Die Autoren danken den Beitrag der Hammond Bay Biologische Station, Great Lakes Science Center, US Geological Survey. Wir danken auch Dr. Melinda Rahmen des Center for Advanced Microscopy an der Michigan State University für ihre technische Unterstützung bei der konfokalen Laser-Scanning-Mikroskopie. Diese Studie wird durch Zuschüsse aus dem Great Lakes Kommission für die Fischerei zu YWCD und WML unterstützt.

1. Herstellung der Lösung <ol><li> Auffüllen auf 1 l 10x 0,1 M Phosphatpufferlösung (PBS, pH 7,4): Gewicht 26,2 g Natriumphosphat (einbasischen), 115 g Natriumphosphat (dibasisches) und 87,66 g NaCl. Löst in etwa 800 ml destilliertem H 2 O, pH-Einstellung und bringt das Volumen auf 1 l mit destilliertem H 2 O. <ol><li> Stellen Sie 1 L 0,1 M phosphatgepufferter Kochsalzlösung (pH 7,4): Nehmen Sie 100 ml 10x PBS, und fügen Sie 900 ml destilliertem H 2 O. </li><li> Stellen Sie 1 L 0,1 M phosphatgepufferter Kochsalzlösung (pH 7,4) mit 0,1% Triton X-100: Nehmen Sie 100 ml 10x PBS, 1 ml Triton X-100, und bringen das Volumen auf 1 L mit destilliertem H 2 O. </li></ol></li><li> Auffüllen auf 1 l 10x 0,1 M Phosphatpuffer (PB, pH 7,4): Gewicht 26,2 g Natriumphosphat (einbasischen) und 115 g Natriumphosphat (dibasisches). Löst in etwa 800 ml destilliertem H 2 O, pH-Einstellung und bringt das Volumen auf 1 l mit destilliertem H 2 O. <ol><li> Stellen Sie 1 L 0,1 M Phosphatpuffer (pH 7,4): Nehmen Sie 100 ml 10x PB,und fügen Sie 900 ml destilliertem H 2 O. </li><li> Stellen Sie 1 L 0,1 M Phosphatpuffer (pH 7,4) mit 0,1% Triton X-100: Nehmen Sie 100 ml 10x PB, 1 ml Triton X-100, und bringen das Volumen auf 1 L mit destilliertem H 2 O. </li></ol></li><li> Machen 400 ml Hydrogel-Monomer-Lösung (4% Acrylamid, 0,25% Bis-Acrylamid, 4% Paraformaldehyd, 0,0075% Ammoniumpersulfat, 0,0005% Saponin in 0,1 M PBS): Man wiegt 0,3 g Ammoniumpersulfat und 0,2 g Saponin. Add 210 ml destilliertem H 2 O, 40 ml 40% Acrylamid, 10 ml 2% Bis-Acrylamid, 40 ml 10x PBS (pH 7,4), 100 ml 16% igem Paraformaldehyd, und gut mischen. </li><li> Stellen 4 L Clearing-Lösung (4% SDS in 0,2 M Borsäure): Wiegen 49,464 g Borsäure und 160 g SDS. Löst in etwa 3,5 L destilliertem H 2 O, pH auf 8,5 mit NaOH, und bringen das Volumen bis zu 4 L. </li><li> Stellen Sie 1 L 80% Glycerin-Lösung: Messen 800 ml Glycerin, 200 ml destilliertem H 2 O, und gut mischen. </li></ol> 2. Gewebepräparation <ol><li> Hydrogel-Monomer-Lösung herzustellen, und 10 ml Aliquots zu je 15 ml Zentrifugenröhrchen. </li><li> Präparieren Sie die ganze Gewebe und zu beheben in dem Hydrogel für 2 Tage bei 4 ° C Stellen Sie sicher, dass das Hydrogel-Lösung mindestens 10-fache Volumen des Gewebes. </li><li> Bringen Sie die Hydrogel-fixierten Gewebe (in der 15-ml-Zentrifugenrohr) zu einem Abzug. </li><li> Polymerisieren das Hydrogel fixiertem Gewebe durch Zugabe von 5 ul TEMED, gut mischen, und lassen Sie sich im Abzug bei Raumtemperatur für 2-3 Stunden. </li><li> Entfernen Sie das überschüssige Gel gründlich. Hinweis: Extra-Gel wird den Clearing-Prozess und den Antikörper Penetration während der Färbung zu verhindern. </li><li> Inkubieren Sie die fixierten Gewebe in 10 ml Clearing-Lösung in einem Inkubator Schüttler bei 70 rpm und 50 ° C eingestellt, für einige Tage, bis das Gewebe wird transparent. Ändern Clearing-Lösung mindestens einmal pro Tag und entfernen Sie das überschüssige Gel aus dem Gewebe, wenn die Änderung der Clearing-Lösung. </li><li> Spülen des Gewebes in 10 ml 0,1 M PB mit 0,1% Triton X-100 bei 70 rUhr und 37 ° C über Nacht. Wiederholen Sie diesen Schritt 3 Mal und entfernen Sie das überschüssige Gel aus dem Gewebe, wenn die Änderung der Pufferlösung. </li><li> Inkubieren der geklärten Gewebe in der primären Antikörperlösung in PB mit 0,1% Triton X-100 bei 70 rpm und 37 ° C für 2 Tage. Hinweis: Stellen Sie genug primären Antikörperlösung, die ganze Gewebe einzutauchen. </li><li> Mit 0,1% Triton X-100 spült das Gewebe in 10 ml PB bei 70 rpm und 37 ° C über Nacht. Wiederholen Sie diesen Schritt 3 Mal und entfernen Sie das überschüssige Gel aus dem Gewebe, wenn die Änderung der Pufferlösung. </li><li> Führen Sie die folgenden Schritte in einem dunklen Raum oder unter schwachem Licht. Decken Sie die Proben mit Folie auf ein Foto, Bleich verhindern. </li><li> Inkubieren der geklärten Gewebe mit dem fluoreszierenden Zweitantikörper-Lösung in PB mit 0,1% Triton X-100 und der Blockierungsserum bei 70 rpm und 37 ° C für 1 Tag. </li><li> Mit 0,1% Triton X-100 spült das Gewebe in 10 ml PB bei 70 rpm und 37 ° C über Nacht. Wiederholen Sie diesen Schritt 3 Mal und entfernen Sie das überschüssige Gel from das Gewebe beim Wechsel der Pufferlösung. </li><li> Spülen Sie das Gewebe in 10 ml PBS bei 70 min und 37 ° C über Nacht. Wiederholen Sie diesen Schritt 3 Mal und entfernen Sie das überschüssige Gel aus dem Gewebe, wenn die Änderung der Pufferlösung. </li><li> Inkubieren geklärt Gewebe in 80% Glycerin bei 70 min und 37 ° C über Nacht. </li><li> Bewahren Sie die fluoreszierenden Buntgewebe bei 4 ° C vor der konfokalen Mikroskopie. </li></ol>

<ol>
	<li>Applegate, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+history+of+the+sea+lamprey+(Petromyzon+marinus)+in+Michigan.">Natural history of the sea lamprey (Petromyzon marinus) in Michigan.</a> US Fish and Wildlife Service Special Science Report on Fishery Service. (55), (1950).</li><li>Hardisty, M. W., Potter, I. C., Hardisty, M. W., Potter, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+general+biology+of+adult+lampreys.">The general biology of adult lampreys.</a> The biology of lampreys. 1, 127-206 (1971).</li><li>Youson, J. H., Potter, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+description+of+the+stages+in+the+metamorphosis+of+the+anadromous+sea+lamprey,+Petromyzon+marinus+L.">A description of the stages in the metamorphosis of the anadromous sea lamprey, Petromyzon marinus L.</a> Can. J. Zool. 57, 1808-1817 (1979).</li><li>Boomer, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholangiocyte+apoptosis+is+an+early+event+during+induced+metamorphosis+in+the+sea+lamprey,+Petromyzon+marinus+L.">Cholangiocyte apoptosis is an early event during induced metamorphosis in the sea lamprey, Petromyzon marinus L.</a> J. Pediatr. Surg. 45, 114-120 (2010).</li><li>Kasai, M., Suzuki, H., Ohashi, E., Ohi, R., Chiba, T., Okamoto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+and+results+of+operative+management+of+biliary+atresia.">Technique and results of operative management of biliary atresia.</a> World J. Surg. 2, 571-580 (1978).</li><li>Suzuki, T., Hashimoto, T., Kondo, S., Sato, Y., Hussein, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+patients&#8217;+outcome+post-Kasai+operation:+a+19-year+experience+with+modification+of+the+hepatic+portoenterostomy+and+applying+a+novel+steroid+therapy+regimen.">Evaluating patients&#8217; outcome post-Kasai operation: a 19-year experience with modification of the hepatic portoenterostomy and applying a novel steroid therapy regimen.</a> Pediatr. Surg. Int. 26, 825-830 (2010).</li><li>Hartley, J. L., Davenport, M., Kelly, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia.">Biliary atresia.</a> Lancet. 374, 1704-1713 (2009).</li><li>Morecki, R., Glaser, J. H., Cho, S., Balistreri, W. F., Horwitz, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia+and+reovirus+type+3+infection.">Biliary atresia and reovirus type 3 infection.</a> New Engl. J. Med. 307, 481-484 (1982).</li><li>Shimadera, S., Iwai, N., Deguchi, E., Kimura, O., Fumino, S., Yokoyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inv+mouse+as+an+experimental+model+of+biliary+atresia.">The inv mouse as an experimental model of biliary atresia.</a> J. Pediatr. Surg. 42, 1555-1560 (2007).</li><li>Sidon, E. W., Youson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+changes+in+the+liver+of+the+sea+lamprey,+Petromyzon+marinus+L.,+during+metamorphosis:+I.+Atresia+of+the+bile+ducts.">Morphological changes in the liver of the sea lamprey, Petromyzon marinus L., during metamorphosis: I. Atresia of the bile ducts.</a> J. Morphol. 177, 109-124 (1983).</li><li>Yeh, C. -. Y., Chung-Davidson, Y. -. W., Wang, H., Li, K., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+synthesis+and+secretion+of+bile+salts+as+an+adaptation+to+developmental+biliary+atresia+in+the+sea+lamprey.">Intestinal synthesis and secretion of bile salts as an adaptation to developmental biliary atresia in the sea lamprey.</a> Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 109, 11419-11424 (2012).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497, 332-337 (2013).</li><li>Alarc&#243;n, V. B., Filosa, M. F., Youson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokeratins+in+the+liver+of+the+sea+lamprey+(Petromyzon+marinus)+before+and+after+metamorphosis.">Cytokeratins in the liver of the sea lamprey (Petromyzon marinus) before and after metamorphosis.</a> Cell Tissue Res. 287, 365-374 (1997).</li><li>Youson, J. H., Ogilvie, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+features+of+degeneration+of+the+gallbladder+during+lamprey+biliary+atresia.">Ultrastructural features of degeneration of the gallbladder during lamprey biliary atresia.</a> Tissue and Cell. 22, 477-492 (1990).</li><li>Morii, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onset+of+apoptosis+in+the+cystic+duct+during+metamorphosis+of+a+Japanese+lamprey,+Lethenteron+reissneri.">Onset of apoptosis in the cystic duct during metamorphosis of a Japanese lamprey, Lethenteron reissneri.</a> Anat. Rec. 293, 1155-1166 (2010).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Dieses Protokoll wird von einer neuen Methode namens &quot;Klarheit&quot; 12, die intakten Gewebes mit Polyacrylamid vernetzt, um ein nanoporöses Hydrogel zu bilden, und streift die Plasmamembran des Gewebes, um optische Transparenz und Durchlässigkeit zu erreichen makromolekularen dann modifiziert. &quot;CLARITY&quot; können intakte Gewebe Bildgebung von Langstrecken-Projektion und lokale Verdrahtung im Nervensystem. Diese neue Methode kann verwendet werden, um die gesamte Gallensystems in Meerneunauge Le...

Meerneunauge durch drei verschiedene Leben zu entwickeln Stufen 1,2. Larven Meerneunauge (L) verbringen die meiste Zeit in Höhlen benthische Filtrierer. Nachdem man durch sieben metamorphen Phasen der dramatischen Veränderungen in der Morphologie und äußere Umgestaltung in die inneren Organe 3, die daraus resultierenden Jugendliche (JV) geben eine parasitäre Phase, während der sie auf Blut-und Gewebeflüssigkeiten von Host-Fische zu füttern, die Erhöhung der Körpermasse mehr als 100 Mal . Nach 1,0 bis 1,5 years Fütterung auf die Wirtsfische im Meer oder großen Seen, Erwachsene aufhören Fütterung während des Frühjahrs und wandern zum Laichen in die Flüsse und dann sterben 1,2. Während der Metamorphose, verliert das Meerneunauge Leber die Gallenblase und der Gallenwege, eine evolutionäre mutierten Phänotyp, die den menschlichen Säugling Krankheit Gallengangsatresie nachahmt. Infant Gallengangsatresie ist eine seltene pädiatrische Lebererkrankung mit schweren medizinischen Komplikationen 4,5,6,7, 8.9.10, aber die Pathogenese und Ätiologie der Gallengangsatresie sind weitgehend unbekannt 4. Patienten mit Gallengangsatresie sterben innerhalb von zwei Jahren nach der Geburt, wenn ein chirurgischer Eingriff (Kasai-Verfahren) durchgeführt wird 5. Anschließend werden diese Patienten erfordern umfangreiche klinische Behandlung und oft eine Lebertransplantation sechs. Viele Theorien Gallenatresie Etiopathogenese vorgeschlagen worden, wie virale Infektionen, kongenitale Fehlbildungen, Autoimmunerkrankungen und toxischen Insult. Allerdings bleibt der Beitrag der jeweils für die Entwicklung der Gallengangsatresie nicht schlüssig 7,8,9,10. Im Gegensatz zu Kindern, die pathologische Gallengangsatresie leiden, unterziehen Meerneunauge entwicklungs programmiert Gallengangsatresie ohne umfangreiche necroinflammation, Fibrose oder Zirrhose 10. Die Tiere können vorübergehende Cholestase während dieses Prozesses 10 leiden, aber passen sich diesem Entwicklungszustanddurch de novo-Synthese und Sekretion von Gallensäuren im Darm nach der Entwicklungs biliäre Atresie, zusätzlich zu bekannten Mechanismen, wie die Verringerung der Gallensalz-Synthese in der Leber 11. Dieser Entwicklungsprozess in Meerneunauge bietet die einzige bekannte Möglichkeit, das Fortschreiten der Gallengangsatresie zu untersuchen. Eine neu entwickelte Methode namens &quot;Klarheit&quot; ermöglicht hochauflösende Bildgebung in komplexen Nervensystem von Säugetieren durch die Umwandlung intakten Gewebe in einem optisch transparenten nanoporöse Hydrogel-12. Mit Meerneunauge Leber und eine modifizierte CLARITY-Protokoll können intakte Gewebe-Bildgebung der Leber und Gallen Degeneration ganzen Metamorphose dokumentiert werden.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="702">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">40% acrylamide&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">161-0140</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2% bis-acrylamide&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TEMED</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ammonium persulfate&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A3678-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">boric acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B7901-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">saponin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>47036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sodium dodecyl sulfate&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:119px;">L337-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sodium phosphate (monobasic)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>04269-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sodium phosphate (dibasic)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5136-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X100-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glycerol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9012-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">16% paraformaldehyde&#160;</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaOH pellets&#160;</td>
			<td>EMD</td>
			<td>SX0590-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 ml centrifuge tubes</td>
			<td style="width:200px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">dissecting tools&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a new clarification method to visualize biliary degeneration during liver metamorphosis in sea lamprey (petromyzon marinus)

Gallengangsatresie ist eine seltene Erkrankung des Kindesalters, mit einem geschätzten 1 in 15000 Frequenz im Südosten der Vereinigten Staaten, sondern in ostasiatischen Ländern häufiger mit einer Frequenz von 1 berichtet in 5000 in Taiwan. Obwohl viel über die Verwaltung der Gallengangsatresie bekannt ist, ist der Pathogenese noch ungeklärt. Das Meerneunauge (Petromyzon marinus) bietet eine einzigartige Gelegenheit, um den Mechanismus und den Verlauf von Gallendegeneration zu untersuchen. Meerneunauge entwickeln sich durch drei verschiedene Lebensphasen: Larven, Parasiten und Erwachsenen. Während des Übergangs von Larven von parasitären Jugend, Meerneunauge Metamorphose zu unterziehen mit dramatischen Sanierung und Umbau in äußere Morphologie und inneren Organen. In der Leber wird die gesamte Gallensystems verloren, einschließlich der Gallenblase und der Gallenwege. Eine neu entwickelte Methode namens &quot;Klarheit&quot; wurde modifiziert, um die gesamte Leber und die Kreuzung mit dem Darm in metamorphen Meerneunauge zu klären. DieProzess der Gallen Degeneration wurde durch Verwendung konfokaler Laser-Scanning-Mikroskopie visualisiert und Meerneunauge während der Metamorphose zu erkennen. Diese Methode bietet ein leistungsstarkes Werkzeug, um Gallengangsatresie in einer einzigartigen Tiermodell zu untersuchen.

Mehrere wichtige Entwicklungsschritte in der Leber-Gallen-System auftreten, während das Meerneunauge Metamorphose. Der Gallengang und die Gallenblase Apoptose und entarteten (Abbildung 1). Kombinieren des modifizierten Klärungsverfahren und Färbung mit Leberzellmarker Cytokeratin 19 (CK19, sowohl Cholangiozyten-und Hepatozyten vor und nach der Metamorphose 13 vorhanden) und anti-apoptotischen Bcl-2-Marker mittels konfokaler Mikroskopie wurde die gesamte Gallensystems entlang der Z-Achse (f...

Watch this Scientific Journal Video about A New Clarification Method to Visualize Biliary Degeneration During Liver Metamorphosis in Sea Lamprey Petromyzon marinus at JoVE.com

A New Clarification Method to Visualize Biliary Degeneration During Liver Metamorphosis in Sea Lamprey Petromyzon marinus

Meerneunauge verlieren die Gallenblase und der Gallenwege während der Metamorphose, ein Prozess ähnlich dem menschlichen Gallengangsatresie. Eine neue Methode der Fixierung und Klärung (CLARITY) wurde modifiziert, um die Gallenwege mit konfokaler Laser-Scanning-Mikroskopie visualisieren. Diese Methode bietet ein leistungsstarkes Werkzeug, um Gallen Degeneration zu studieren.

Eine neue Methode zur Klärung biliäre Leberdegeneration Visualisieren Während Metamorphosis in Seeneunauge ( Petromyzon marinus)

Biliary atresia is a rare disease of infancy, with an estimated 1 in 15,000 frequency in the southeast United States, but more common in East Asian ...

a-new-clarification-method-to-visualize-biliary-degeneration-during

Research

JoVE Journal

Biology

A New Clarification Method to Visualize Biliary Degeneration During Liver Metamorphosis in Sea Lamprey (Petromyzon marinus)

13.7K Aufrufe.  Michigan State University.  Meerneunauge verlieren die Gallenblase und der Gallenwege während der Metamorphose, ein Prozess ähnlich dem menschlichen Gallengangsatresie. Eine neue Methode der Fixierung und Klärung (CLARITY) wurde modifiziert, um die Gallenwege mit konfokaler Laser-Scanning-Mikroskopie visualisieren. Diese Methode bietet ein leistungsstarkes Werkzeug, um Gallen Degeneration zu studieren. 