The project was supported by CTSA (UL1TR000058) from the National Center for Advancing Translational Sciences) and the CCTR Endowment Fund of Virginia Commonwealth University. The contents are solely the responsibility of the authors and do not necessarily represent official views of the National Center for Advancing Translational Sciences or the National Institutes of Health.

Alle Blutziehverfahren sollten von lizenzierten und zertifizierten Fachkräften durchgeführt werden. Verwendung von menschlichen Probanden für Forschung beinhaltet die Genehmigung von der Institutional Review Board oder andere geeignete Behörde. Besondere Vorsichtsmaßnahmen in Bezug auf informierte Zustimmung und zum Schutz Teilnehmer-Identifikations müssen befolgt werden. Alle in diesem Protokoll aufgeführten Experimente beinhalten Umgang mit menschlichem Blut und / oder Blutprodukte und geeignete persönliche Schutzausrüstung muss jederzeit getragen werden. Die Abfälle sollten so biohazard berücksichtigt und entsprechend den behördlichen Vorschriften entsorgt werden. 1. Blutentnahme <ol><li> Identifizieren Sie den Patienten / Teilnehmer, und bestätigen Sie mit vorhandenen Datensätzen. Erläutern Sie die Studie im Detail und erhalten eine Einverständniserklärung. </li><li> Haben Sie ein Fach für einzelne Patienten mit Rohren auf einer ebenen und stabilen Fläche markiert gesetzt. </li><li> Erklären Sie den Vorgang und machen die Patienten Sitz bequem mit dem Arm getragen. Informieren Sie den Patienten, dass er oder she eine kleine Prise fühlen und sollten noch während des gesamten Verfahrens bleiben. </li><li> Befestigen Sie die Nadel mit dem Adapter. </li><li> Hände waschen und Handschuhe tragen. </li><li> Bereiten Sie die Ellenbeuge bei der Blutabnahme durch Reinigung mit 70% Isopropylalkohol in konzentrischen Kreisen von innen nach außen. Lassen Sie den Ort an der Luft trocknen für 30 Sekunden. </li><li> Identifizieren Sie die entsprechende Vene durch Palpation. </li><li> Übernehmen Sie die Tourniquet 3-4 in über der Einstichstelle darauf achten, dass es nicht zu eng (während immer noch das Gefühl der Radialpuls). </li><li> Führen Sie die Venenpunktion durch Einführen des Kegel der Nadel 15-30 Grad auf die Haut in einer fließenden Bewegung. Schieben Sie den Blutsammelröhrchen durch die Nadel und sammeln 9 ml Vollblut. </li><li> Entfernen Sie die Aderpresse. Entfernen Sie den Schlauch von der Nadel. </li><li> Ziehen Sie die Nadel und ziehen Sie die Tupfer an der Einstichstelle vor der Nadel Entfernen. Entsorgen Sie die Nadel in einem geeigneten Behälter für biologischen. </li><li> Bitten Sie den Patienten zu pflegen pressure an der Einstichstelle. </li><li> Beschriften Sie die Röhrchen </li><li> Überprüfen Sie die Einstichstelle, um sicherzustellen, Blutung aufgehört hat. </li><li> Klebstoff Bandage oder Klebeband über die Gaze-Platz, zu fragen, ob der Patient das Gefühl in Ordnung (kein Schmerz, Schwellung oder Benommenheit) </li><li> Vielen Dank, dass Sie den Patienten / Teilnehmer vor der Entlassung. </li></ol> 2. L-PRF Vorbereitung <ol><li> Unmittelbar nach der venösen Blutentnahme in der rot-gekrönt trockenen Glasröhre, legen Sie sie in der Zentrifuge. </li><li> Zentrifuge bei 400 × g für 12 min bei RT nach dem Platzieren eines geeigneten Gegengewicht. </li><li> Entfernen des Rohrs am Ende des Zyklus. Beachten Sie den drei Schichten: plättchenarmes Plasma (PPP), plättchenreiches Fibrin (L-PRF) und RBC Basis (Abbildung 1). </li><li> Saugen Sie das PPP mit einer Pipette. Mit einer Pinzette ziehen Sie den L-PRF heraus und legen Sie sie in einem sterilen, perforierten Metallgitter. </li><li> Verwendung chirurgische Skalpell, kratzen den Großteil der RBC-Schicht sorgfältig Verlassen des Buffy Mantel intakt. </li><li> Komprimieren Sie vorsichtig die L-PRF Blutgerinnsel (unter Verwendung der sterilen Metallplatte, Gesamtgewicht beträgt ca. 225 g) für 30 Sekunden. Thrombozytenarmes Plasma herausgedrückt werden. </li><li> Entfernen Sie die Platte und heben Sie die L-PRF-Membran. Der L-PRF-Membran ist bereit für den Einsatz in Experimenten 12. </li></ol> 3. einachsige Zugversuch <ol><li> Ort L-PRF-Membranen (n = 6) auf ein Filterpapier für eine einfache Handhabung und Punch in &quot;Hundeknochen&quot; mit maßgeschneiderten Metallbacken (2,75 mm breit an ihrer engsten Stelle mit einer Messlänge von 7,5 mm). </li><li> Die Dicke jeder Probe an drei Stellen und nehmen Sie den Durchschnitt. </li><li> Vorsichtig in Eingriff mit dem L-PRF-Membran in der Mitte der Backe Griffe des einachsigen Prüfsystem. </li><li> Den Filer Papierträger sorgfältig zu reißen, um die L-PRF-Membran freizulegen. </li><li> Programmieren Sie das Gerät, so dass der bewegliche Kopf ist mit einer konstanten Rate (10,0 mm / min) in Betrieb und starten Sie das Experiment, wenn der L-PRF noch feucht ist. </li><li> Notieren Sie den Elastizitätsmodul, die Bruchenergie und Bruchdehnung aus der Begleitung des einachsigen Testsystem-Software. Diese Werte werden automatisch berechnet und kein Benutzer definierten Eingabe erforderlich ist. Bitte siehe Abbildung 3. </li></ol> 4. Nahtfestigkeit <ol><li> Ort L-PRF-Membranen (n = 3) auf einem Filterpapier zur Erleichterung der Handhabung und in rechteckige Proben Messen (10 mm x 25 mm) mit einem chirurgischen Skalpell geschnitten. </li><li> Die Dicke jeder Probe (Durchschnitt von 3). </li><li> Machen Sie eine Lochblende in der Mitte der Probe unter Verwendung des Edelstahlkieferorthopädische Ligaturdraht (220 &amp; mgr; m im Durchmesser). </li><li> Übergeben Sie die Ligaturendraht durch das Loch, um eine Schleife zu bilden und zu beheben, um die Zug-Prüfmaschine. Setzen Sie den Rand des L-PRF-Membran zum Unterkiefer Griff 13. </li><li> Programmieren Sie das Gerät, so dass der bewegliche Kopf wird mit einer konstanten Geschwindigkeit (10 mm / min) und Start-Betriebsdas Experiment. </li><li> Notieren Sie den Elastizitätsmodul, die Bruchenergie und Bruchdehnung aus der Begleitung des einachsigen Testsystem-Software. Diese Werte werden automatisch berechnet und kein Benutzer definierten Eingabe erforderlich ist. Bitte siehe Abbildung 3. </li></ol> 5. morphologische Untersuchung <ol><li> Bereiten Sie die L-PRF Proben für die REM-Untersuchung mit einem 10 mm Hautbiopsie Stempel und legen Sie sie in einem 24-Well-Platte. </li><li> Waschen Sie die Proben mit PBS und fixieren mit 2,5% Glutaraldehyd (in PBS) für 20 min. </li><li> Dehydratisierung der Proben durch Eintauchen in sequentiell steigenden Konzentrationen von Ethanol (50%, 70%, 80%, 90% und 100%) für jeweils 5 Minuten. </li><li> Behandlung mit 0,5 ml 100% HMDS (Hexamethyldisilazan) für 5 min. Belüften O / N, um überschüssiges HMDS 14. </li><li> Halterung Proben auf Stummel mit einem doppelseitigen Klebeband, Sputter-Schicht Platin 70 s und untersucht in einem Rasterelektronenmikroskop, die bei einem Gaspedalmenarbeit Spannung von 20 kV (oder entsprechende Einstellung). </li></ol> 6. Genipin Vernetzung von L-PRF, Trypsin Immission und Ninhydrinassay <ol><li> Um Genipin vernetzt L-PRF vorzubereiten, spülen Membranen mit PBS und genießen in 4 ml 1% Genipin Lösung (in 70% Ethanol) für 48 Stunden. Spülen Sie mit PBS vor der Experimente, um überschüssige Genipin 15, 16 zu entfernen. </li><li> Beurteilen Sie die Stabilität der Genipin Vernetzung von L-PRF durch seine Beständigkeit gegen Abbau durch Trypsin. Ort L-PRF-Membran (n = 3) und Genipin vernetzt L-PRF in 500 ul von 0,01% Trypsin und bei 37 ° C für 3 Tage mit einer Tageswechsel Trypsin inkubiert. <ol><li> Wiegen Proben am Tag 1 vor der Belichtung und an Tag 3. Der Unterschied in der Start Enzym und enden Gewicht darstellt enzymatischen Abbau 17. </li></ol></li><li> Quantifizierung der Menge an Vernetzung in Genipin behandelten L-PRF (G-PRF) Ninhydrin Assay. Bereiten Sie zuerst die Standard curve mit Glycin (1 mM-0,031 mM) Kurve, um die Beziehung zwischen der freien Aminosäurekonzentration (FAA) und Absorptionsvermögen zu schaffen. <ol><li> Wärme PRF Proben mit 1 ml 2% (w / v) Ninhydrin für 15 min bei 100 ° C. </li><li> Lassen Sie die Lösung auf RT abkühlen und fügt 1,5 ml 50% Ethanol. </li><li> Analysieren Sie die Absorption bei 570 nm mit einem geeigneten Spektrophotometer. </li><li> Bestimmen Sie, Vernetzung Prozentsatz unter Verwendung der Formel unter 15 </li></ol></li></ol><img alt="Gleichung 1" src="/files/ftp_upload/53221/53221eq1.jpg" /> 7. MTS-Zellproliferationstest <ol><li> Wachsen MC3T3 (Maus Schädel Präosteoblasten) in Minimum Essential Medium Alpha-Modifikation (&amp; agr; MEM) in T-75-Kolben, bis ein 80% konfluenten Monolayer erhalten wird. </li><li> Bereiten Sie frische, sterile L-PRF-Membran (öffnen Sie den L-PRF Rohr im Inneren der Zellkulturhaube), und der Membran auf eine neue Zellkulturschale. </li><li> Saugen Sie Medien aus dem Kolben und spülen Sie die Monoschicht mit PBS, 5 ml 0,05% Trypsin und platzieren Sie den Kolben in der 37 ° C-Inkubator für 5 min, pipettieren Sie die Inhalte des Kolbens in ein Zentrifugenröhrchen und Zentrifuge bei 400 xg für 5 Minute </li><li> Den Überstand umfüllen, klopfen Sie leicht das Rohr, um das Zellpellet zu brechen und resuspendieren mit 4 ml frischem α MEM, verzichtet werden eine Mischung aus Zellsuspension (50 ul) und Trypanblau (50 ul) in die Zählkammer und zählen die Anzahl der Zellen </li><li> Samen 4x10 5 Zellen in 10 mm Glas Clonierungsringen auf der Oberseite der L-PRF-Membranen, um die Zellen innerhalb der Membranen behalten platziert (Ringe nach 24 Stunden entfernt werden). </li><li> Am Tag 4, spülen Konstrukte mit PBS dreimal für 10 min. </li><li> 1 ml serumfreiem Medium und 200 &amp; mgr; l MTS-Reagens in jede Vertiefung und Inkubation für 2 h bei 37 ° C. </li><li> Messen Sie die Absorption von 200 ul Aliquots bei 490 nm. </li></ol>

<ol>
	<li>Marx, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+plasma+Growth+factor+enhancement+for+bone+grafts.">Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85 (6), 638-646 (1998).</li><li>Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+plasma+in+bone+regeneration:+Engineering+the+delivery+for+improved+clinical+efficacy.">Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy.</a> BioMed Res In. 2014, (2014).</li><li>Del Corso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Knowledge+and+Perspectives+for+the+Use+of+Platelet-Rich+Plasma+(PRP)+and+Platelet-Rich+Fibrin+(PRF).">Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF).</a> in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13 (7), 1207-1230 (2012).</li><li>Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Not+every+PRP-gel+is+born+equal+Evaluation+of+growth+factor+availability+for+tissues+through+four+PRP-gel+preparations:+Fibrinet,+RegenPRP-Kit,+Plateltex+and+one+manual+procedure.">Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure.</a> Vox San. 97 (2), 110-118 (2009).</li><li>Fern&#225;ndez-Barbero, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+and+morphological+characterization+of+platelet-rich+plasma+gel.">Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel.</a> Clin Oral Implants Re. 17 (6), 687-693 (2006).</li><li>Li, Z., Guan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogels+for+cardiac+tissue+engineering.">Hydrogels for cardiac tissue engineering.</a> Polymer. 3 (2), 740-761 (2011).</li><li>Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+bricks-enriched+platelet-rich+plasma+gel+for+injectable+cartilage+engineering+&#8211;+an+in+vivo+experiment+in+nude+mice.">Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering &#8211; an in vivo experiment in nude mice.</a> J Tissue Eng Regen Med. 7 (10), 819-830 (2013).</li><li>Dohan, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+I:+technological+concepts+and+evolution.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e37-e44 (2006).</li><li>Dohan, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+II:+platelet-related+biologic+features.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e45-e50 (2006).</li><li>Choukroun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+V:+histologic+evaluations+of+PRF+effects+on+bone+allograft+maturation+in+sinus+lift.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), 299-303 (2006).</li><li>Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+the+Fibrin+Architecture+and+Leukocyte+Content+Influence+the+Growth+Factor+Release+of+Platelet+Concentrates?+An+Evidence-based+Answer+Comparing+a+Pure+Platelet-Rich+Plasma+(P-PRP)+Gel+and+a+Leukocyte-+and+Platelet-Rich+Fibrin+(L-PRF).">Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF).</a> Curr Pharma Biotechno. 13 (7), 1145-1152 (2012).</li><li>Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+of+platelet+concentrates:+from+pure+platelet-rich+plasma+(P-PRP)+to+leucocyte-+and+platelet-rich+fibrin+(L-PRF).">Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF).</a> Trends Biotechno. 27 (3), 158-167 (2009).</li><li>Mine, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suture+Retention+Strength+of+Expanded+Polytetrafluoroethylene+(ePTFE)+Graft.">Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft.</a> Acta Med Okayam. 64 (2), 121-128 (2010).</li><li>Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drying+cells+for+SEM+,+AFM+and+TEM+by+hexamethyldisilazane:+a+study+on+hepatic+endothelial+cells.">Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells.</a> J Micros. 186 (1), 84-87 (1997).</li><li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cross-linking+of+chitosan+microspheres+with+genipin+on+protein+release.">The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release.</a> Carbohydr Poly. 68 (3), 561-567 (2007).</li><li>Sell, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-linking+methods+of+electrospun+fibrinogen+scaffolds+for+tissue+engineering+applications.">Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications.</a> Biomed Mater. 3 (4), (2008).</li><li>Gorczyca, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+characterization+of+genipin+cross-linked+porous+chitosan-collagen-gelatin+scaffolds+using+chitosan-CO2+solution.">Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution.</a> Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).</li><li>Rozman, P., Semenic, D., Wislet-Gendebien, S. a. b. i. n. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+15.+The+Role+of+Platelet+Gel+in+Regenerative+Medicine.">Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine.</a> Advances In Regenerative Medicine. , 319-349 (2011).</li><li>Dohan Ehrenfest, ., Lemo, D. M., Jimbo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selecting+a+relevant+animal+model+for+testing+the+in+vivo+effects+of+Choukroun&#8217;s+platelet-rich+fibrin+(PRF):+Rabbit+tricks+and+traps.">Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun&#8217;s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110 (4), 413-416 (2010).</li><li>Guilak, F., Baaijens, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+tissue+engineering:+Ten+more+years+of+progress.">Functional tissue engineering: Ten more years of progress.</a> J Biomec. 47 (9), 1931-1932 (2014).</li><li>Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanics+and+mechanobiology+in+functional+tissue+engineering.">Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering.</a> J Biomec. 47 (9), 1933-1940 (2014).</li><li>Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+elasticity+of+an+individual+fibrin+fiber+in+a+clot.">The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot.</a> Proc Natl Acad Sci. 102 (26), 9133-9137 (2005).</li><li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+fibers+have+extraordinary+extensibility+and+elasticity.">Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity.</a> Science. 313 (5787), 634 (2006).</li><li>American National Standard. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+8:+Test+methods+for+vascular+prostheses.">Chapter 8: Test methods for vascular prostheses.</a> Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. , 33-34 (2001).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren und zu bestätigen, dass es keine bekannten Interessenkonflikte mit dieser Publikation verbunden.

Autologe Thrombozytenkonzentrate sind auf dem Gebiet der regenerativen Medizin 18 verspricht wegen der Fülle von Wachstumsfaktoren. Allerdings sind diese Präparate oft fehlte eine definierte Struktur, die chirurgische Manipulation sehr schwierig macht. Oft werden die Suspensionen und Gele werden nicht effektiv an der Stelle der Abgabe zurückgehalten wird, was zu unvorhersagbaren Ergebnissen. L-PRF stellt einen großen Fortschritt bei der Entwicklung von Blutplättchenkonzentraten, dass es im Wesentlichen e...

The use of blood and blood-derived products to seal wounds and improve healing in different clinical situations started with fibrin glues, which are mainly fibrinogen concentrates. Addition of platelets to fibrin glue not only improved their strength but also promoted neoangiogenesis and regeneration. These benefits are attributed to the release of a variety of peptide growth factors from the alpha-granules of platelets upon activation1. Platelet concentrates (PC) were seen as a practical way to deliver growth factors2 and its use was driven by commercial interests rather than research characterization3. In fact, PCs are difficult to characterize unlike homogenous and defined pharmacological preparations, they are a potpourri of signaling molecules and blood cells (platelet and leukocytes) entrapped within a fibrin matrix. Different commercial and proprietary preparations yield a variety of PC that are different in cellular composition, growth factor recovery and kinetics of release4. 
It is important to realize that in most oral surgeries, platelet-rich plasma (PRP) preparations are used as a gel in open surgical wounds and not as platelet suspensions. In these situations, the gelation is induced by the addition of thrombin, calcium chloride, batroxobin or other agents and directly placed in the site of injury5. Due to rapid activation, fibrinogen polymerization is often incomplete and results in friable fibrin gels with very little mechanical strength. In addition, injectable PRP gels undergo rapid fibrinolysis6,7.
In contrast, the processes of blood coagulation (fibrinogen polymerization), platelet enrichment and activation occur simultaneously in the preparation of L-PRF8. The coagulation cascade is triggered when whole blood contacts the walls of a dry glass tube and continues throughout the centrifugation process. This results in the formation of a mechanically-strong blood clot (L-PRF) that can be surgically handled and used. 
Even though L-PRF has been investigated in terms of optimal methods of preparation, growth factor release and cell distribution9-11, detailed mechanical characterization of these membranes are lacking. This is significant gap in knowledge, given the popularity of these membranes in clinical practice as well as its potential to be used as a biomaterial. Current study focusses on the protocol for deriving L-PRF as well as methods that can be employed to study its mechanical properties. This data is intended to serve as baseline for ongoing studies investigating the viscoelastic properties of this interesting natural biomaterial.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Needle 19G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Disposal Container</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-827-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red-Topped Glass Collection Tube</td>
			<td>BD</td>
			<td>8020129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Pads</td>
			<td>Tyco</td>
			<td>5750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandage</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>5005989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surshield</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SV*S19BL</td>
			<td>Safety winged infusion set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Collection Assembly</td>
			<td>BD</td>
			<td>303380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tourniquets</td>
			<td>BD</td>
			<td>367203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brand Luer Adapter</td>
			<td>Vacutainer</td>
			<td>L42179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intra-Spin System&#160;</td>
			<td>Intra-Lock International</td>
			<td>ISS110</td>
			<td>Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes (Serological &#38; Micro)</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Exelint</td>
			<td>29552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Bionix 200</td>
			<td>MTS Systems Corporation</td>
			<td></td>
			<td>Material testing systems</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Test Works 4</td>
			<td>MTS Systems Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman Filter Paper</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>1004 070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SS Orthodontic ligature wire</td>
			<td>Patterson Dental</td>
			<td>628-4228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 Proof Ethanol</td>
			<td>Koptec</td>
			<td>V1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane (HMDS)</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>440191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium Mounting Stubs</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>16324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Sided Carbon Tape</td>
			<td>PELCO Tabs</td>
			<td>16084-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>LV 5610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc</td>
			<td>51026282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimicotic</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genipin</td>
			<td>Wako</td>
			<td>078-03021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12000-022</td>
			<td>Minimum Essential Medium-Alpha</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G1118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMS Reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td>Epoch Spectrophotometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mm Glass Cloning Rings</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3166-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 Flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>55-031-PB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ninhydrin 98%</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>454044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3987</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy Punch</td>
			<td>Acu Punch</td>
			<td>P1025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Micrometer</td>
			<td>Pittsburgh</td>
			<td>68305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G6257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3336</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3596</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of leukocyte-platelet rich fibrin, a novel biomaterial

Autologous platelet concentrates represent promising innovative tools in the field of regenerative medicine and have been extensively used in oral surgery. Unlike platelet rich plasma (PRP) that is a gel or a suspension, Leukocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) is a solid 3D fibrin membrane generated chair-side from whole blood containing no anti-coagulant. The membrane has a dense three dimensional fibrin matrix with enriched platelets and abundant growth factors. L-PRF is a popular adjunct in surgeries because of its superior handling characteristics as well as its suturability to the wound bed. The goal of the study is to demonstrate generation as well as provide detailed characterization of relevant properties of L-PRF that underlie its clinical success.

Die rasterelektronenmikroskopische Aufnahme der L-PRF Gerinnsels an verschiedenen Abschnitten (oben, Mitte und unten), wird die Schicht in 2 dargestellt. Wie man sehen kann, ist der obere Teil überwiegend aus Fibrinnetzwerk ohne Zellen besteht. Die mittlere Schicht ist mit Plättchen mit Nachweis ihrer Aktivierung und Degranulation bereichert. Die untere Schicht hat eine Mischung von Leukozyten und Erythrozyten in einem Fibrin-Matrix eingeschlossen. Uniaxialen Zugversuch un...

Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial at JoVE.com

Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial

Leucocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) represents an FDA cleared preparation of autologous platelet concentrates that possesses unique fibrin architecture, enriched platelets and abundant growth factors. Here, we present a protocol for chair-side generation of L-PRF as well as evaluate its mechanical properties including uniaxial testing and suture retention strength testing.

Charakterisierung von Leukozyten-Thrombozyten-Rich-Fibrin, ein neuartiges Biomaterial

Autologous platelet concentrates represent promising innovative tools in the field of regenerative medicine and have been extensively used in oral ...

characterization-of-leukocyte-platelet-rich-fibrin-a-novel-biomaterial

Research

JoVE Journal

Bioengineering

12.8K Aufrufe.  School of Dentistry, Virginia Commonwealth University. Leucocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) represents an FDA cleared preparation of autologous platelet concentrates that possesses unique fibrin architecture, enriched platelets and abundant growth factors. Here, we present a protocol for chair-side generation of L-PRF as well as evaluate its mechanical properties including uniaxial testing and suture retention strength testing. 