The project was supported by CTSA (UL1TR000058) from the National Center for Advancing Translational Sciences) and the CCTR Endowment Fund of Virginia Commonwealth University. The contents are solely the responsibility of the authors and do not necessarily represent official views of the National Center for Advancing Translational Sciences or the National Institutes of Health.

すべての血液描画手順はライセンスと認定専門家によって行われるべきです。研究のためのヒト被験者の使用は、治験審査委員会またはその他の適切な権限の承認を必要とします。インフォームドコンセントに関する参加者の識別情報を保護する特別な予防措置が続いする必要があります。このプロトコルに記載されているすべての実験は、ヒトの血液および/または血液製剤及び適切な個人用保護具の取り扱いは常に着用する必要が伴います。廃棄物はバイオハザードと見なされ、規則に従って廃棄する必要があります。 1.静脈穿刺<ol><li>患者/参加者を特定し、既存のレコードで確定します。詳細に研究を説明し、インフォームドコンセントを得ます。 </li><li>平らな安定した面にマーキング管を個々の患者のために設定トレイを持っています。 </li><li>手順を説明し、支持されたアームで快適に患者席を作ります。患者彼またはSHに知らせますeは小さなピンチを感じるだろうし、手順全体でまだ残っている必要があります。 </li><li>アダプタに針を取り付けます。 </li><li>手を洗うと手袋を着用してください。 </li><li>中心から外側同心円状に70％のイソプロピルアルコールで洗浄することにより、静脈穿刺のための肘前窩を準備します。 30秒間空気乾燥にサイトを許可します。 </li><li>触診によって適切な静脈を識別します。 </li><li> （まだラジアルパルスを感じながら）それはあまりにもタイトではないことを確認して穿刺部位以上に止血帯3-4を適用します。 </li><li> 1滑らかな動きで皮膚に針15〜30度のベベルを挿入することにより、静脈穿刺を実行します。針を通して採血管を押して、全血の9ミリリットルを収集します。 </li><li>止血帯を削除します。針からチューブを外します。 </li><li>針を撤回し、針を除去する前に穿刺部位にガーゼ正方形を適用します。適切なバイオハザード容器に針を廃棄してください。 </li><li>広報を維持するために患者を依頼穿刺部位でessure。 </li><li>チューブにラベルを付けます</li><li>出血が停止していることを確認するために穿刺部位を確認してください。 </li><li>患者は大丈夫（痛み、腫れや光ふらつき）を感じていないかどうか尋ねる、ガーゼ正方形の上に接着剤包帯やテープで固定します</li><li>退院前に患者/参加ありがとうございました。 </li></ol> 2. L-PRF準備<ol><li>すぐに赤張りの乾燥したガラス管の中に静脈採血後、遠心に配置します。 </li><li>適切なカウンターバランスを配置した後、室温で12分間、400×gで遠心分離します。 </li><li>サイクルの終わりにチューブを外します。乏血小板血漿（PPP）、多血小板フィブリン（L-PRF）とRBCベース（ 図1）：三層に注目してください。 </li><li>ピペットを使用して、PPPを吸引します。ピンセットを使用すると、静かに、L-PRFを引き出し、滅菌、パンチングメタルメッシュに配置します。 </li><li>外科用メスを使用して、慎重にバフを残すRBC層の大部分をこすりYコートそのまま。 </li><li>穏やかに30秒間（無菌の金属板を用いて、およその重量225 g）のL-PRF塊を圧縮します。乏血小板血漿が絞り出されます。 </li><li>プレートを外し、ゆっくりとL-PRF膜を持ち上げます。 L-PRF膜は、実験12で使用するための準備ができています。 </li></ol> 3.一軸引張試験<ol><li>取り扱いを容易にするため、濾紙の上に置いて、L-PRF膜（N = 6）を、カスタムメイドの金属を使用して「ドッグボーン」にパンチ（7.5ミリメートルのゲージ長との狭いポイントで広い2.75ミリメートル）死にます。 </li><li> 3つのスポットで、各サンプルの厚さを測定し、平均値を取ります。 </li><li>一軸試験システムのジョーグリップの中央にL-PRF膜を慎重に係合します。 </li><li>注意深くL-PRF膜を露出させるためにファイラ紙支持体を引き裂きます。 </li><li>プログラム楽器可動ヘッドが一定の割合（10.0ミリメートル/分）で動作しているので、いつL-実験を開始PRFがまだ湿っています。 </li><li>弾性率、破断エネルギー、および一軸テストシステムのソフトウエアから破断時のひずみを記録します。これらの値は自動的に計算されているとは、ユーザー定義の入力は必要ありません。 図3を参照してください。 </li></ol> 4.縫合糸保持力<ol><li>取り扱いを容易にするため、濾紙の上に置いて、L-PRF膜（n = 3）で、手術用メスを用いて、（X 25ミリメートル10ミリメートル）を測定長方形のサンプルに切断。 </li><li>各サンプル（3の平均）の厚さを測定します。 </li><li>ステンレス製歯列矯正リガチャーワイヤー（直径220μm）を用いて、サンプルの中央にピンホールを作成します。 </li><li>ループを形成し、引張試験機にそれを修正するためにピンホールを介して結紮ワイヤを渡します。下顎のグリップ13にL-PRF膜の端を置きます。 </li><li>プログラム可動ヘッドが一定の速度（10 mm /分）と開始時に動作しているように、器具実験。 </li><li>弾性率、破断エネルギー、および一軸テストシステムのソフトウエアから破断時のひずみを記録します。これらの値は自動的に計算されているとは、ユーザー定義の入力は必要ありません。 図3を参照してください。 </li></ol> 5.形態学的検査<ol><li> 10ミリメートルの皮膚生検パンチを使用して、SEM観察用のL-PRFのサンプルを調製し、24ウェルプレートに配置します。 </li><li> PBSでサンプルを洗浄し、20分間（PBS中）、2.5％のグルタルアルデヒドで固定します。 </li><li> 5分ごとに（50％、70％、80％、90％及び100％）エタノールの濃度を増加させ、順次に浸漬することによって試験片を脱水します。 </li><li> 5分間、100％のHMDS（ヘキサメチルジシラザン）0.5mlで処理します。過剰のHMDS 14を除去するために 、O / Nを通気します。 </li><li>両面テープを使用して、スタブのマウントサンプルは、70秒間白金コートスパッタやアクセルで動作する走査型電子顕微鏡で調べますerationの電圧20kV（または適切な設定）。 </li></ol> 6. L-PRFのゲニピン架橋、トリプシン感受性およびニンヒドリンアッセイ<ol><li>ゲニピン架橋されたL-PRFを調製するために、PBSで膜を洗浄し、48時間（70％エタノール中）1％のゲニピン溶液4mlに浸します。過剰ゲニピン15、16を除去するために、実験前にPBSですすいでください。 </li><li>トリプシンによる分解に対する耐性により、L-PRFのゲニピン架橋の安定性を評価します。置き、L-PRF膜（n = 3）を0.01％トリプシン500μlの架橋のL-PRFゲニピンとトリプシンの日々の変化に伴って37℃で3日間インキュベートしました。 <ol><li>露出を酵素に先立って1日目にサンプルを秤量し、3日目に開始と終了の重量差は、酵素分解17を表しています 。 </li></ol></li><li>ニンヒドリンアッセイにより、L-PRF（G-PRF）で処理ゲニピンで架橋の量を定量化します。まず標準CURVを準備電子グリシンを用いて、（1 MM-0.031 mM）の曲線は、遊離アミノ酸濃度（FAA）​​と吸光度との関係を確立します。 <ol><li> 2％の1 mlの熱PRF試料（w / v）の100℃で15分間ニンヒドリン。 </li><li>ソリューションは、室温まで冷却し、50％エタノール1.5ミリリットルを追加することができます。 </li><li>適切な分光光度計を用いて570 nmの吸光度を分析します。 </li><li> 15以下の式を使用して架橋の割合を決定します</li></ol></li></ol><img alt="式（1）" src="/files/ftp_upload/53221/53221eq1.jpg" /> 7. MTS細胞増殖アッセイ<ol><li> 80％のコンフルエントな単層が得られるまで、T-75フラスコ中で最小必須培地 - アルファの変更（αMEM）にMC3T3（マウス頭蓋冠前骨芽細胞）を成長させます。 </li><li>新鮮な、無菌のL-PRF膜を準備し（細胞培養フードの内側にL-PRFチューブを開く）と、新たな細胞培養皿上に膜を転送します。 </li><li>吸引フラスコからメディアと、PBSで単層をリンス5ミリリットル0.05％トリプシンを追加し、5分間37 O Cのインキュベーター内でフラスコを置き、5用の400×gで遠心チューブと遠心分離機にフラスコの内容物をピペット分。 </li><li>優しく、上清を除去し、細胞ペレットを破るためにチューブをタップして、新鮮なαMEMの4mlで再懸濁、血球計算板に細胞懸濁液（50μL）およびトリパンブルー（50μL）の混合物を分配し、数を数えます細胞</li><li>膜内に細胞を保持するために、L-PRF膜の上に置か10ミリメートルのガラスクローニングリング内の4×10 5個の細胞種（環は、24時間後に削除することができます）。 </li><li> 4日目に、10分間のPBS三度を有する構築物をすすぎます。 </li><li>各ウェルに無血清培地の1ミリリットルと200μlのMTS試薬を加え、37℃で2時間インキュベートします。 </li><li> 490 nmで200μlのアリコートからの吸光度を測定します。 </li></ol>

<ol>
	<li>Marx, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+plasma+Growth+factor+enhancement+for+bone+grafts.">Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85 (6), 638-646 (1998).</li><li>Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+plasma+in+bone+regeneration:+Engineering+the+delivery+for+improved+clinical+efficacy.">Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy.</a> BioMed Res In. 2014, (2014).</li><li>Del Corso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Knowledge+and+Perspectives+for+the+Use+of+Platelet-Rich+Plasma+(PRP)+and+Platelet-Rich+Fibrin+(PRF).">Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF).</a> in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13 (7), 1207-1230 (2012).</li><li>Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Not+every+PRP-gel+is+born+equal+Evaluation+of+growth+factor+availability+for+tissues+through+four+PRP-gel+preparations:+Fibrinet,+RegenPRP-Kit,+Plateltex+and+one+manual+procedure.">Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure.</a> Vox San. 97 (2), 110-118 (2009).</li><li>Fern&#225;ndez-Barbero, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+and+morphological+characterization+of+platelet-rich+plasma+gel.">Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel.</a> Clin Oral Implants Re. 17 (6), 687-693 (2006).</li><li>Li, Z., Guan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogels+for+cardiac+tissue+engineering.">Hydrogels for cardiac tissue engineering.</a> Polymer. 3 (2), 740-761 (2011).</li><li>Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+bricks-enriched+platelet-rich+plasma+gel+for+injectable+cartilage+engineering+&#8211;+an+in+vivo+experiment+in+nude+mice.">Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering &#8211; an in vivo experiment in nude mice.</a> J Tissue Eng Regen Med. 7 (10), 819-830 (2013).</li><li>Dohan, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+I:+technological+concepts+and+evolution.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e37-e44 (2006).</li><li>Dohan, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+II:+platelet-related+biologic+features.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e45-e50 (2006).</li><li>Choukroun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+fibrin+(PRF):+a+second-generation+platelet+concentrate.+Part+V:+histologic+evaluations+of+PRF+effects+on+bone+allograft+maturation+in+sinus+lift.">Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), 299-303 (2006).</li><li>Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+the+Fibrin+Architecture+and+Leukocyte+Content+Influence+the+Growth+Factor+Release+of+Platelet+Concentrates?+An+Evidence-based+Answer+Comparing+a+Pure+Platelet-Rich+Plasma+(P-PRP)+Gel+and+a+Leukocyte-+and+Platelet-Rich+Fibrin+(L-PRF).">Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF).</a> Curr Pharma Biotechno. 13 (7), 1145-1152 (2012).</li><li>Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+of+platelet+concentrates:+from+pure+platelet-rich+plasma+(P-PRP)+to+leucocyte-+and+platelet-rich+fibrin+(L-PRF).">Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF).</a> Trends Biotechno. 27 (3), 158-167 (2009).</li><li>Mine, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suture+Retention+Strength+of+Expanded+Polytetrafluoroethylene+(ePTFE)+Graft.">Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft.</a> Acta Med Okayam. 64 (2), 121-128 (2010).</li><li>Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drying+cells+for+SEM+,+AFM+and+TEM+by+hexamethyldisilazane:+a+study+on+hepatic+endothelial+cells.">Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells.</a> J Micros. 186 (1), 84-87 (1997).</li><li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cross-linking+of+chitosan+microspheres+with+genipin+on+protein+release.">The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release.</a> Carbohydr Poly. 68 (3), 561-567 (2007).</li><li>Sell, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-linking+methods+of+electrospun+fibrinogen+scaffolds+for+tissue+engineering+applications.">Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications.</a> Biomed Mater. 3 (4), (2008).</li><li>Gorczyca, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+characterization+of+genipin+cross-linked+porous+chitosan-collagen-gelatin+scaffolds+using+chitosan-CO2+solution.">Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution.</a> Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).</li><li>Rozman, P., Semenic, D., Wislet-Gendebien, S. a. b. i. n. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+15.+The+Role+of+Platelet+Gel+in+Regenerative+Medicine.">Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine.</a> Advances In Regenerative Medicine. , 319-349 (2011).</li><li>Dohan Ehrenfest, ., Lemo, D. M., Jimbo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selecting+a+relevant+animal+model+for+testing+the+in+vivo+effects+of+Choukroun&#8217;s+platelet-rich+fibrin+(PRF):+Rabbit+tricks+and+traps.">Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun&#8217;s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110 (4), 413-416 (2010).</li><li>Guilak, F., Baaijens, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+tissue+engineering:+Ten+more+years+of+progress.">Functional tissue engineering: Ten more years of progress.</a> J Biomec. 47 (9), 1931-1932 (2014).</li><li>Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanics+and+mechanobiology+in+functional+tissue+engineering.">Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering.</a> J Biomec. 47 (9), 1933-1940 (2014).</li><li>Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+elasticity+of+an+individual+fibrin+fiber+in+a+clot.">The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot.</a> Proc Natl Acad Sci. 102 (26), 9133-9137 (2005).</li><li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+fibers+have+extraordinary+extensibility+and+elasticity.">Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity.</a> Science. 313 (5787), 634 (2006).</li><li>American National Standard. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+8:+Test+methods+for+vascular+prostheses.">Chapter 8: Test methods for vascular prostheses.</a> Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. , 33-34 (2001).</li></ol>

著者らは、開示することは何もありませんし、この出版物に関連した興味のある既知の競合がないことを確認してください。

自己血小板濃縮物が原因の増殖因子の存在量の18再生医療の分野において有望です。しかしながら、これらの製剤は、多くの場合、外科的操作が非常に困難に定義された構造を欠いていました。多くの場合、懸濁液およびゲルは、予測不可能な結果が得られ、送達部位に効果的に保持されません。 L-PRFは、血小板の進化に大きな進歩が、それは本質的に捕捉された血小板としっかりフ...

The use of blood and blood-derived products to seal wounds and improve healing in different clinical situations started with fibrin glues, which are mainly fibrinogen concentrates. Addition of platelets to fibrin glue not only improved their strength but also promoted neoangiogenesis and regeneration. These benefits are attributed to the release of a variety of peptide growth factors from the alpha-granules of platelets upon activation1. Platelet concentrates (PC) were seen as a practical way to deliver growth factors2 and its use was driven by commercial interests rather than research characterization3. In fact, PCs are difficult to characterize unlike homogenous and defined pharmacological preparations, they are a potpourri of signaling molecules and blood cells (platelet and leukocytes) entrapped within a fibrin matrix. Different commercial and proprietary preparations yield a variety of PC that are different in cellular composition, growth factor recovery and kinetics of release4. 
It is important to realize that in most oral surgeries, platelet-rich plasma (PRP) preparations are used as a gel in open surgical wounds and not as platelet suspensions. In these situations, the gelation is induced by the addition of thrombin, calcium chloride, batroxobin or other agents and directly placed in the site of injury5. Due to rapid activation, fibrinogen polymerization is often incomplete and results in friable fibrin gels with very little mechanical strength. In addition, injectable PRP gels undergo rapid fibrinolysis6,7.
In contrast, the processes of blood coagulation (fibrinogen polymerization), platelet enrichment and activation occur simultaneously in the preparation of L-PRF8. The coagulation cascade is triggered when whole blood contacts the walls of a dry glass tube and continues throughout the centrifugation process. This results in the formation of a mechanically-strong blood clot (L-PRF) that can be surgically handled and used. 
Even though L-PRF has been investigated in terms of optimal methods of preparation, growth factor release and cell distribution9-11, detailed mechanical characterization of these membranes are lacking. This is significant gap in knowledge, given the popularity of these membranes in clinical practice as well as its potential to be used as a biomaterial. Current study focusses on the protocol for deriving L-PRF as well as methods that can be employed to study its mechanical properties. This data is intended to serve as baseline for ongoing studies investigating the viscoelastic properties of this interesting natural biomaterial.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Needle 19G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Disposal Container</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-827-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red-Topped Glass Collection Tube</td>
			<td>BD</td>
			<td>8020129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Pads</td>
			<td>Tyco</td>
			<td>5750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandage</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>5005989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surshield</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SV*S19BL</td>
			<td>Safety winged infusion set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Collection Assembly</td>
			<td>BD</td>
			<td>303380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tourniquets</td>
			<td>BD</td>
			<td>367203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brand Luer Adapter</td>
			<td>Vacutainer</td>
			<td>L42179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intra-Spin System&#160;</td>
			<td>Intra-Lock International</td>
			<td>ISS110</td>
			<td>Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes (Serological &#38; Micro)</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Exelint</td>
			<td>29552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Bionix 200</td>
			<td>MTS Systems Corporation</td>
			<td></td>
			<td>Material testing systems</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Test Works 4</td>
			<td>MTS Systems Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman Filter Paper</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>1004 070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SS Orthodontic ligature wire</td>
			<td>Patterson Dental</td>
			<td>628-4228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 Proof Ethanol</td>
			<td>Koptec</td>
			<td>V1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane (HMDS)</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>440191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium Mounting Stubs</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>16324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Sided Carbon Tape</td>
			<td>PELCO Tabs</td>
			<td>16084-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>LV 5610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc</td>
			<td>51026282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimicotic</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genipin</td>
			<td>Wako</td>
			<td>078-03021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12000-022</td>
			<td>Minimum Essential Medium-Alpha</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G1118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMS Reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td>Epoch Spectrophotometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mm Glass Cloning Rings</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3166-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 Flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>55-031-PB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ninhydrin 98%</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>454044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3987</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy Punch</td>
			<td>Acu Punch</td>
			<td>P1025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Micrometer</td>
			<td>Pittsburgh</td>
			<td>68305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G6257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3336</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3596</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of leukocyte-platelet rich fibrin, a novel biomaterial

Autologous platelet concentrates represent promising innovative tools in the field of regenerative medicine and have been extensively used in oral surgery. Unlike platelet rich plasma (PRP) that is a gel or a suspension, Leukocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) is a solid 3D fibrin membrane generated chair-side from whole blood containing no anti-coagulant. The membrane has a dense three dimensional fibrin matrix with enriched platelets and abundant growth factors. L-PRF is a popular adjunct in surgeries because of its superior handling characteristics as well as its suturability to the wound bed. The goal of the study is to demonstrate generation as well as provide detailed characterization of relevant properties of L-PRF that underlie its clinical success.

（上部、中央および底部）層を、 図2に示されている別のセクションのL- PRFクロットの走査型電子顕微鏡画像。図から分かるように、頂部は無細胞で主にフィブリンネットワークの構成されています。中間層は、それらの活性化と脱顆粒の証拠と血小板と濃縮されています。下層は、白血球およびフィブリンマトリックス内に捕捉された赤血球の混合物を有しています。 <p cla...

Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial at JoVE.com

Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial

Leucocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) represents an FDA cleared preparation of autologous platelet concentrates that possesses unique fibrin architecture, enriched platelets and abundant growth factors. Here, we present a protocol for chair-side generation of L-PRF as well as evaluate its mechanical properties including uniaxial testing and suture retention strength testing.

白血球、血小板リッチフィブリン、新規生体材料の特性評価

Autologous platelet concentrates represent promising innovative tools in the field of regenerative medicine and have been extensively used in oral ...

characterization-of-leukocyte-platelet-rich-fibrin-a-novel-biomaterial

Research

JoVE Journal

Bioengineering

12.8K ビュー.  School of Dentistry, Virginia Commonwealth University. Leucocyte-Platelet Rich Fibrin (L-PRF) represents an FDA cleared preparation of autologous platelet concentrates that possesses unique fibrin architecture, enriched platelets and abundant growth factors. Here, we present a protocol for chair-side generation of L-PRF as well as evaluate its mechanical properties including uniaxial testing and suture retention strength testing. 