The authors would like to acknowledge funding from the Horserace Betting Levy Board U.K. (grant number 721) and VetCell BioScience Ltd, U.K. and by Consejer&#236;a de Innovaci&#242;n, Ciencia y Empresa, Junta de Andaluc&#236;a, Spain.

Die hier beschriebenen Fälle wurden folgende ethische Genehmigung durch die Tierethik und Tierschutz Ausschuss des Colegio de Veterinarios de Malaga, Spanien, und dem Royal Veterinary College, North Mymms, UK auf den Pferden verwendet Verfahren erteilten geführt werden auf genehmigten Protokolle, die es auf der Grundlage in der Klinik für Pferde, die Stammzell-basierte Therapien, die Sedierung, Knochenmark-Aspiration, intra-Sehnen Injektion, regionalen Perfusion, intravenöse Injektion, post-prozeduralen Behandlung und Schmerzmanagement und Überwachung nach der Implantation enthält verwendet. 1. Schlüssel Vorkehrungen getroffen werden, in Advance <ol><li> Suchen institutionelle Ethik und Tierschutz-Zulassung und sich an lokalen gesetzlichen Vorschriften vor Beginn der Arbeiten. </li><li> Suchen institutionellen Genehmigung mit ionisierender Strahlung arbeiten, wie von den lokalen und gesetzlichen Vorschriften, einschließlich der angemessenen Schutz des Personals und der Umwelt und der Veräußerung von CONTAM diktiertinated Abfälle. </li><li> Verwenden Sie die folgenden Aufnahmekriterien: mit einem nicht-traumatische Überbeanspruchung Verletzungen (Tendinopathie oder desmopathy) an die oberflächliche Beuge digitale Sehne des Vorderbein und Läsionen, was zu einem Mangel innerhalb der Sehne und dem Mangel vor Pferden durch intakte Sehne und / oder Sehnengleitgewebe umgeben . Hinweis: Die Untersuchung und Diagnose für solche Verletzungen und der klinischen Vorbereitung der Pferde für Zellimplantation wurde an anderer Stelle ausführlich 6,15. Anmerkung: Die Isolierung und Expansion in Kultur von BMMSC aus dem Knochenmark von Pferden abgeleitete zuvor 6,16 detailliert wurde. Das aktuelle Protokoll zum Einspritzen BMMSC für SDFT Verletzungen beim Pferd nutzt 10 Millionen Zellen pro ml 4 von autologen Knochenmarkstand (BMS) 16. </li><li> Verwenden Zellen, die nicht mehr als 4 Durchgänge für die in vivo-Implantation unterzogen wurden, um mögliche zelluläre Phänotyp oder genetischen Veränderungen mit hoher Durchlaufhäufigkeit c zugeordnet vermeidenEllen. </li><li> Geben Sie die erforderliche Anzahl von Zellen in der BMS (innerhalb von 24 h in einem Kühlfach an 4 - 8 ° C) in die Tierklinik, wo die Zellimplantation durchgeführt werden soll. Hinweis: Die klinische Anwendung von mesenchymalen Stammzellen im Knochenmark Stand ist ein patentiertes Verfahren durch ReCellerate Inc (USA) und seine Verwendung im Besitz kann genehmigungspflichtig. Anmerkung: Tc-99m ist ein Gamma-Strahler (140 keV) mit einer relativ kurzen Halbwertszeit (hr 6,0058 daher fast 94% der es zerfällt in seine stabile Form von 99 Tc in 24 h). Die Gamma-Energie macht es geeignet für die Detektion von Gammakameras (Szintigraphie) und der kurzen Halbwertszeit führt zu sehr begrenztes radioBelichtungsZeit, um sowohl das Pferd und die Behandlung der Tiere Personal. Dieses Protokoll beschreibt die Vor-Ort-Markierung von Zellen unter Verwendung von Tc-99m-HMPAO [HMPAO mit Tc-99m (als Natriumpertechnetat) markiert]. </li><li> Bestellen Sie das Tc-99m frisch vom Lieferanten, dass sie geliefert wird und zur Markierung der Zellen wit verwendetHin 2 h Elution von der Tc-99m-Generator. Sicherzustellen, dass der Tc-99m wird wie in 1 GBq (Standardpuffer Zulieferers) Eine 1 ml Lösung geliefert. </li><li> Verwenden Sie alle Puffer bei RT. Führen Sie die Markierungsverfahren, die Implantation der Zellen und Bildgebung (Gammaszintigraphie) in einem Isotop Containraum mit allen Geräten mit Alkohol gereinigt wischt vor dem Beginn der Arbeit. </li></ol> 2. Vorbereitung des Pferdes und Ultraschall des Vorderbein Tendon <ol><li> Nehmen Ultraschalluntersuchungen auf den ersten Eintritt für Verletzungen (bei Knochenmark angesaugt wird) und dann zu dem Zeitpunkt, wenn radioaktiv markierten Zellen injiziert. </li><li> Führen Sonographie und Zellimplantation mit dem Pferd Lager Gewicht gleichmäßig im Stall und im stehenden Sedierung (statt Vollnarkose). Verabreichen Sedierung mit einem Gemisch aus HCl und Detomidin Butorphanoltartrat, jeweils 0,01 bis 0,02 mg / kg iv. Hinweis: Recovery ist schnell und post-operative Behandlung erfordert keinebesondere Überlegungen. </li><li> Nach perineuralen Anästhesie angewendet wird (Schritt 2.6) in der betroffenen Extremität, halten das Pferd an der Station unter Sedierung, um die Bewegung des Pferdes während der Behandlung zu verringern. Sichtprüfung der entsprechenden Ebene der Sedierung aus der abgesenkten Kopfposition und der Haltung des Pferdes und das Pferd ist bequem während der Zellinjektion und den Bewegungen der Gamma-Kamera während der Aufnahme Szintigrafen Bilder beurteilt. Hinweis: Es ist nicht notwendig, Tierarzt Salbe auf die Augen (bis zur Trockenheit zu verhindern), weil unter Sedierung Blinken gelten nicht beeinträchtigt wird und das Pferd in der Lage, Feuchtigkeit der Augen zu erhalten. Die Überwachung nach der Implantation der Zellen nicht invasiv ist (Ultraschall und Gammaszintigraphie). </li><li> Clip genau das Haar über der Sehne (mit Pferdehaarschneidemaschinen), dann reinigen Sie den abgeschnitten Bereich mit einer Kombination aus einem Chlorhexidin-chirurgische Macchia und schließlich Alkohol. </li><li> Bewerben akustische Kopplung Gel in der Gegend undscannen methodisch Scans des gesamten Handflächenmittelhandbereich sequenziell markierten Stufen 1 notieren - 7 17, mit einem linearen Wandler (12 MHz oder ähnlich) auf serielle on-Inzidenz Quer- und Längs Bilder zu erhalten. Speichern die Bilder digital, so dass der Querschnittsbereich und die maximale Schadenszone 4 kann mit Hilfe einer Bildanalyse-Software erhalten werden. </li><li> Bereiten Sie den Bereich, die über den Handflächen Nerven unmittelbar distal der Handwurzel für aseptische Injektion von Lokalanästhetikum, um eine vollständige Desensibilisierung der Haut über der Sehne und der oberflächlichen Beugesehne zu gewährleisten. Spritzen Sie 2 ml mepivicaine sowohl subkutan und angrenzend an die palmare Nerven (in deren Unter Faszien Lage) zwischen den Beugesehnen und der Fesselträger unmittelbar distal der Handwurzel zu beiden Seiten des Gliedes. </li><li> Sobald die vorläufigen Scan durchgeführt wurde, bereiten die Implantationsstelle durch Waschen den Bereich mit einem Chlorhexidin-chirurgische scrub Lösung für mindestens 5 Minuten und schließlich mit Alkohol getränkter Gaze. Führen Sie alle nachfolgenden Schritte in aseptischer Art und Weise. </li></ol> 3. Tc-99m-Markierung von Equine mesenchymalen Stammzellen Hinweis: Die Zellmarkierung Schritte können während der Ultraschalluntersuchung der Vordergliedmaße, da dies zu minimieren Isotopenzerfall zwischen Zellmarkierung und Implantation von markierten Zellen in die Sehne durchgeführt werden. <ol><li> Entfernen Sie den BMS aus den Zellen, wie es mit der Aufnahme von isotopen stört. Um dies zu tun, rufen Sie die Fläschchen BMMSC (10 Millionen Zellen in 1 ml BMS) von der Kühlkasten und Pellet die Zellen in einer Mikrozentrifuge bei 350 xg für 5 min bei RT. Den Überstand mit einer 18G oder 19G Nadel (in ein 2-ml-Spritze befestigt) Entfernen Sie vorsichtig, so dass ein kleiner Tropfen (≤0.1 ml) in der Röhre, um die Zell Resuspendierung zu erleichtern. Speichern Sie den Überstand (das BMS) in einer sterilen Mikrozentrifugenröhrchen und auf Eis für eine spätere Wiederverwendung zu halten. </li><li> Resuspendieren der Zellen in dem verbleibenden Tröpfchen der Überstand durch flIcking das Rohr vorsichtig mit den Fingern (anstatt Vortex) und lassen Sie das Rohr in einem Rack bei RT. Achten Sie darauf, die Zellen vollständig suspendiert und dass es keine sichtbaren Zellklumpen. </li><li> Bereiten Sie das Tc-99m wie folgt. 1 ml der Technetium Pertechnetat in eine Phiole HMPAO Verwendung einer 1 ml Spritze und einer Nadel. Mischen Sie vorsichtig, aber gründlich und lassen Sie für 5 Minuten hinter Bleiabschirmung. Anmerkung: Dieser Schritt kann durchgeführt werden, während die Zellen in Schritt 2.1 zu drehen. </li><li> In all der Tc-99m-HMPAO Mischung unter Verwendung einer 1 ml Spritze und Nadel für die Zellen und vorsichtig mischen. Inkubation für 30 min bei RT hinter Bleiabschirmung. </li><li> Für die nächsten Schritte, verwenden Sie eine Zange (oder ein Stück Seidenpapier), um den Deckel des Mikrozentrifugenröhrchen öffnen, um Isotop Kontamination der (behandschuhten) Daumen und anschließend anderen Geräten zu minimieren. Verwenden Sie ein 2-ml-Spritze und 21 G-Nadel, um hinzuzufügen oder zu entfernen Waschpuffer. Anmerkung: Die Verwendung eines Feld Isotop Monitor wird gefördert, um eine Verunreinigung der Oberflächen und Geräte überwachen. </li&gt; <li> 1 ml PBS auf die Tc-99m-HMPAO-Zellmischung, den Deckel schließen, vorsichtig mischen und Spin, um die Zellen zu pelletieren, wie in Schritt 3.1. </li><li> Die PBS Entfernen Sie vorsichtig in ein neues Röhrchen (speichern Sie diese hinter Bleiabschirmung und Label als W1). Zellpellet in 1 ml frischem PBS. Zentrifugieren Sie das Röhrchen und Überstand wie oben (speichern Sie diese und Label als W2). </li><li> Berechnung der Effizienz der Markierung durch Messen der Zählungen in W1 und W2 Rohren und in dem Zellpellet. Tun Sie dies, indem jede Röhrchen in einem Well-Isotop Dosiskalibrator Instrument und Aufzeichnen der Radioaktivität als Zählungen pro Minute (CPM). Berechnen Sie die Markierungseffizienz als (Radioaktivität als CPM von Zellen) / (Radioaktivität von Zellen + Überstand) x 100. </li><li> Resuspendieren der Zellen gründlich in der Rest PBS und fügen Sie den BMS gerettet aus Schritt 3.1. Die Zellen sind bereit für intraläsionale Implantation. </li></ol> 4. Die Implantation von Tc-99m-HMPAO-markierten Zellen <ol><li> Intraläsionale Implantationin die Sehne unter Ultraschallkontrolle <ol><li> Langsam einführen 1,5 oder 2 Zoll (50 mm) 20 G-Nadel in die Maximalverletzungszone der Läsion in einer Längsausrichtung mit dem Ultraschallwandler in einem sterilen Tuch abgedeckt, im Einklang mit der Nadel, so dass die Länge der Nadel sonographisch erkannt werden und die Spitze, wenn die Nadel genau in der Mitte der Läsion entfernt. </li><li> Unter Verwendung geeigneter Abschirmung, sammeln die Zellen in ein 2-ml-Spritze mit einer 20 G-Nadel (Luer-Lock, das Risiko von Verunreinigungen von außen und in einer Bleiabschirmung Spritzenabdeckung zu minimieren). Entsorgen Sie die Nadel darauf achten, daß keine Flüssigkeit zu verlieren. Jetzt legen Sie die Spritze mit der markierten Zellen auf die Nadel in der Sehne vor, entfernt. </li><li> Platzieren der Ultraschallsonde unter der Nadel, so dass der Stichkanal im Gewebe ist deutlich sichtbar. Injizieren der Zellen bei einer langsamen, aber stetigen Tempo in die Läsion. Sicherzustellen, dass es keinen Widerstand gegen Injektion. Wenn dies auftrittsorgfältig neu zu positionieren die Nadel unter Ultraschallkontrolle. Überprüfen Sie, dass die Fluidausstoß in die Läsion auf dem Ultraschallbild als echofreie Flüssigkeit enthaltende hyperechogenen Luftblasen sichtbar ist. </li><li> Zurückziehen der Nadel und unmittelbar platzieren Druck über dem Nadelloch zu einem Verlust der injizierten Zellen zu verhindern und die Ausbreitung von Isotop über die Außenfläche des Gliedes zu minimieren. Unmittelbar Kleid das Teil mit einer Schicht aus Selbstklebender Verband. Das Pferd ist nun bereit für Gammaszintigraphie. Führen Sie dies sofort. Hinweis: Nach der Injektion der Zellen in der Sehne, erwerben eine Zählung der leeren Spritze und Nadel, um möglichst direkten Verlust von Zellen, die in der Spritze verbleiben können beurteilen. </li></ol></li><li> Regionale Perfusion von Tc-99m-HMPAO-markierten Zellen <ol><li> Folgen Sie Schritt 2.4. </li><li> Tragen Sie eine 100 mm Gummiaderpresse Verband an dem proximalen Mittelhand mit zwei 100 mm Watterolle Mullbinde medial und lateral positioniert. </li><li> Aseptisch vorbereiten the Haut über dem seitlichen Handflächenfingervenen auf der Ebene der lateralen proximalen Sesambein durch Schrubben der Fläche mit einem Chlorhexidin chirurgischen Scheuer Lösung für mindestens 5 Minuten und schließlich mit Gaze in Alkohol getränkt. Führen Sie alle nachfolgenden Schritte in aseptischer Art und Weise. </li><li> Bereiten Sie eine 100 mm Verlängerung mit einer 21 G x ¾ &quot;(0,8 x 19 mm) Butterfly-Nadel bei der Blutabnahme eingestellt, indem mit heparinisierter steriler Kochsalzlösung und dann einzuführen, die Nadel in die seitlichen Handflächenfingervenen. Sobald die Vene eingegeben Blut wird teilweise zu füllen den Erweiterungssatz. An der Luer-Lock-Anschluss legen Sie eine Luer-Lock-Gummikappe zur Erleichterung der nachfolgenden Injektion von markierten Zellen. </li><li> Verdünnen Sie die MSCs in 19 ml PBS durch das Sammeln der Zellen in einer 20-ml-Spritze mit dem PBS vorinstalliert. Übernehmen Sie die Zellen über den Gummi-Cup mit einem 18 g (1,2 x 40 mm) Injektionsnadel in einem langsamen, aber stetigen Rate (30 - 40 sec). Spülen Sie den Katheter mit 1 ml PBS in einer syring vorinstallierte. </li><li> Entfernen Sie die Nadel und sofort anwenden Druck auf der Haut über dem Nadelloch mit einer Schicht von fünf 4 x 4 Baumwoll-Gaze. Dann legen Sie einen leichten Verband mit elastischer Klebstoff über das proximale Sesambereich und lassen Sie den Stauschlauch an Ort und Stelle für 30 Minuten nach der Injektion. </li><li> Lassen Sie die Aderpresse nach 30 min. Das Pferd ist nun bereit für Gammaszintigraphie. Hinweis: Nach der Injektion der Zellen, zu erwerben eine Zählung der leeren Spritze und Nadel, um möglichst direkten Verlust von Zellen, die in der Spritze verbleiben können beurteilen. </li></ol></li></ol> 5. Gammaszintigraphie <ol><li> Szintigraphie Bilder <ol><li> Erwerben planare Szintigraphie Bilder mit einer Gamma-Kamera (bei 140 keV photoelektrischen Peak unter Verwendung eines 20% symmetrische Fenster festgelegt) mit einem niedrigen Energieverbrauch, parallel Loch-Kollimator ausgestattet. <ol><li> Erhalten Sie alle Bilder nach dem Zeitpunkt 0 auf Pferden stehend, wie in Schritt 2.2 sediert. Nach der Zeit 0 Szintigramm, ersetzen Sie die Licht Verband über die Implantation site mit einem Polsterbinde. Entfernen Sie diesen Verband vor jeder Szintigraphie Prüfung. </li><li> Erwerben Sie statische Bilder für 60 Sekunden jede (256 mal 256 Matrix) mit der Verarbeitungssoftware mit dem &quot;erwerben&quot; - &quot;Studienauswahl&quot; - &quot;Knochen statische&quot; Optionen. Wesentlich ist, dass das Pferd nicht bei der Bildaufnahme Zeitraum zu bewegen, weil der Modus Option statisch nicht über ein Modul zur Korrektur der Bewegung. </li><li> Für intraläsionale Injektion erhalten seitlichen Bilder von der Läsion Bereich von der Handwurzel, um das distale Ende, das Äquivalent Bereich der kontralateralen Gliedmaße, der linken Lunge Feld und der linken Schilddrüse. Bei der Übernahme der Vorderbeine Bilder, positionieren Sie einen Bleischirm zwischen die Beine, um Bildgebung des Gliedes kontralateralen vermeiden. Erfassen die Bilder bei 5 min nach der Injektion (Zeit 0) und dann nach 1, 3, 6, 12, 24, 36 und 48 Std. </li><li> Für die regionale Durchblutung, erhalten lateral und dorsal gamma Bilder wie 5.1.1.3. Besorgen Sie Bilder 5 min after Blutsperre. Dies wird einige Zeit 0 sein unmittelbar nach dem Einspritzen der Zellen zählt vor Release Tourniquet zu bewerten Es kann nützlich sein Bild der Gliedmaße zu sein. Erhalten gamma Bilder 1, 3, 6, 12, 24, 36 und 48 Stunden nach der Verabreichung der Zellen. </li></ol></li><li> Nachdem die Bilder erworben wurden, verarbeiten die Bilder manuell mit Hilfe der Option &quot;Verarbeitung&quot; der Software mit Optionen für &quot;Sokoloff&quot; Farbe und &quot;Invert&quot; Farbe ausgewählt. Als nächstes wählen Sie die &quot;region of interest&quot; (ROI) und &quot;Ellipse&quot;, da dies ermöglicht Umgestaltung der Auswahlmaske und Bewegung über den Schädigungsbereich. Besorgen Sie sich die Zählungen über den ROI, indem Sie die Option &quot;in den Statistiken&quot;. Sicherzustellen, dass gleich große Bereiche von Interesse (ROI) sind für jedes Tier in den verschiedenen Zeitpunkten erfasst. </li><li> Weiter, korrigieren Sie die Zählungen für die vorhergesagte Abfall des Technetium zu jedem Zeitpunkt. Verwenden Sie die folgende Gleichung, um die für den Abfall zu beseitigen:A = A o e - (0.693t / T 1/2) ist, wobei A o die Anfangsaktivität des Isotops ist, A die Zerfalls korrigierte Radioaktivität zur Zeit null ist, t die verstrichene Zeit und T 1/2 die Halb -life des Isotops. Dann drücken die korrigierten Impulse zu jedem Zeitpunkt in Prozent des ROI zum Zeitpunkt 0 zu erarbeiten, den Prozentsatz an Zellen verbleibende, mit der folgenden Formel: </li></ol></li></ol> % verbleibende Zellen (t) = 100 - {[(vorhergesagten Verfall (t) - Zerfall (t)) / vorhergesagten Verfall (t)]} x 100 Decay (t) = ROI (t) / ROI (0) x 100.

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JD and RKS are Scientific Advisory Board members to ReCellerate Inc.

Zusätzlich zum Knochenmark, Stammzellen sind aus Quellen wie Fettgewebe isoliert zur Markierung mit diesem Protokoll. Darüber hinaus können Zellen aus einem gefrorenen Zustand wiederbelebt und in Kultur vermehrt auf die gewünschten Zahlen für Markierungsstudien 12 werden. Ein kritischer Faktor, der die Effizienz der Markierung des BMMSC bestimmt, ist die Zeit zwischen der Elution des Tc-99m aus dem Molybdängenerator an der Radiopharmazie, Herstellung von Tc-99m-HMPAO und Ver...

Regenerativ-Strategien für die Reparatur von erkranktem oder beschädigtem Gewebe an multipotenten Stammzellen, die aus einer Vielzahl von Gewebe gewonnen und in den betroffenen Bereich implantiert basiert. Jüngste Fortschritte in der Anwendung der autologen BMMSC zur Behandlung von Sehnen- und Bänderverletzungen beim Pferd verbessert Endpunkte sowohl in experimentellen 1-5 und klinischen Studien. 6 gezeigt Das Pferd ist ein besonders attraktives Modell für die Beurteilung der Wirksamkeit der Stammzellbezogenen Behandlungen, weil sie leidet unter dem Alter und überfordern Verletzungen der Sehnen des distalen Vordergliedmaße, ist es ein athletischer Tier, und es ist eine große, Erleichterung Erholung des Knochenmarks und genaue Implantation. Sehnenverletzungen heilen natürlich mit Fibrose, aber die Sehne verheilt ist funktional inferior 7 und hat ein hohes Risiko für erneute Verletzungen 8. Die oberflächliche Beugesehne (SDFT) ist am häufigsten betroffen, wie es entwickelt hat, um als elastische Energie handelnLaden und Erfahrungen hohen Belastung betont, um energiesparende und hohe Geschwindigkeit der Fortbewegung zu erzielen. Wiederherstellung der Funktion nach einer Verletzung ist daher entscheidend. Diese Verletzungen sind ähnlich zu solchen, die die Achillessehne bei Menschen, die eine ähnliche Funktion 9 ausführt. Es gibt keine guten Behandlungsmöglichkeiten zu behandeln oder zu erreichen, der guten Reparatur für solche Verletzungen, also zellbasierte regenerative Strategien bieten eine attraktive Möglichkeit, die Ergebnisse zu verbessern und um eine erneute Verletzungen zu verringern. In den meisten Studien 5 bis 20.000.000 autologe BMMSC werden direkt in die Läsion in der Regel innerhalb des Kerns der Sehne Körper, dient daher als Aufnahme für die Zellen auftreten injiziert. Das Schicksal der Zellen einmal injiziert ist nicht klar, und verschiedene Zellmarkierungsverfahren zu verfolgen, die Zellen wurden kürzlich beschrieben. Zellen mit einem Fluoreszenz-Tag markiert wurde gezeigt, nur in relativ kleinen Stückzahlen (&lt;10%) 10,11 überleben. Fluoreszenzmarkierungen erforderlichGewebeentnahme und Schnitte für die histologische Analyse, was zeitaufwendig ist und nicht leicht zu erleichtern zeitliche Analyse in einem Großtiermodell oder in klinischen Fällen. In neueren Arbeiten haben wir die Radioisotop 99m Tc verwendet werden, um Zellen zu markieren, und folgen Sie ihr Schicksal durch Gammaszintigraphie 1. Diese Methode erlaubt eine schnelle Vergleiche zwischen unterschiedlichen Routen Zellabgabe, einschließlich intraläsionale, intravenös über die Jugularvene 1 oder regionale Perfusion intraarteriell 12 oder intravenöse 1,12 Injektionen erfolgen. Die Persistenz und die Verteilung der Zellen kann dann durch Gammaszintigraphie verschiedener Organe abgebildet werden. Dies hat gezeigt, dass nur 24% der Zellen injiziert intraläsional in der Läsion nach 24 h 1 geblieben, und dies wird durch eine andere Studie mit experimentell erstellt Läsionen und unter Verwendung des gleichen Radiomarkierung 5 unterstützt. Darüber hinaus zeigen die Zellen begrenzte Fähigkeit, zu Hause, in Sehnen-Verletzungen, wenn deliveredurch regionale Perfusion oder intravenös d sind aber in die Lunge durch die letztgenannten Routen 4 dispergiert. BMMSC mit Eisen-Nanopartikeln markiert ist eine alternative Methode, um Zellen in forelimb Sehnen 13 implantiert zu verfolgen. Obwohl Eisennanopartikel markierten Zellen zu ermöglichen Zellverfolgung in vivo MRI werden zeitliche Studien in einem großen Tier durch die Anzahl der Male Anästhesie zu jedem Zeitpunkt für die Durchführung der MRT verabreicht werden begrenzt. Darüber hinaus sind Eisennanopartikel hypointensen auf MRI, die die Informationen über die Migration von markierten Zellen in die Sehne Körper einschränkt. Andere Radioisotope, die verwendet werden können, sind Indium-111, aber dies hat den Nachteil einer längeren Halbwertszeit als Tc-99m (2,8 Tagen vs 6,0 h) und höhere Gammastrahlenemission Energie. Zusätzlich wurde die Lebensfähigkeit der Zellen wurde berichtet, reduziert werden, wenn mit Indium-111 14 gekennzeichnet. Tc-99m, auf der anderen Seite, wird routinemäßig in sowohl equine und Humankern verwendetArzneimittel zur peripheren mononukleären Blutzellen zu markieren und folgen ihrer Verteilung in vivo durch Szintigraphie. Es lassen sich relativ leicht von den Zellen unter Verwendung HMPAO als Linkermolekül, um das Technetium zu binden, genommen zu werden, wie Tc-99m-HMPAO zu den Zellen. Tc-99m-markierten HMPAO BMMSC zeigen eine gute Lebensfähigkeit und können in vitro 4 vermehren. Dieses Protokoll beschreibt die Kennzeichnung und Verfolgung von Pferde-autologe BMMSC in natürlich vorkommende Läsionen in der Vordergliedmaße SDFT implantiert. Es ist wichtig zu beachten, daß das Protokoll nur soll als Forschungswerkzeug verwendet werden. Seine Verwendung als klinische therapeutische Modalität wird nicht die Wirkung der Radiomarkierung auf zelluläre Phänotyp, nicht vollständig aufgeklärt worden empfohlen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Technetium99m&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Please enquire with local ionisation radiation supplier in accordance with legal requirements.&#160; The isotope must be used within 2 h of elution from the molybdenum-99 generator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ceretec - Hexamethylpropyleneamine oxime (HMPAO)&#160;</td>
			<td>GE HealthCare</td>
			<td></td>
			<td>Please enquire directly with GE HealthCare</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfuge, Minispin/Minispin Plus</td>
			<td>Ependorf</td>
			<td>22620100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G and 19G Needles</td>
			<td>Terumo Medical</td>
			<td>NN-1838R (18G);&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; NN1938R (19G)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 mL and 2 mL</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies Ltd</td>
			<td>SYR6200 (1 mL); SYR6003 (2 mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 1.5 mL</td>
			<td>Greiner Bio-One Ltd</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS - Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>14190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gauze Swabs</td>
			<td>Shermond Ltd</td>
			<td>UNG602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoflexVet self adhering bandage</td>
			<td>Andover Healthcare, Inc.</td>
			<td>3540RB-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound imaging software</td>
			<td>Scion Image, Scion Corporation, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicasXplus Scintigram processing software</td>
			<td>Bartec Technologies Ltd</td>
			<td></td>
			<td>http://www.bartectechnologies.com/veterinaryscintigraphy.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Field isotope counter for monitoring isotope</td>
			<td>John Caunt U.K.</td>
			<td>GMS1800a</td>
			<td>http://www.johncaunt.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Well counter for isotope measurements, dose calibrator</td>
			<td>Capintec Southern Scientific</td>
			<td>CRC-25R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging and tracking of technetium-99m labeled bone marrow mesenchymal stem cells in equine tendinopathy

Jüngste Fortschritte in der Anwendung von Knochenmark mesenchymale Stammzellen (BMMSC) zur Behandlung von Sehnen- und Bänderverletzungen im Pferde schlage in experimentellen und klinischen Studien verbessert Ergebnismessungen. Obwohl die BMMSC werden in die Sehne Läsion in großer Zahl implantiert (üblicherweise 10 - 20 Millionen Zellen), wird nur eine relativ kleine Anzahl überleben (&lt;10%), obwohl diese für bis zu 5 Monate nach der Implantation fortbestehen. Dies scheint eine allgemeine Beobachtung bei anderen Arten, bei denen BMMSC haben in andere Gewebe implantiert worden, und es ist wichtig, zu verstehen, wenn dieser Verlust auftritt, wie viele überleben die anfängliche Implantationsprozess und ob die Zellen in anderen Organen gelöscht. Verfolgen des Schicksals der Zellen kann durch die radioaktive Markierung BMMSC vor der Implantation, die nicht-invasive in vivo-Abbildung von Zellenposition und Quantifizierung von Zellzahlen können erreicht werden. Dieses Protokoll beschreibt eine Zelle LABÉLIng Verfahren, das Technetium-99m (Tc-99m), und Verfolgung von diesen Zellen nach der Implantation in die verletzten Beugesehnen bei Pferden verwendet. Tc-99m ist ein kurzlebiges (t 1/2 von 6,01 hr) Isotop, das Gammastrahlen emittiert, und kann von Zellen in Gegenwart der lipophilen Verbindung hexamethylpropyleneamine oxim (HMPAO) internalisiert werden. Diese Eigenschaften machen es ideal für den Einsatz in der Nuklearmedizin Kliniken für die Diagnose von vielen verschiedenen Krankheiten. Das Schicksal der markierten Zellen in der Kurzzeit (bis zu 36 h) von Gammaszintigraphie, sowohl die Zahl der Zellen in der Läsion und der Verteilung der Zellen in der Lunge, Schilddrüse und andere Organe erhalten quantifizieren folgen. Diese Technik wird von der Kennzeichnung von Blutleukozyten angepasst und könnte zu Bild implantiert BMMSC in anderen Organen genutzt werden.

Tc-99m-HMPAO Einbau in BMMSs nicht beeinträchtigt ihre Fähigkeit, auf Gewebekulturkunststoff haften und während sie (Abbildung 1) zeigen die Proliferation Fähigkeit, Monoschichten bilden, haben wir noch nicht vollständig bestimmt, ob Proliferationsraten oder anderen zellulären Phänotypen betroffen sind. Ihrer Morphologie ähnelt unmarkierten Zellen mit einer typischen Spindelform. Das zellulare Markierungseffizienz (dh., Die Aufnahme von Label) variiert typischerweise von etwa 1,5% bis 2...

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In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

This protocol describes the radiolabeling of equine mesenchymal stem cells and their implantation into tendon injuries in the horse in order to determine cell survival and tissue distribution using gamma scintigraphy.

In-vivo-Imaging und Verfolgung von Technetium-99m markierten Knochenmark mesenchymale Stammzellen in Equine Tendinopathie

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest ...

in-vivo-imaging-tracking-technetium-99m-labeled-bone-marrow

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

9.7K Aufrufe.  The Royal Veterinary College. This protocol describes the radiolabeling of equine mesenchymal stem cells and their implantation into tendon injuries in the horse in order to determine cell survival and tissue distribution using gamma scintigraphy.

Serie: In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

Pre-clinical Evaluation of Tyrosine Kinase Inhibitors for Treatment of Acute Leukemia

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are attractive druggable therapeutic targets. Here we describe an efficient four-step strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in the treatment of acute leukemia. Initially, western blot analysis is used to confirm target inhibition in cultured leukemia cells. Functional activity is then evaluated using clonogenic assays in methylcellulose or soft agar cultures. Experimental compounds that demonstrate activity in cell culture assays are evaluated in vivo using NOD-SCID-gamma (NSG) mice transplanted orthotopically with human leukemia cell lines. Initial in vivo pharmacodynamic studies evaluate target inhibition in leukemic blasts isolated from the bone marrow. This approach is used to determine the dose and schedule of administration required for effective target inhibition. Subsequent studies evaluate the efficacy of the TKIs in vivo using luciferase expressing leukemia cells, thereby allowing for non-invasive bioluminescent monitoring of leukemia burden and assessment of therapeutic response using an in vivo bioluminescence imaging system. This strategy has been effective for evaluation of TKIs in vitro and in vivo and can be applied for identification of molecularly-targeted agents with therapeutic potential or for direct comparison and prioritization of multiple compounds.

Receptor tyrosine kinases are ectopically expressed in many cancers and have been identified as therapeutic targets in acute leukemia. This manuscript describes an efficient strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors for the treatment of acute leukemia.

Präklinische Evaluierung von Tyrosinkinase-Inhibitoren für die Behandlung von akuter Leukämie

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are ...

Forschung

Medizin

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

In-vivo-19 F-MRT für die Zellverfolgung

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in vivo demonstration of such cells has only recently been attained. Here, in vivo imaging techniques to investigate the role of endogenous osteogenic stem/progenitor cells (OSPCs) and their progeny in bone repair are provided. Using osteo-lineage cell tracing models and intravital imaging of induced microfractures in calvarial bone, OSPCs can be directly observed during the first few days after injury, in which critical events in the early repair process occur. Injury sites can be sequentially imaged revealing that OSPCs relocate to the injury, increase in number and differentiate into bone forming osteoblasts. These methods offer a means of investigating the role of stem cell-intrinsic and extrinsic molecular regulators for bone regeneration and repair.

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Quantitative measurement of bone progenitor function in fracture healing requires high resolution serial imaging technology. Here, protocols are provided for using intravital microscopy and osteo-lineage tracking to sequentially image and quantify the migration, proliferation and differentiation of endogenous osteogenic stem/progenitor cells in the process of repairing bone fracture.

Sequentiell<em&gt; In-vivo-</em&gt; Imaging von osteogenen Stammzellen / Vorläuferzellen während Fracture Repair

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Femoral Bone Marrow Aspiration in Live Mice

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed step-by-step technical procedure for an analogous procedure in live mice which allows for serial characterization of cells present in the BM. This procedure facilitates studies aimed to detect the presence of exogenously administered cells within the BM of mice as would be done in xenograft studies for instance. Moreover, this procedure allows for the retrieval and characterization of cells enriched in the BM such as hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) without sacrifice of mice. Given that the cellular composition of peripheral blood is not necessarily reflective of proportions and types of stem and progenitor cells present in the marrow, procedures which provide access to this compartment without requiring termination of the mice are very helpful. The use of femoral bone marrow aspiration is illustrated here for cytological analysis of marrow cells, flow cytometric characterization of the hematopoietic stem/progenitor compartment, and culture of sorted HSPCs obtained by femoral BM aspiration compared with conventional marrow harvest.

This protocol describes a procedure for serial sampling of femoral bone marrow (BM) without requiring the sacrifice of mice. This procedure facilitates longitudinal studies of the BM composition of mice over time and provides serial access to cells within the BM for ex vivo and transplantation studies.

Oberschenkelknochenmark-Aspiration im Live-Mäuse

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor initiation, metastasis and resistance to radio- and chemotherapy. Here we describe a specific methodology for culturing primary human pancreatic CSCs as tumor spheres in anchorage-independent conditions. Cells are grown in serum-free, non-adherent conditions in order to enrich for CSCs while their more differentiated progenies do not survive and proliferate during the initial phase following seeding of single cells. This assay can be used to estimate the percentage of CSCs present in a population of tumor cells. Both size (which can range from 35 to 250 micrometers) and number of tumor spheres formed represents CSC activity harbored in either bulk populations of cultured cancer cells or freshly harvested and digested tumors 1,2. Using this assay, we recently found that metformin selectively ablates pancreatic CSCs; a finding that was subsequently further corroborated by demonstrating diminished expression of pluripotency-associated genes/surface markers and reduced in vivo tumorigenicity of metformin-treated cells. As the final step for preclinical development we treated mice bearing established tumors with metformin and found significantly prolonged survival. Clinical studies testing the use of metformin in patients with PDAC are currently underway (e.g., NCT01210911, NCT01167738, and NCT01488552). Mechanistically, we found that metformin induces a fatal energy crisis in CSCs by enhancing reactive oxygen species (ROS) production and reducing mitochondrial transmembrane potential. In contrast, non-CSCs were not eliminated by metformin treatment, but rather underwent reversible cell cycle arrest. Therefore, our study serves as a successful example for the potential of in vitro sphere formation as a screening tool to identify compounds that potentially target CSCs, but this technique will require further in vitro and in vivo validation to eliminate false discoveries.

Pancreatic cancer stem cells (CSCs) can be expanded in vitro using the anchorage-independent sphere culture technique, which represents a powerful tool to study CSC biology and can serve as the first step to develop novel CSC-targeting therapies. Here the methodology for expanding, analyzing and targeting of pancreatic CSCs is provided.

Studieren Bauchspeicheldrüsenkrebs Stammzelleigenschaften für die Entwicklung neuer Behandlungsstrategien

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, synovial-fluid-derived MSCs were reported to have multi-lineage differentiation potential and immunomodulatory features, which indicates that these cells can be used for tissue engineering and systemic treatments. This study presents a protocol for simple and non-invasive isolation of MSCs derived from the bone marrow and synovial fluid of minipigs to analyze cell surface markers for cell phenotyping and in vitro culturing. Using sexually mature six-month-old minipigs, bone marrow was extracted from the iliac crest bone using a bone marrow extractor, and the synovial fluid was aspirated from the femorotibial joint. Procedures for the collection of samples from both sources were non-invasive. The protocols for effective isolation of MSCs from harvested cell sources and for creating in vitro culture conditions to expand stable MSCs from minipigs and the application of systemic autologous treatments are provided. For cell phenotyping, the cell surface markers of both cells were analyzed using flow cytometry. In the results, the MSCs were isolated from the synovial fluid of the minipigs and showed that synovial-fluid-derived MSCs have a similar morphology and cell phenotype to bone-marrow-derived MSCs. Therefore, non-invasively obtained synovial fluid is a valuable source of MSCs.

A protocol establishing mesenchymal stem cells (MSCs) isolated from the synovial fluid and bone marrow of minipigs and non-invasively collected using syringe aspiration is presented. Cellular phenotyping was performed using flow cytometry after cell isolation and in vitro cultivation of bone marrow and synovial fluids derived from MSCs.

Isolation und zelluläre Phänotypisierung von mesenchymalen Stammzellen abgeleitet von Synovialflüssigkeit und Knochenmark von Minipigs

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

Depletion von Maus-Zellen aus menschlichem Tumorxenografte deutlich verbessert Downstream-Analyse von Zielzellen

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Nerve Stimulator-guided Injection of Autologous Stem Cells Near the Equine Left Recurrent Laryngeal Nerve

Recurrent laryngeal neuropathy (RLN) commonly affects horses and is characterized by abnormal respiratory sounds and exercise intolerance. The recurrent laryngeal nerve shows lesions of demyelination. The benefit of applying stem cells to demyelinated nerves has been demonstrated in various animal models. The aim of the study was to test the feasibility and safety of a peri-neuronal injection of autologous muscle-derived mesenchymal stem cells to the left recurrent laryngeal nerve in healthy horses by using an electrical nerve stimulator.
Muscle-derived stems cell are obtained from five healthy Standardbred horses by sampling 20 mg of muscle tissue with a semi-automatic 14 G biopsy needle from the triceps muscle. Movements of the larynx are monitored via upper-airway video endoscopy. The left recurrent laryngeal nerve is approached with an insulated nerve block needle. Nerve stimulation is applied, starting at 2 mA, and the successful abduction of the left arytenoid is monitored. The stimulation intensity is reduced progressively. When a loss of the motor response is observed at 0.5 mA, 107 autologous muscle-derived stem cells are injected. Two examiners, who are blinded to the time point, score the laryngeal function of the horses prior to the treatment and at day 1, day 7, and day 28 after the injection of the cells. In a sixth horse, 1 mL of 2% lidocaine is injected to further confirm the correct positioning of the needle. This leads to a temporary paralysis of the left arytenoid cartilage.
This study proves that the recurrent laryngeal nerve can be approached with the help of an electrical nerve stimulator and that the electrical stimulation of the nerve is well tolerated by the horses. No modification of the laryngeal function was observed in any of the horses after the injection of the stem cells. Further studies should be conducted to describe the effects of a peri-neuronal injection of autologous muscle-derived mesenchymal stem cells to horses suffering from RLN.

Here, we present a protocol to inject autologous muscle-derived stem cells in the proximity to the recurrent laryngeal nerve with the help of an electrical nerve stimulator. This novel technique may become useful for the treatment of equine recurrent laryngeal neuropathy.

Nerv Stimulator-gesteuerte Injektion von autologen Stammzellen in der Nähe der Pferde Links wiederkehrende Laryngeal Nerv

Recurrent laryngeal neuropathy (RLN) commonly affects horses and is characterized by abnormal respiratory sounds and exercise intolerance. The recurrent ...

Quantitative [18F]-Naf-PET-MRI Analysis for the Evaluation of Dynamic Bone Turnover in a Patient with Facetogenic Low Back Pain

Imaging techniques that reflect dynamic bone turnover may aid in characterizing a wide range of bone pathologies. Bone is a dynamic tissue undergoing continuous remodeling with the competing activity of osteoblasts, which produce the new bone matrix, and osteoclasts, whose function is to eliminate mineralized bone. [18F]-NaF is a positron emission tomography (PET) radiotracer that enables visualization of bone metabolism. [18F]-NaF is chemically absorbed into hydroxyapatite in the bone matrix by osteoblasts and can thus noninvasively detect osteoblastic activity, which is occult to conventional imaging techniques. Kinetic modeling of dynamic [18F]-NaF-PET data provides detailed quantitative measures of bone metabolism. Conventional semi-quantitative PET data, which utilizes standardized uptake values (SUVs) as a measure of radiotracer activity, is referred to as a static technique due to its snapshot of tracer uptake in time.&#160; Kinetic modeling, however, utilizes dynamic image data where tracer levels are continuously acquired providing tracer uptake temporal resolution. From the kinetic modeling of dynamic data, quantitative values like blood flow and metabolic rate (i.e., potentially informative metrics of tracer dynamics) can be extracted, all with respect to the measured activity in the image data. When combined with dual modality PET-MRI, region-specific kinetic data can be correlated with anatomically registered high-resolution structural and pathologic information afforded by MRI. The goal of this methodological manuscript is to outline detailed techniques for performing and analyzing dynamic [18F]-NaF-PET-MRI data. The lumbar facet joint is a common site of degenerative arthritis disease and a common cause for axial low back pain.&#160; Recent studies suggest [18F]-NaF-PET may serve as a useful biomarker of painful facetogenic disease.&#160; The human lumbar facet joint will, therefore, be used as a prototypical region of interest for dynamic [18F]-NaF-PET-MRI analysis in this manuscript.

Quantitative [18F]-Naf-PET-MRI Analysis for the Evaluation of Dynamic Bone Turnover in a Patient with Facetogenic Low Back Pain

Imaging techniques that reflect dynamic bone turnover may aid in characterizing a wide range of bone pathologies. We present detailed methodologies for performing and analyzing dynamic [18F]-NaF-PET-MRI data in a patient with facetogenic low back pain using the lumbar facet joints as a prototypical region of interest.

Quantitative [18F]-Naf-PET-MRI-Analyse zur Bewertung des dynamischen Knochenumsatzes bei Patienten mit facetogenen Rückenschmerzen

Imaging techniques that reflect dynamic bone turnover may aid in characterizing a wide range of bone pathologies. Bone is a dynamic tissue undergoing ...

High-throughput Nitrobenzoxadiazole-labeled Cholesterol Efflux Assay

Atherosclerosis leads to cardiovascular disease (CVD). It is still unclear whether cholesterol-HDL (cHDL) concentration plays a causal role in atherosclerosis development. However, an important factor in early stages of atheroma plaque formation is cholesterol efflux capacity to HDL (the ability of HDL particles to accept cholesterol from macrophages) in order to avoid foam cell formation. This is a key step in avoiding the accumulation of cholesterol in the endothelium and a part of reverse cholesterol transport (RCT) to eliminate cholesterol through the liver. Cholesterol efflux capacity to serum or plasma in macrophage cell models is a promising tool that can be used as biomarker for atherosclerosis. Traditionally, [3H]-cholesterol has been used in cholesterol efflux assays. In this study, we aim to develop a safer and faster strategy using fluorescent labelled-cholesterol (NBD-cholesterol) in a cellular assay to trace the cholesterol uptake and efflux process in THP-1-derived macrophages. Finally, we optimize and standardize the NBD-cholesterol efflux method and develop a high-throughput analysis using 96-well plates.

Measurement of in vitro cholesterol efflux capacity to serum or plasma in macrophage cell models is a promising tool as a biomarker for atherosclerosis. In the present study, we optimize and standardize a fluorescent NBD-cholesterol efflux method and develop a high-throughput analysis using 96-well plates.