Single-Faser-Aufnahme spielt eine wichtige Rolle bei der Aufzeichnung der Aktivitäten von Nervenfasern. Vor allem Aktivitäten, die periphere Empfindungen von empfänglichen Feldern auf Neuronen in dorsalem Wurzelganglion übertragen. In Wavel der Faseraufzeichnung, bietet Dauerderdauer mit Kapazität, Um Reaktionen auf Naturreize aufzuzeichnen, und war später Störung der interzellulären Umgebung.
In einer einzigen Faseraufnahme erfordert Neutronautomatisch gut für die Situation. Der Therapeut nennt die Voraussetzung für die Vorbereitung integrierter DRG-Tests, dass der Ischiasnerv integriert ist. Das Ergebnis der Demo-Situation zeigt fast alle Details der Nerven in guter, physischer Abziehphase.
Und drittens, die gesamte DRG-Vorbereitung, wie sie integriert sind. Um dieses Verfahren zu beginnen, bereiten und desinfizieren Sie alle chirurgischen Instrumente vor der Operation. Dann bereiten Sie ein bis zwei Liter normale Ringer extrazelluläre Lösung und lagern bei vier Grad Celsius bis zum Gebrauch.
Um den Ischiasnervenstamm für die Aufnahme freizulegen, schneiden Sie zunächst die Haut und Muskeln der anästherisierten Ratte auf dem dorsalen Teil des Oberschenkels auf. Führen Sie dann eine stumpfe Sezierung entlang des femoralen Bizeps durch. Isolieren Sie den Ischiasnervenstamm vorsichtig mit einer Augenschere und einer Glastrennnadel und halten Sie das Gewebe mit Ringers Lösung feucht.
Als nächstes fixieren Sie das Tier auf einem hausgemachten Metallreifen, indem Sie die Haut in den Schlitz um sie herum nähen. Ziehen Sie die Haut leicht nach oben, um ein flüssiges Bad zu etablieren. Legen Sie einen Zentimeter Ischiasnervenstamm an der proximalen Seite aus.
Legen Sie eine kleine, braune Plattform unter den Nervenstamm, um den Kontrast zu verstärken, um den feinen Nervenstamm deutlich zu beobachten. Anschließend etwas warmes flüssiges Paraffin auf die Oberseite des Nervenstammes auftragen, um eine Trocknung der Faseroberfläche zu verhindern. Entfernen Sie die Flüssigkeit, wenn es eine Exsudation um den Nervenstamm gibt.
Um die Aufnahme durchzuführen, wählen Sie das Platin-Filament als Aufnahmeelektrode aus. Essen und erstellen Sie einen kleinen Haken ganz am Ende. Befestigen Sie die Elektrode anschließend an einem Mikromanipulator.
Legen Sie im Bad eine Referenzelektrode neben das Subkutangewebe. Teilen Sie die Spinaldura und die Pia mater und erhalten Sie den Ischiasnerv. Unter einem Stereomikroskop bei 25%Vergrößerung eine feine Faszikel aufnehmen und das annähernde Ende des Axons am Haken der Aufnahmeelektrode aufhängen.
Identifizieren Sie das empfängliche Feld einer einzelnen, nichtkonzeptiven Faser mit einem mechanischen Simuli und thermischen Stimulus. Wenn das Abfeuern der Nervenfaser auf die mechanischen Reize und das heiße Wasser reagiert, dann betrachten Sie es als polymoto, nichtkonzeptive c Faser. Als nächstes legen Sie zwei Nadelstimuluselektroden mit einem Abstand von zwei Millimetern in die Haut des Identifikationsfeldes für die Abgabe der elektrischen Reize ein.
Zeigen Sie die Wellenform eines Aktionspotentials auf dem Oszilloskop an, und verwenden Sie Computer ein d-Board mit einer Signalabtastungsrate von 20 Kilohertz. Zeichnen Sie dann die Spitzen mithilfe von Datenerfassungssoftware auf und analysieren Sie sie später mit professioneller Software. Um Leitungsfehler zu messen, liefern Sie die sich wiederholenden Elektrodenreize in verschiedenen Frequenzen 60 Sekunden lang an eine c-Faser.
Lassen Sie ein 10-Minuten-Intervall für die Faser zwischen den Reizen zu entspannen. Berechnen Sie dann das Verhältnis der Anzahl der Ausfälle zur Anzahl der gelieferten repetitiven Impulsimpulse und multiplizieren Sie mit 100 %, um den Grad des Leitungsversagens zu erhalten. Um das dorsale Wurzelganglion freizulegen, schneiden Sie zuerst die Haut von der Mittellinie der Rückseite am l4 bis l5 Segment auf.
Als nächstes entfernen Sie die Muskeln Wirbelsäule Prozess Wirbelbor und Transversal-Prozess mit einem Knochen rongeur, und setzen Sie das Rückenmark NDRG Körper. Bedecken Sie das exponierte Rückenmark, NDRG, mit Baumwolle, die mit normaler Ringer-Extrazelllösung getränkt ist, um die neuronale Aktivität aufrechtzuerhalten. Stoppen Sie die Blutung und entfernen Sie das Blut nach Bedarf.
Anschließend entfernen Sie mit einer ophthalmologischen Schere l4 bis s1 Knochenstruktur über dem Wirbelforamen, um das DRG und den angeschlossenen Spinalnerv freizulegen. Machen Sie einen Schnitt auf der Haut, um den Ischiasnerv am mittleren Oberschenkel freizulegen. Trennen und trennen Sie den Ischiasnerv vom distalen Ende des Nervs, wo er in den Muskel geht.
Und ligate den Nervenstamm mit chirurgischer Linie am Ende des Nervs vor dem Schneiden. Trennen Sie dann den Ischiasnerv vom darunter liegenden Bindegewebe, indem Sie den Nervenligationspunkt anheben. Entfernen Sie für Dura aus dem Rückenmark, und trennen Sie das DRG vom darunter liegenden Bindegewebe, bis es den angrenzenden Teil des Ischiasnervs erreicht.
So isolieren Sie die gesamte Vorbereitung von DRG mit einem angeschlossenen Ischiasnerv. Um die Oberfläche des DRG bei 4-facher Vergrößerung zu entfernen, entfernen Sie vorsichtig die Spinaldura auf der Oberfläche von l4 bis l6 DRG mit einer Pinzette. Legen Sie das DRG mit angeschlossenem Ischiasnerv in eine Glasröhre, die einen Milliliter gemischter Enzyme enthält.
In einem 37 Grad Celsius Wasserbad für 15 Minuten verdauen. Nach 15 Minuten heben Sie das Ende der chirurgischen Linie an und bewegen Sie das Präparat auf eine Schale, die mit normaler ringer extrazellulärer Lösung gefüllt ist, um das Enzym auszuwaschen. Dann übertragen Sie das verdaute DRG in einen Behälter gefüllt mit sauerstoffhaltigen Ringer extrazelluläre Lösung für die Aufnahme gefüllt.
Um die Aufzeichnung durchzuführen, bereiten Sie die intrazelluläre Lösung vor und speichern Sie sie bei null Grad Celsius, bis sie verwendet wird. Mit einem Scheibenanker die Ganglien stabilisieren und das Nervenende mit einer saugstimulierenden Elektrode verbinden. Bei 40-facher Vergrößerung ein DRG-Neuron mit einem Wasseremersionsobjektiv visualisieren und auswählen.
Falten Sie eine Elektrode und füllen Sie sie mit intrazellulärer Lösung. Befestigen Sie die Elektrode am Halter und setzen Sie mit einem Endwiderstand von vier bis sieben Megaohm einen positiven Druck in die Pipette aus. Als nächstes bringen Sie die Elektrode auf die Zelloberfläche.
Wenden Sie dann unteren Druck auf die Pipette an, um eine Dichtung zu bilden. Sobald eine Gigaohm-Dichtung erreicht ist, stellen Sie das Membranpotential auf etwa minus 60 Millivolt ein und stellen Sie den gesamten Zellaufnahmemodus ein. Anschließend repetitive Reize von 5 bis 50 Hertz an den Ischiasnerv die durch die Saugelektrode liefern, um auf Leitungsversagen zu überprüfen.
Messen Sie die Amplitude von AHP von der Basislinie bis zum Peak und die 80%AHP-Dauer. Diese Abbildung zeigt die ursprünglichen aufeinanderfolgenden Aufnahmen von einzelnen c5-Nachschüssen von Ratten als Reaktion auf die elektrische Stimulation von 10 Hertz. Jeder zwanzigste Sweep wird von oben nach unten angezeigt.
Die Einfügung zeigt ein repräsentatives Aktionspotenzial. Hier sind die Aufnahmen von einzelnen c Fasern von CFA injizierten Ratten als Reaktion auf die gleiche Stimulation wie das vorherige Panel. Diese Abbildung zeigt die kontinuierlichen Aufzeichnungen von Serien-Feuerreaktionen auf fünf Hertz-Stimulation unter Kontrollbedingungen oder die Verabreichung einer unterschiedlichen Konzentration von ZD7288 in einem DRG-Neuron mit kleinem Durchmesser von CFA-bewerteten Ratten.
Die Einschnitte zeigen erweiterte Ablaufverfolgungen für die angegebenen Aufzeichnungszeiträume an. Dunkle Flecken stellen Spike-Fehler dar. Der AHP zeigte eine größere Steigung in der Steuerung.
Während eine kleinere steigende Steigung nach 125 Mikromolaren bei ZD7288 Anwendung beobachtet wurde. Wenn eine Zeit einzelne fünfer Aufnahme, Ich denke, es ist wichtig, die Faser zu schneiden wird die Erhaltung der Tiere ist gut jede Sicherheitsbedingung. Und Mikroumgebung um das Neutron.
Die Kombination von Einzelfaseraufzeichnung und Anwendung von intaktem DRG, das mit dem Ischiasnerv verbunden ist, verbesserte unser Verständnis des peripheren Nervensystems in Bezug auf Schmerzen.
