The project was supported by CTSA (UL1TR000058) from the National Center for Advancing Translational Sciences) and the CCTR Endowment Fund of Virginia Commonwealth University. The contents are solely the responsibility of the authors and do not necessarily represent official views of the National Center for Advancing Translational Sciences or the National Institutes of Health.

Tutte le procedure di sangue disegno devono essere effettuate da professionisti abilitati e certificati. L&#39;utilizzo di soggetti umani per la ricerca riguarda l&#39;approvazione del Institutional Review Board o altra autorità. Precauzioni particolari per quanto riguarda il consenso informato e che proteggono l&#39;identificazione dei partecipanti devono essere seguite. Tutti gli esperimenti elencati in questo protocollo riguardano la manipolazione del sangue umano e / o di prodotti ematici e dispositivi di protezione adeguati devono essere indossati in ogni momento. I rifiuti dovrebbe essere considerata come rischio biologico e smaltiti secondo le norme. 1. venipuntura <ol><li> Identificare il paziente / partecipante e confermare con i record esistenti. Spiega lo studio in dettaglio e ottenere un consenso informato. </li><li> Avere un vassoio impostato per singolo paziente con i tubi marcati su una superficie piana e stabile. </li><li> Spiegare la procedura e rendere la seduta paziente comodamente con il braccio appoggiato. Informare il paziente che lui o she si sentirà una piccola presa e dovrebbe rimanere ancora tutta la procedura. </li><li> Attaccare l&#39;ago per l&#39;adattatore. </li><li> Lavarsi le mani e indossare guanti. </li><li> Preparare la fossa antecubitale per venipuntura pulendo con il 70% di alcool isopropilico in cerchi concentrici dal centro verso l&#39;esterno. Consentire al sito asciugare per 30 sec. </li><li> Identificare la vena appropriata con la palpazione. </li><li> Applicare il laccio emostatico 3-4 sopra il sito della puntura fare in modo che non sia troppo stretto (mentre ancora sentire il polso radiale). </li><li> Eseguire la puntura venosa inserendo la smussatura dell&#39;ago 15-30 gradi per la pelle in un unico movimento fluido. Spingere il tubo di raccolta del sangue attraverso l&#39;ago e raccogliere 9 ml di sangue intero. </li><li> Rimuovere il laccio emostatico. Rimuovere il tubo dall&#39;ago. </li><li> Ritirare l&#39;ago ed applicare la piazza garza presso il sito di puntura prima della rimozione dell&#39;ago. Smaltire l&#39;ago in un contenitore adeguato a rischio biologico. </li><li> Chiedi paziente di mantenere la pressure presso il sito di puntura. </li><li> Etichettare i tubi </li><li> Controllare il sito di puntura per essere sicuri che il sanguinamento si è fermato. </li><li> Applicare bendaggio adesivo o nastro sulla piazza garza, chiedere se il paziente si sente bene (nessun dolore, gonfiore o testa leggera) </li><li> Grazie al paziente / partecipante prima della dimissione. </li></ol> 2. L-PRF Preparazione <ol><li> Subito dopo la raccolta di sangue venoso nel tubo di vetro rosso secco ripiano, inserirlo nella centrifuga. </li><li> Centrifugare a 400 xg per 12 minuti a temperatura ambiente dopo aver piazzato un contrappeso adeguato. </li><li> Rimuovere il tubo al termine del ciclo. Notare la tre strati: povero di piastrine plasma (PPP), ricco di piastrine di fibrina (L-PRF) e base RBC (Figura 1). </li><li> Aspirare il PPP con una pipetta. Con una pinzetta tirare delicatamente la L-PRF fuori e metterlo in una, rete metallica perforata sterile. </li><li> Utilizzando bisturi chirurgico, raschiare la maggior parte di RBC strato lasciando cura il buffy cappotto intatto. </li><li> Comprimere delicatamente il coagulo L-PRF (usando la piastra metallica sterili, peso approssimativo 225 g) per 30 sec. Plasma povero di piastrine sarà spremuto fuori. </li><li> Rimuovere la piastra e sollevare delicatamente la membrana L-PRF. La membrana L-PRF è pronto per l&#39;uso negli esperimenti 12. </li></ol> 3. uniassiale Prove di Trazione <ol><li> Luogo membrane L-PRF (n = 6) su una carta da filtro per facilità di trattamento e punzone in &quot;ossa di cane&quot; utilizzando metallo misura muore (2,75 mm di larghezza al loro punto più stretto con un tratto utile di 7,5 mm). </li><li> Misurare lo spessore di ciascun campione a tre punti e fare la media. </li><li> Impegnarsi con cautela la membrana L-PRF nel centro delle pinze a ganascia del sistema di prova uniassiale. </li><li> Strappare con attenzione il supporto della carta filer per esporre la membrana L-PRF. </li><li> Programmare lo strumento in modo che la testa mobile funziona ad una velocità costante (10.0 mm / min) e iniziare l&#39;esperimento quando il L-PRF è ancora bagnato. </li><li> Registrare il modulo elastico, energia per rompere, e deformazione a rottura del software che accompagna il sistema di prova monoassiale. Questi valori sono calcolati automaticamente e non è richiesta in ingresso definito dall&#39;utente. Si prega di vedere la figura 3. </li></ol> 4. sutura Retention Forza <ol><li> Posizionare membrane L-PRF (n = 3) su una carta da filtro per facilità di trattamento e tagliato in campioni rettangolari di misurazione (10 mm x 25 mm) utilizzando un bisturi chirurgico. </li><li> Misurare lo spessore di ciascun campione (media di 3). </li><li> Effettuare un foro nel centro del campione utilizzando il filo per legatura ortodontica dell&#39;acciaio inossidabile (220 micron di diametro). </li><li> Far passare il filo di legatura attraverso il foro stenopeico per formare un anello e fissarlo alla macchina per prove di trazione. Posizionare il bordo della membrana L-PRF all&#39;impugnatura mascella inferiore 13. </li><li> Programmare lo strumento in modo che la testa mobile funziona ad una velocità costante (10 mm / min) e iniziol&#39;esperimento. </li><li> Registrare il modulo elastico, energia per rompere, e deformazione a rottura del software che accompagna il sistema di prova monoassiale. Questi valori sono calcolati automaticamente e non è richiesta in ingresso definito dall&#39;utente. Si prega di vedere la figura 3. </li></ol> 5. Esame morfologica <ol><li> Preparare i campioni L-PRF per l&#39;esame SEM con un 10 millimetri cutanea biopsia e metterli in un 24-pozzetti. </li><li> Lavare i campioni con PBS e fissare con glutaraldeide al 2,5% (in PBS) per 20 min. </li><li> Disidratare i campioni di immersione in sequenza concentrazioni crescenti di etanolo (50%, 70%, 80%, 90% e 100%) per 5 minuti ciascuna. </li><li> Trattare con 0,5 ml di 100% HMDS (esametildisilazano) per 5 min. Aerare O / N per rimuovere l&#39;eccesso HMDS 14. </li><li> Campioni di montaggio su stub usando un nastro biadesivo, sputter-coat platino per 70 secondi ed esaminare in un microscopio elettronico a scansione che opera ad un accelerazioneTensione razione di 20 kV (o l&#39;impostazione appropriata). </li></ol> 6. genipina reticolazione di L-PRF, tripsina suscettibilità e Ninidrina Assay <ol><li> Per preparare genipina reticolato L-PRF, sciacquare membrane con PBS e immergersi in 4 ml di soluzione genipina 1% (in etanolo al 70%) per 48 ore. Risciacquare con PBS prima di esperimenti per rimuovere l&#39;eccesso genipina 15, 16. </li><li> Valutare la stabilità di reticolazione genipina di L-PRF dalla sua resistenza alla degradazione da tripsina. Membrana posto L-PRF (n = 3) e genipina reticolato L-PRF in 500 ml di 0,01% tripsina e incubate a 37 ° C per 3 giorni con cambio giornaliero di tripsina. <ol><li> Pesare i campioni al giorno 1 prima di enzima esposizione e al giorno 3. La differenza di inizio e fine il peso rappresenta degradazione enzimatica 17. </li></ol></li><li> Quantificare la quantità di reticolazione in genipina trattata L-PRF (G-PRF) di ninidrina dosaggio. Per prima cosa preparate la curv normae con glicina (1 mm 0,031 mM) curva per stabilire il rapporto tra la concentrazione di acido ammino libero (FAA) e l&#39;assorbanza. <ol><li> Campioni PRF calore con 1 ml di 2% (w / v) ninidrina per 15 min a 100 ° C. </li><li> Lasciare che la soluzione per raffreddare a RT e aggiungere 1,5 ml di etanolo al 50%. </li><li> Analizzare l&#39;assorbanza a 570 nm con uno spettrofotometro adeguato. </li><li> Determinare la percentuale di cross-linking utilizzando la formula sotto 15 </li></ol></li></ol><img alt="Equazione 1" src="/files/ftp_upload/53221/53221eq1.jpg" /> 7. MTS proliferazione cellulare Assay <ol><li> Grow MC3T3 (topo preosteoblasts cranica) in Essential Media -alfa modifica minima (αMEM) in T-75 flaconi fino ad ottenere un confluenti monostrato 80%. </li><li> Preparare fresco, sterile membrana L-PRF (aprire il tubo L-PRF all&#39;interno della cappa di coltura cellulare) e trasferire la membrana su un nuovo piatto di coltura cellulare. </li><li> Supporti Aspirare dal pallone e lavare il monostrato con PBS, aggiungere 5 ml di 0,05% tripsina e posizionare il pallone nella 37 ° C incubatore per 5 minuti, pipettare il contenuto del pallone in una provetta da centrifuga e centrifugare a 400 xg per 5 min. </li><li> Decantare il surnatante, toccare delicatamente il tubo per rompere il pellet e risospendere con 4 ml di α fresco MEM, erogare una miscela di sospensione cellulare (50 ml) e blu trypan (50 microlitri) nel emocitometro e contare il numero di cellule </li><li> Seed 4x10 5 cellule all&#39;interno di 10 mm anelli di clonazione vetro posti sulla parte superiore della membrana L-PRF per mantenere le cellule all&#39;interno delle membrane (anelli possono essere rimossi dopo 24 ore). </li><li> Al giorno 4, sciacquare costrutti con PBS tre volte per 10 minuti. </li><li> Aggiungere 1 ml di siero media liberi e 200 pl MTS reagente ad ogni pozzetto e incubare per 2 ore a 37 ° C. </li><li> Misurare l&#39;assorbanza da 200 microlitri aliquote a 490 nm. </li></ol>

<ol>
	<li>Marx, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+plasma+Growth+factor+enhancement+for+bone+grafts.">Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85 (6), 638-646 (1998).</li><li>Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+plasma+in+bone+regeneration:+Engineering+the+delivery+for+improved+clinical+efficacy.">Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy.</a> BioMed Res In. 2014, (2014).</li><li>Del Corso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Knowledge+and+Perspectives+for+the+Use+of+Platelet-Rich+Plasma+(PRP)+and+Platelet-Rich+Fibrin+(PRF).">Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF).</a> in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13 (7), 1207-1230 (2012).</li><li>Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Not+every+PRP-gel+is+born+equal+Evaluation+of+growth+factor+availability+for+tissues+through+four+PRP-gel+preparations:+Fibrinet,+RegenPRP-Kit,+Plateltex+and+one+manual+procedure.">Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure.</a> Vox San. 97 (2), 110-118 (2009).</li><li>Fern&#225;ndez-Barbero, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+and+morphological+characterization+of+platelet-rich+plasma+gel.">Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel.</a> Clin Oral Implants Re. 17 (6), 687-693 (2006).</li><li>Li, Z., Guan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogels+for+cardiac+tissue+engineering.">Hydrogels for cardiac tissue engineering.</a> Polymer. 3 (2), 740-761 (2011).</li><li>Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+bricks-enriched+platelet-rich+plasma+gel+for+injectable+cartilage+engineering+&#8211;+an+in+vivo+experiment+in+nude+mice.">Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering &#8211; an in vivo experiment in nude mice.</a> J Tissue Eng Regen Med. 7 (10), 819-830 (2013).</li><li>Dohan, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+I:+technological+concepts+and+evolution.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e37-e44 (2006).</li><li>Dohan, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+II:+platelet-related+biologic+features.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e45-e50 (2006).</li><li>Choukroun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+V:+histologic+evaluations+of+PRF+effects+on+bone+allograft+maturation+in+sinus+lift.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), 299-303 (2006).</li><li>Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+the+Fibrin+Architecture+and+Leukocyte+Content+Influence+the+Growth+Factor+Release+of+Platelet+Concentrates?+An+Evidence-based+Answer+Comparing+a+Pure+Platelet-Rich+Plasma+(P-PRP)+Gel+and+a+Leukocyte-+and+Platelet-Rich+Fibrin+(L-PRF).">Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF).</a> Curr Pharma Biotechno. 13 (7), 1145-1152 (2012).</li><li>Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+of+platelet+concentrates:+from+pure+platelet-rich+plasma+(P-PRP)+to+leucocyte-+and+platelet-rich+fibrin+(L-PRF).">Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF).</a> Trends Biotechno. 27 (3), 158-167 (2009).</li><li>Mine, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suture+Retention+Strength+of+Expanded+Polytetrafluoroethylene+(ePTFE)+Graft.">Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft.</a> Acta Med Okayam. 64 (2), 121-128 (2010).</li><li>Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drying+cells+for+SEM+,+AFM+and+TEM+by+hexamethyldisilazane:+a+study+on+hepatic+endothelial+cells.">Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells.</a> J Micros. 186 (1), 84-87 (1997).</li><li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cross-linking+of+chitosan+microspheres+with+genipin+on+protein+release.">The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release.</a> Carbohydr Poly. 68 (3), 561-567 (2007).</li><li>Sell, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-linking+methods+of+electrospun+fibrinogen+scaffolds+for+tissue+engineering+applications.">Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications.</a> Biomed Mater. 3 (4), (2008).</li><li>Gorczyca, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+characterization+of+genipin+cross-linked+porous+chitosan-collagen-gelatin+scaffolds+using+chitosan-CO2+solution.">Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution.</a> Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).</li><li>Rozman, P., Semenic, D., Wislet-Gendebien, S. a. b. i. n. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+15.+The+Role+of+Platelet+Gel+in+Regenerative+Medicine.">Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine.</a> Advances In Regenerative Medicine. , 319-349 (2011).</li><li>Dohan Ehrenfest, ., Lemo, D. M., Jimbo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selecting+a+relevant+animal+model+for+testing+the+in+vivo+effects+of+Choukroun&#8217;s+platelet-rich+fibrin+(PRF):+Rabbit+tricks+and+traps.">Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun&#8217;s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110 (4), 413-416 (2010).</li><li>Guilak, F., Baaijens, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+tissue+engineering:+Ten+more+years+of+progress.">Functional tissue engineering: Ten more years of progress.</a> J Biomec. 47 (9), 1931-1932 (2014).</li><li>Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanics+and+mechanobiology+in+functional+tissue+engineering.">Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering.</a> J Biomec. 47 (9), 1933-1940 (2014).</li><li>Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+elasticity+of+an+individual+fibrin+fiber+in+a+clot.">The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot.</a> Proc Natl Acad Sci. 102 (26), 9133-9137 (2005).</li><li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+fibers+have+extraordinary+extensibility+and+elasticity.">Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity.</a> Science. 313 (5787), 634 (2006).</li><li>American National Standard. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+8:+Test+methods+for+vascular+prostheses.">Chapter 8: Test methods for vascular prostheses.</a> Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. , 33-34 (2001).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare e confermare che non vi siano conflitti di interesse noti associati a questa pubblicazione.

Concentrati piastrinici autologhi sono promettenti nel campo della medicina rigenerativa 18 per l&#39;abbondanza di fattori di crescita. Tuttavia, questi preparati spesso mancavano di una struttura definita che rende molto difficile la manipolazione chirurgica. Molte volte, le sospensioni e gel non si mantengono efficacemente nel sito di consegna, con conseguente esiti imprevedibili. L-PRF rappresenta un enorme progresso nell&#39;evoluzione di concentrati piastrinici in quanto è essenzialmente una membrana d...

The use of blood and blood-derived products to seal wounds and improve healing in different clinical situations started with fibrin glues, which are mainly fibrinogen concentrates. Addition of platelets to fibrin glue not only improved their strength but also promoted neoangiogenesis and regeneration. These benefits are attributed to the release of a variety of peptide growth factors from the alpha-granules of platelets upon activation1. Platelet concentrates (PC) were seen as a practical way to deliver growth factors2 and its use was driven by commercial interests rather than research characterization3. In fact, PCs are difficult to characterize unlike homogenous and defined pharmacological preparations, they are a potpourri of signaling molecules and blood cells (platelet and leukocytes) entrapped within a fibrin matrix. Different commercial and proprietary preparations yield a variety of PC that are different in cellular composition, growth factor recovery and kinetics of release4. 
It is important to realize that in most oral surgeries, platelet-rich plasma (PRP) preparations are used as a gel in open surgical wounds and not as platelet suspensions. In these situations, the gelation is induced by the addition of thrombin, calcium chloride, batroxobin or other agents and directly placed in the site of injury5. Due to rapid activation, fibrinogen polymerization is often incomplete and results in friable fibrin gels with very little mechanical strength. In addition, injectable PRP gels undergo rapid fibrinolysis6,7.
In contrast, the processes of blood coagulation (fibrinogen polymerization), platelet enrichment and activation occur simultaneously in the preparation of L-PRF8. The coagulation cascade is triggered when whole blood contacts the walls of a dry glass tube and continues throughout the centrifugation process. This results in the formation of a mechanically-strong blood clot (L-PRF) that can be surgically handled and used. 
Even though L-PRF has been investigated in terms of optimal methods of preparation, growth factor release and cell distribution9-11, detailed mechanical characterization of these membranes are lacking. This is significant gap in knowledge, given the popularity of these membranes in clinical practice as well as its potential to be used as a biomaterial. Current study focusses on the protocol for deriving L-PRF as well as methods that can be employed to study its mechanical properties. This data is intended to serve as baseline for ongoing studies investigating the viscoelastic properties of this interesting natural biomaterial.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Needle 19G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Disposal Container</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-827-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red-Topped Glass Collection Tube</td>
			<td>BD</td>
			<td>8020129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Pads</td>
			<td>Tyco</td>
			<td>5750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandage</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>5005989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surshield</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SV*S19BL</td>
			<td>Safety winged infusion set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Collection Assembly</td>
			<td>BD</td>
			<td>303380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tourniquets</td>
			<td>BD</td>
			<td>367203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brand Luer Adapter</td>
			<td>Vacutainer</td>
			<td>L42179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intra-Spin System&#160;</td>
			<td>Intra-Lock International</td>
			<td>ISS110</td>
			<td>Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes (Serological &#38; Micro)</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Exelint</td>
			<td>29552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Bionix 200</td>
			<td>MTS Systems Corporation</td>
			<td></td>
			<td>Material testing systems</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Test Works 4</td>
			<td>MTS Systems Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman Filter Paper</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>1004 070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SS Orthodontic ligature wire</td>
			<td>Patterson Dental</td>
			<td>628-4228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 Proof Ethanol</td>
			<td>Koptec</td>
			<td>V1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane (HMDS)</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>440191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium Mounting Stubs</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>16324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Sided Carbon Tape</td>
			<td>PELCO Tabs</td>
			<td>16084-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>LV 5610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc</td>
			<td>51026282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimicotic</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genipin</td>
			<td>Wako</td>
			<td>078-03021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12000-022</td>
			<td>Minimum Essential Medium-Alpha</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G1118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMS Reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td>Epoch Spectrophotometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mm Glass Cloning Rings</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3166-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 Flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>55-031-PB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ninhydrin 98%</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>454044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3987</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy Punch</td>
			<td>Acu Punch</td>
			<td>P1025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Micrometer</td>
			<td>Pittsburgh</td>
			<td>68305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G6257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3336</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3596</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of leukocyte-platelet rich fibrin, a novel biomaterial

Autologous platelet concentrates represent promising innovative tools in the field of regenerative medicine and have been extensively used in oral surgery. Unlike platelet rich plasma (PRP) that is a gel or a suspension, Leukocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) is a solid 3D fibrin membrane generated chair-side from whole blood containing no anti-coagulant. The membrane has a dense three dimensional fibrin matrix with enriched platelets and abundant growth factors. L-PRF is a popular adjunct in surgeries because of its superior handling characteristics as well as its suturability to the wound bed. The goal of the study is to demonstrate generation as well as provide detailed characterization of relevant properties of L-PRF that underlie its clinical success.

L&#39;immagine microscopio elettronico a scansione del coagulo L-PRF in diverse sezioni (superiore, centrale e inferiore) strato è illustrato nella figura 2. Come si può vedere, la parte superiore è costituita prevalentemente da rete di fibrina senza cellule. Lo strato intermedio è arricchito con piastrine con evidenza della loro attivazione e degranulazione. Lo strato inferiore è un misto di leucociti e globuli rossi intrappolate all&#39;interno di una matrice di fibrina. <p class="jove_conten...

Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial at JoVE.com

Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial

Leucocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) represents an FDA cleared preparation of autologous platelet concentrates that possesses unique fibrin architecture, enriched platelets and abundant growth factors. Here, we present a protocol for chair-side generation of L-PRF as well as evaluate its mechanical properties including uniaxial testing and suture retention strength testing.

Caratterizzazione di leucociti-piastrine Rich fibrina, un biomateriale Novel

Autologous platelet concentrates represent promising innovative tools in the field of regenerative medicine and have been extensively used in oral ...

characterization-of-leukocyte-platelet-rich-fibrin-a-novel-biomaterial

Research

JoVE Journal

Bioengineering

12.8K Views.  School of Dentistry, Virginia Commonwealth University. Leucocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) represents an FDA cleared preparation of autologous platelet concentrates that possesses unique fibrin architecture, enriched platelets and abundant growth factors. Here, we present a protocol for chair-side generation of L-PRF as well as evaluate its mechanical properties including uniaxial testing and suture retention strength testing. 