The project was supported by CTSA (UL1TR000058) from the National Center for Advancing Translational Sciences) and the CCTR Endowment Fund of Virginia Commonwealth University. The contents are solely the responsibility of the authors and do not necessarily represent official views of the National Center for Advancing Translational Sciences or the National Institutes of Health.

Todos os procedimentos sangue-desenho deve ser feito por profissionais licenciados e certificados. Uso de seres humanos para a pesquisa envolve a aprovação do Conselho de Revisão Institucional ou outra autoridade. Precauções especiais relativas consentimento informado e proteção de identificação do participante precisa ser seguido. Todos os experimentos listados neste protocolo impliquem a manipulação do sangue humano e / ou produtos derivados do sangue e equipamento de protecção individual adequado precisa ser usado em todos os momentos. Os resíduos devem ser consideradas como de risco biológico e eliminados de acordo com os regulamentos. 1. Venipuntura <ol><li> Identificar o paciente / participante e confirme com registros existentes. Explique o estudo em detalhe e para obter um consentimento informado. </li><li> Ter uma bandeja configurada para cada paciente com tubos marcados em uma superfície plana estável. </li><li> Explique o processo e fazer o assento paciente confortavelmente com o braço apoiado. Informar o paciente que ele ou she vai se sentir uma pequena pitada e deve ainda permanecem durante todo o procedimento. </li><li> Coloque a agulha para o adaptador. </li><li> Lavar as mãos e usar luvas. </li><li> Prepare a fossa antecubital para punção venosa com a limpeza com 70% de álcool isopropílico em círculos concêntricos do centro para fora. Permitir que o site para o ar seco por 30 s. </li><li> Identifique a veia adequada por palpação. </li><li> Aplique o torniquete 3-4 em cima do local da punção certificando-se de que não é muito apertado (enquanto ainda sentir o pulso radial). </li><li> Realize a punção venosa pela inserção do bisel da agulha 15-30 graus para a pele em um movimento suave. Empurrar o tubo de recolha de sangue através da agulha e recolher 9 ml de sangue total. </li><li> Remover o torniquete. Remover o tubo da agulha. </li><li> Retire a agulha e aplicar o quadrado de gaze no local da punção antes da remoção da agulha. Descarte a agulha em um recipiente adequado de risco biológico. </li><li> Perguntar ao paciente para manter a prEssure no local da punção. </li><li> Rotular os tubos </li><li> Verifique o local da punção para ter certeza de sangramento parou. </li><li> Aplicar curativo adesivo ou fita adesiva sobre o quadrado de gaze, pergunte se o paciente está se sentindo bem (sem dor, inchaço ou tonturas) </li><li> Obrigado o paciente / participante antes da descarga. </li></ol> 2. Preparação de L-PRF <ol><li> Imediatamente após a coleta do sangue venoso em tubo de vidro seco vermelho-coberto, coloque-o na centrífuga. </li><li> Centrifugar a 400 xg durante 12 min à temperatura ambiente após a colocação de um contrapeso adequado. </li><li> Remover o tubo no final do ciclo. Observe a três camadas: o plasma pobre em plaquetas (PPP), fibrina rico em plaquetas (PRF-G) e base de RBC (Figura 1). </li><li> Aspirar o PPP, utilizando uma pipeta. Usando uma pinça puxe a L-PRF para fora e coloque-a em uma malha de metal perfurado estéril. </li><li> Usando bisturi cirúrgico, raspar a maior parte da camada RBC deixando cuidadosamente o lustrey casaco intacto. </li><li> Gentilmente comprimir o coágulo L-PRF (usando a placa de metal estéril, peso aproximado de 225 g) durante 30 segundos. Plasma pobre em plaquetas será espremido para fora. </li><li> Retirar a placa e levante com cuidado a membrana L-PRF. A membrana L-PRF está pronto para uso em experimentos 12. </li></ol> 3. Uniaxial ensaio de tração <ol><li> Coloque membranas L-PRF (n = 6) em um papel de filtro para facilitar o manuseio e soco em &quot;ossos de cão&quot; usando custom-made de metal morre (2,75 mm de largura em seu ponto mais estreito, com um comprimento de calibre de 7,5 mm). </li><li> Medir a espessura de cada amostra a três pontos e tirar a média. </li><li> Envolver a membrana cuidadosamente L-PRF no centro dos apertos de maxilas do sistema de teste uniaxial. </li><li> Retire com cuidado o suporte de papel filer para expor a membrana L-PRF. </li><li> Programa do instrumento para que a cabeça móvel está a funcionar a uma velocidade constante (10.0 mm / min) e iniciar a experiência quando a L-PRF ainda está molhado. </li><li> Grave o módulo de elasticidade, energia para quebrar, e tensão na ruptura do software que acompanha o sistema de teste uniaxial. Estes valores são calculados automaticamente e nenhuma entrada definido pelo usuário é necessária. Por favor, consulte a Figura 3. </li></ol> 4. Sutura de retenção da resistência <ol><li> Coloque membranas de G-PRF (n = 3), sobre um papel de filtro para facilidade de manuseamento e corte em amostras rectangulares medindo 10 mm x (25 mm) utilizando um bisturi cirúrgico. </li><li> Medir a espessura de cada amostra (média de 3). </li><li> Adicione um orifício no centro da amostra, utilizando o arame de aço inoxidável ligadura ortodôntico (220 um de diâmetro). </li><li> Passe o fio através da ligadura pinhole para formar um laço e prenda-a na máquina de ensaio de tração. Coloque a borda da membrana L-PRF para o aperto de mandíbula inferior 13. </li><li> Programar o instrumento para que a cabeça móvel está a funcionar a uma taxa constante (10 mm / min) e de inícioo experimento. </li><li> Grave o módulo de elasticidade, energia para quebrar, e tensão na ruptura do software que acompanha o sistema de teste uniaxial. Estes valores são calculados automaticamente e nenhuma entrada definido pelo usuário é necessária. Por favor, consulte a Figura 3. </li></ol> 5. O exame morfológico <ol><li> Prepare as amostras G-PRF para exame SEM usando um 10 milímetros biópsia cutânea soco e colocá-los em uma placa de 24 poços. </li><li> Lavam-se as amostras com PBS e fixar com glutaraldeído a 2,5% (em PBS) durante 20 min. </li><li> Desidratar as amostras por imersão em concentrações sequencialmente crescente de etanol (50%, 70%, 80%, 90% e 100%) durante 5 minutos cada. </li><li> Trata-se com 0,5 ml de 100% de HMDS (hexametildisilazano) durante 5 min. Arejar O / N para remover o excesso de HMDS 14. </li><li> Amostras montar em tocos usando uma fita dupla face, por pulverização catódica-coat de platina por 70 seg e examinar em um microscópio eletrônico de varredura a funcionar a uma aceleraçãoperação tensão de 20 kV (ou contexto adequado). </li></ol> 6. genipina reticulação de L-PRF, tripsina e ninidrina Ensaio de Susceptibilidade <ol><li> Para preparar a genipina reticulado L-PRF, enxaguar as membranas com PBS e embeber em 4 ml de solução de genipina 1% (em etanol a 70%) durante 48 horas. Lavar com PBS antes de experimentos para remover o excesso de genipina 15, 16. </li><li> Avaliar a estabilidade de reticulação genipina de L-PRF pela sua resistência à degradação pela tripsina. Ponto de L-PRF membrana (n = 3) e genipina reticulado L-PRF em 500 mL de 0,01% de tripsina e incubaram-se a 37 ° C durante 3 dias com uma mudança diária de tripsina. <ol><li> Pesar amostras no dia 1 antes da enzima exposição e no dia 3. A diferença de peso inicial e final representa uma degradação enzimática 17. </li></ol></li><li> Quantificar a quantidade de ligação cruzada em genipina tratada PRF-G (G-PRF) por ensaio de ninidrina. Primeiro prepare a curv padrãoe utilizando glicina (1 mM mM-0,031) curva para estabelecer a relação entre a concentração de amino ácido livre (FAA) e absorção. <ol><li> Calor PRF amostras com 1 mL de 2% (w / v) de ninidrina durante 15 min a 100 ° C. </li><li> Deixar a solução arrefecer até à TA e adicionar 1,5 ml de etanol a 50%. </li><li> Analisar a absorvância a 570 nm utilizando um espectrofotómetro adequado. </li><li> Determinar percentagem de reticulação usando a fórmula que se segue 15 </li></ol></li></ol><img alt="Equação 1" src="/files/ftp_upload/53221/53221eq1.jpg" /> 7. Ensaio de Proliferação de Células MTS <ol><li> Cresça MC3T3 (rato preosteoblasts calvárias) em Minimum Essential Medium modificação -alfa (aMEM) em frascos T-75 até uma monocamada confluente a 80% é obtido. </li><li> Prepare fresca, estéril membrana L-PRF (abrir o tubo de L-PRF no interior da capa de cultura de células) e transferir a membrana em uma nova cultura de células prato. </li><li> Meios aspirado a partir do balão e enxaguar a monocamada com PBS, adicionar 5 ml de tripsina a 0,05% e colocar o balão no 37 o C incubadora durante 5 min, pipetar o conteúdo do balão para um tubo de centrífuga e centrifugar a 400 xg durante 5 min. </li><li> Decantar o sobrenadante, bata suavemente o tubo para quebrar o aglomerado de células e suspender novamente com 4 ml de MEM α fresco, dispensar uma mistura de suspensão de células (50 uL) e azul de tripano (50 ul) na hemocitómetro e contar o número de células </li><li> Semente de 4x10 5 células de 10 mm anéis de clonagem de vidro colocados no topo de membranas de G-PRF para reter as células dentro das membranas (anéis pode ser removido após 24 h). </li><li> No dia 4, lavar três vezes com PBS construções durante 10 min. </li><li> Adicionar 1 ml de meio isento de soro e 200 ul de reagente MTS a cada poço e incubar durante 2 horas a 37 ° C. </li><li> Medir a absorvância a partir de alíquotas de 200 ul a 490 nm. </li></ol>

<ol>
	<li>Marx, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+plasma+Growth+factor+enhancement+for+bone+grafts.">Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85 (6), 638-646 (1998).</li><li>Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+plasma+in+bone+regeneration:+Engineering+the+delivery+for+improved+clinical+efficacy.">Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy.</a> BioMed Res In. 2014, (2014).</li><li>Del Corso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Knowledge+and+Perspectives+for+the+Use+of+Platelet-Rich+Plasma+(PRP)+and+Platelet-Rich+Fibrin+(PRF).">Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF).</a> in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13 (7), 1207-1230 (2012).</li><li>Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Not+every+PRP-gel+is+born+equal+Evaluation+of+growth+factor+availability+for+tissues+through+four+PRP-gel+preparations:+Fibrinet,+RegenPRP-Kit,+Plateltex+and+one+manual+procedure.">Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure.</a> Vox San. 97 (2), 110-118 (2009).</li><li>Fern&#225;ndez-Barbero, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+and+morphological+characterization+of+platelet-rich+plasma+gel.">Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel.</a> Clin Oral Implants Re. 17 (6), 687-693 (2006).</li><li>Li, Z., Guan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogels+for+cardiac+tissue+engineering.">Hydrogels for cardiac tissue engineering.</a> Polymer. 3 (2), 740-761 (2011).</li><li>Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+bricks-enriched+platelet-rich+plasma+gel+for+injectable+cartilage+engineering+&#8211;+an+in+vivo+experiment+in+nude+mice.">Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering &#8211; an in vivo experiment in nude mice.</a> J Tissue Eng Regen Med. 7 (10), 819-830 (2013).</li><li>Dohan, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+I:+technological+concepts+and+evolution.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e37-e44 (2006).</li><li>Dohan, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+II:+platelet-related+biologic+features.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e45-e50 (2006).</li><li>Choukroun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+V:+histologic+evaluations+of+PRF+effects+on+bone+allograft+maturation+in+sinus+lift.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), 299-303 (2006).</li><li>Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+the+Fibrin+Architecture+and+Leukocyte+Content+Influence+the+Growth+Factor+Release+of+Platelet+Concentrates?+An+Evidence-based+Answer+Comparing+a+Pure+Platelet-Rich+Plasma+(P-PRP)+Gel+and+a+Leukocyte-+and+Platelet-Rich+Fibrin+(L-PRF).">Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF).</a> Curr Pharma Biotechno. 13 (7), 1145-1152 (2012).</li><li>Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+of+platelet+concentrates:+from+pure+platelet-rich+plasma+(P-PRP)+to+leucocyte-+and+platelet-rich+fibrin+(L-PRF).">Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF).</a> Trends Biotechno. 27 (3), 158-167 (2009).</li><li>Mine, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suture+Retention+Strength+of+Expanded+Polytetrafluoroethylene+(ePTFE)+Graft.">Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft.</a> Acta Med Okayam. 64 (2), 121-128 (2010).</li><li>Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drying+cells+for+SEM+,+AFM+and+TEM+by+hexamethyldisilazane:+a+study+on+hepatic+endothelial+cells.">Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells.</a> J Micros. 186 (1), 84-87 (1997).</li><li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cross-linking+of+chitosan+microspheres+with+genipin+on+protein+release.">The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release.</a> Carbohydr Poly. 68 (3), 561-567 (2007).</li><li>Sell, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-linking+methods+of+electrospun+fibrinogen+scaffolds+for+tissue+engineering+applications.">Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications.</a> Biomed Mater. 3 (4), (2008).</li><li>Gorczyca, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+characterization+of+genipin+cross-linked+porous+chitosan-collagen-gelatin+scaffolds+using+chitosan-CO2+solution.">Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution.</a> Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).</li><li>Rozman, P., Semenic, D., Wislet-Gendebien, S. a. b. i. n. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+15.+The+Role+of+Platelet+Gel+in+Regenerative+Medicine.">Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine.</a> Advances In Regenerative Medicine. , 319-349 (2011).</li><li>Dohan Ehrenfest, ., Lemo, D. M., Jimbo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selecting+a+relevant+animal+model+for+testing+the+in+vivo+effects+of+Choukroun&#8217;s+platelet-rich+fibrin+(PRF):+Rabbit+tricks+and+traps.">Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun&#8217;s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110 (4), 413-416 (2010).</li><li>Guilak, F., Baaijens, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+tissue+engineering:+Ten+more+years+of+progress.">Functional tissue engineering: Ten more years of progress.</a> J Biomec. 47 (9), 1931-1932 (2014).</li><li>Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanics+and+mechanobiology+in+functional+tissue+engineering.">Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering.</a> J Biomec. 47 (9), 1933-1940 (2014).</li><li>Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+elasticity+of+an+individual+fibrin+fiber+in+a+clot.">The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot.</a> Proc Natl Acad Sci. 102 (26), 9133-9137 (2005).</li><li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+fibers+have+extraordinary+extensibility+and+elasticity.">Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity.</a> Science. 313 (5787), 634 (2006).</li><li>American National Standard. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+8:+Test+methods+for+vascular+prostheses.">Chapter 8: Test methods for vascular prostheses.</a> Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. , 33-34 (2001).</li></ol>

Os autores não têm nada a revelar e confirmar que não há conflitos de interesse associados conhecidos com esta publicação.

Os concentrados de plaquetas autólogas são promissores no campo da medicina regenerativa 18 devido à abundância de factores de crescimento. No entanto, estas preparações não dispunham de uma estrutura definida que torna muito difícil a manipulação cirúrgica. Muitas vezes, as suspensões e géis não são retidos de forma eficaz no local de entrega, o que resulta em resultados imprevisíveis. PRF-L representa um grande avanço na evolução de concentrados de plaquetas na medida em que é, essencial...

The use of blood and blood-derived products to seal wounds and improve healing in different clinical situations started with fibrin glues, which are mainly fibrinogen concentrates. Addition of platelets to fibrin glue not only improved their strength but also promoted neoangiogenesis and regeneration. These benefits are attributed to the release of a variety of peptide growth factors from the alpha-granules of platelets upon activation1. Platelet concentrates (PC) were seen as a practical way to deliver growth factors2 and its use was driven by commercial interests rather than research characterization3. In fact, PCs are difficult to characterize unlike homogenous and defined pharmacological preparations, they are a potpourri of signaling molecules and blood cells (platelet and leukocytes) entrapped within a fibrin matrix. Different commercial and proprietary preparations yield a variety of PC that are different in cellular composition, growth factor recovery and kinetics of release4. 
It is important to realize that in most oral surgeries, platelet-rich plasma (PRP) preparations are used as a gel in open surgical wounds and not as platelet suspensions. In these situations, the gelation is induced by the addition of thrombin, calcium chloride, batroxobin or other agents and directly placed in the site of injury5. Due to rapid activation, fibrinogen polymerization is often incomplete and results in friable fibrin gels with very little mechanical strength. In addition, injectable PRP gels undergo rapid fibrinolysis6,7.
In contrast, the processes of blood coagulation (fibrinogen polymerization), platelet enrichment and activation occur simultaneously in the preparation of L-PRF8. The coagulation cascade is triggered when whole blood contacts the walls of a dry glass tube and continues throughout the centrifugation process. This results in the formation of a mechanically-strong blood clot (L-PRF) that can be surgically handled and used. 
Even though L-PRF has been investigated in terms of optimal methods of preparation, growth factor release and cell distribution9-11, detailed mechanical characterization of these membranes are lacking. This is significant gap in knowledge, given the popularity of these membranes in clinical practice as well as its potential to be used as a biomaterial. Current study focusses on the protocol for deriving L-PRF as well as methods that can be employed to study its mechanical properties. This data is intended to serve as baseline for ongoing studies investigating the viscoelastic properties of this interesting natural biomaterial.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Needle 19G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Disposal Container</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-827-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red-Topped Glass Collection Tube</td>
			<td>BD</td>
			<td>8020129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Pads</td>
			<td>Tyco</td>
			<td>5750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandage</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>5005989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surshield</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SV*S19BL</td>
			<td>Safety winged infusion set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Collection Assembly</td>
			<td>BD</td>
			<td>303380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tourniquets</td>
			<td>BD</td>
			<td>367203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brand Luer Adapter</td>
			<td>Vacutainer</td>
			<td>L42179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intra-Spin System&#160;</td>
			<td>Intra-Lock International</td>
			<td>ISS110</td>
			<td>Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes (Serological &#38; Micro)</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Exelint</td>
			<td>29552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Bionix 200</td>
			<td>MTS Systems Corporation</td>
			<td></td>
			<td>Material testing systems</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Test Works 4</td>
			<td>MTS Systems Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman Filter Paper</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>1004 070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SS Orthodontic ligature wire</td>
			<td>Patterson Dental</td>
			<td>628-4228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 Proof Ethanol</td>
			<td>Koptec</td>
			<td>V1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane (HMDS)</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>440191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium Mounting Stubs</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>16324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Sided Carbon Tape</td>
			<td>PELCO Tabs</td>
			<td>16084-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>LV 5610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc</td>
			<td>51026282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimicotic</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genipin</td>
			<td>Wako</td>
			<td>078-03021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12000-022</td>
			<td>Minimum Essential Medium-Alpha</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G1118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMS Reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td>Epoch Spectrophotometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mm Glass Cloning Rings</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3166-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 Flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>55-031-PB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ninhydrin 98%</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>454044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3987</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy Punch</td>
			<td>Acu Punch</td>
			<td>P1025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Micrometer</td>
			<td>Pittsburgh</td>
			<td>68305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G6257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3336</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3596</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of leukocyte-platelet rich fibrin, a novel biomaterial

Autologous platelet concentrates represent promising innovative tools in the field of regenerative medicine and have been extensively used in oral surgery. Unlike platelet rich plasma (PRP) that is a gel or a suspension, Leukocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) is a solid 3D fibrin membrane generated chair-side from whole blood containing no anti-coagulant. The membrane has a dense three dimensional fibrin matrix with enriched platelets and abundant growth factors. L-PRF is a popular adjunct in surgeries because of its superior handling characteristics as well as its suturability to the wound bed. The goal of the study is to demonstrate generation as well as provide detailed characterization of relevant properties of L-PRF that underlie its clinical success.

A imagem do microscópio electrónico de varrimento do coágulo L-PRF em diferentes secções (topo, meio e fundo) camada é ilustrado na Figura 2. Como pode ser observado, a porção de topo é composta predominantemente de rede de fibrina sem células. A camada do meio é enriquecido com plaquetas com evidência de activação e desgranulação sua. A camada inferior tem uma mistura de leucócitos e de células de sangue vermelhas aprisionadas dentro de uma matriz de fibrina. <p c...

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Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial

Leucocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) represents an FDA cleared preparation of autologous platelet concentrates that possesses unique fibrin architecture, enriched platelets and abundant growth factors. Here, we present a protocol for chair-side generation of L-PRF as well as evaluate its mechanical properties including uniaxial testing and suture retention strength testing.

Caracterização de leucócito-rico em plaquetas de fibrina, A Novel Biomaterial

Autologous platelet concentrates represent promising innovative tools in the field of regenerative medicine and have been extensively used in oral ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

12.8K visualizações.  School of Dentistry, Virginia Commonwealth University. Leucocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) represents an FDA cleared preparation of autologous platelet concentrates that possesses unique fibrin architecture, enriched platelets and abundant growth factors. Here, we present a protocol for chair-side generation of L-PRF as well as evaluate its mechanical properties including uniaxial testing and suture retention strength testing. 