gene-environment interactions underlying nigrostriatal degeneration and PD.

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson&#039;s Disease

Lipoxygenase (LOX) isozymes can generate products that may increase or decrease neuroinflammation and neurodegeneration.&#160;A gene-environment interaction study could identify LOX isozyme-specific effects. Using the 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) model of nigrostriatal damage in two LOX isozyme-deficient transgenic lines allows for comparison of the contribution of LOX isozymes on dopaminergic integrity and inflammation.

Gen-Umgebung Interaktionsmodelle zur Entlarvung von Störmechanismen bei Parkinson-Krankheit

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Orthotopische Injektion von Brustkrebszellen in das Brustfettpolster von Mäusen, das Tumorwachstum zu studieren.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

Beurteilung der Lebensfähigkeit der Menschen Fat Injektion in Nacktmäusen mit Micro-Computertomographie

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Therapeutic Effectiveness of a Dietary Supplement for Management of Halitosis in Dogs

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized placebo-controlled crossover clinical evaluation, we assessed&#160;the effectiveness of a dedicated dietary supplement to improve chronic halitosis in 32 dogs of different breeds and ages. This protocol describes how to evalute the presence of oral volatile suphur compunds, e.g. methyl mercaptan, hydrogen sulfide and dimethyl sulfide, by means of a portable gas chromatograph device coupled with a syringe, which was used to collect the breath, and a dedicated software, which allows the operator to monitor each compound concentration during each measurement, in a relatively short time (8 min).
A significant modification of halitosis parameters was observed after 30 days since the beginning of treatment (p &#60;0.05), while a long-lasting effect was still observed even 20 days after the suspension of the treatment. Portable gas chromatograph, which is also widely used in clinical practice, can be therefore used to confirm&#160;and control halitosis in humans and animals. Even though human and animal species present some differences,&#160;this innovative and alternative therapy for halitosis management might be extended to human clinical practice as an adjuvant dietary approach.

We describe a simple approach for diagnosis of halitosis in dogs as well as a dietary approach for its management. This protocol may be extended to the management of halitosis in humans in the near future.

Therapeutische Wirksamkeit von Nahrungsergänzungsmittel für Verwaltung von Halitosis in Dogs

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to induce reflux of gastric contents, duodenal contents or mixed contents. Surgical procedures and general principles have been described in detail. A researcher with surgical experience should be able to grasp the technique after a short period of practice. After surgery, most mice can survive and develop reflux esophagitis similar to that in humans. However, it should be noted that histological differences between mouse and human esophagus are the inherent limitations of these surgical models. If used for research on Barrett&#8217;s esophagus and adenocarcinoma, these procedures may need to be combined with genetic modifications.

This article demonstrates surgical procedures of gastroesophageal reflux with mice. These models are useful tools for research on mechanisms and treatment of gastroesophageal reflux disease and potentially Barrett&#8217;s esophagus and esophageal adenocarcinoma.

Chirurgische Modelle aus gastroösophagealen Reflux mit Mäusen

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying tissue compartments, restricting the transport of smaller molecules across the epithelium and almost completely prohibiting epithelial macromolecular transport. This selectivity is determined by the mucous gel layer, which limits the transport of lipophilic molecules and both the apical receptors and tight junctional protein complexes of the epithelium. In vitro cell culture models of the epithelium are convenient, but as a model, they lack the complexity of interactions between the microbiota, mucous-gel, epithelium and immune system. On the other hand, in vivo assessment of intestinal absorption or permeability may be performed, but these assays measure overall gastrointestinal absorption, with no indication of site specificity. Ex vivo permeability assays using &#34;intestinal sacs&#34; are a rapid and sensitive method of measuring either overall intestinal integrity or comparative transport of a specific molecule, with the added advantage of intestinal site specificity. Here we describe the preparation of intestinal sacs for permeability studies and the calculation of the apparent permeability (Papp) of a molecule across the intestinal barrier. This technique may be used as a method of assessing drug absorption, or to examine regional epithelial barrier dysfunction in animal models of gastrointestinal disease.

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or "intestinal sacs" as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.

Ex vivo-Darm-Sacs zu beurteilen Durchlässigkeit der Schleimhaut in Modelle von Magen-Darm-Krankheit

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

Transplantation in die Maus Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause severe problems, such as abdominal cramping, bloody diarrhea, and weight loss, in affected individuals. Unfortunately, there is no cure yet, and treatments only aim to alleviate symptoms. Current treatments include anti-inflammatory and immunosuppressive drugs that may cause severe side effects. This warrants the search for alternative treatment options, such as nutritional supplements, that do not cause side effects. Before their application in clinical studies, such compounds must be rigorously tested for effectiveness and security in animal models. A reliable experimental model is the dextran sulfate sodium (DSS) colitis model in mice, which reproduces many of the clinical signs of ulcerative colitis in humans. We recently applied this model to test the beneficial effects of a nutritional supplement containing vitamins C and E, L-arginine, and &#969;3-polyunsaturated fatty acids (PUFA). We analyzed various disease parameters and found that this supplement was able to ameliorate edema formation, tissue damage, leukocyte infiltration, oxidative stress, and the production of pro-inflammatory cytokines, leading to an overall improvement in the disease activity index. In this article, we explain in detail the correct application of nutritional supplements using the DSS colitis model in C57Bl/6 mice, as well as how disease parameters such as histology, oxidative stress, and inflammation are assessed. Analyzing the beneficial effects of different diet supplements may then eventually open new avenues for the development of alternative treatment strategies that alleviate IBD symptoms and/or that prolong the phases of remission without causing severe side effects.

Current treatments of inflammatory bowel diseases (IBD) aim at alleviating disease symptoms but may cause severe side effects. Thus, alternative strategies are being investigated in animal colitis models. Here, we explain how the beneficial effects of diet supplements on clinical IBD signs are analyzed in such a colitis model.

Analyse wohltuende Wirkung von Nahrungsergänzungsmitteln auf Darmepithel Barrierefunktionen Während Experimental ulcerosa

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...