La grabación de fibra única desempeña un papel importante en el registro de las actividades de las fibras nerviosas. Especialmente las actividades que transmiten la sensación periférica de los campos receptivos a las neuronas en el ganglio de la raíz dorsal. En ondas de registro de fibra, proporciona la duración del tiempo con capacidad para registrar las respuestas a los estímulos de la naturaleza, y más tarde fue la perturbación del entorno intercelular.
En una sola grabación de fibra requiere neutrones automático bueno para la situación. El terapeuta llama al requisito para la preparación de pruebas integradas de DRG que el nervio ciático está integrado. El resultado de la situación de demostración muestra casi todos los detalles de los nervios en una buena etapa de calcomanía física.
Y tercero, toda la preparación de DRG como están integrados. Para comenzar este procedimiento, prepare y desinfecte todos los instrumentos quirúrgicos antes de la cirugía. A continuación, prepare de uno a dos litros de solución extracelular normal de Ringer y guárdelo a cuatro grados centígrados hasta su uso.
Para exponer el tronco del nervio ciático para la grabación, primero, abra la piel y los músculos de la rata anestesiada en la parte dorsal del muslo. Luego, realiza una disección contundente a lo largo del bíceps femoral. Aísle cuidadosamente el tronco del nervio ciático con tijeras oftálmicas y una aguja de separación de vidrio, y mantenga el tejido húmedo usando la solución de Ringer.
A continuación, fija el animal en un aro de metal casero cosiendo la piel en la ranura que lo rodea. Tire de la piel ligeramente hacia arriba para establecer un baño de líquido. Exponga un centímetro de tronco nervioso ciático en el lado proximal.
Coloque una pequeña plataforma marrón debajo del tronco nervioso para mejorar el contraste con el fin de observar claramente el tronco del nervio fino. Posteriormente, aplicar un poco de parafina líquida tibia en la parte superior del tronco nervioso para evitar el secado de la superficie de la fibra. Retire el líquido si hay una exudación alrededor del tronco nervioso.
Para realizar la grabación, seleccione el filamento de platino como electrodo de grabación. Come y crea un pequeño gancho al final. Después, conecte el electrodo a un micromaniprógrafo.
En el baño, coloque un electrodo de referencia junto al tejido subcutáneo. Divide la dura dura espinal y la Pia mater y obtén el nervio ciático. Bajo un microscopio estéreo con un aumento del 25%, coge un fascículo fino y suspende el extremo aproximado del axón en el gancho del electrodo de grabación.
Identificar el campo receptivo de una sola fibra c no conceptiva utilizando un sílulis mecánico y estímulo térmico. Si la cocción de la fibra nerviosa responde a los estímulos mecánicos y al agua caliente, entonces considérelo como una fibra c polimoto, no conceptiva. A continuación, inserte dos electrodos de estímulo de aguja con un intervalo de dos milímetros en la piel del campo de identificación para la entrega de los estímulos eléctricos.
Muestre la forma de onda de un potencial de acción en el osciloscopio, y utilice la computadora una placa d con una frecuencia de muestreo de señal de 20 kilohercios. A continuación, registre los picos utilizando el software de adquisición de datos y analícelos más tarde con software profesional. Para medir el fallo de conducción, entregue los estímulos repetitivos del electrodo en diferentes frecuencias a una fibra c durante 60 segundos.
Permita un intervalo de 10 minutos para que la fibra se relaje entre los estímulos. A continuación, calcule la relación entre el número de fallos y el número de pulsos de estímulo repetitivos entregados y multiplique por 100% para obtener el grado de fallo de conducción. Para exponer el ganglio de raíz dorsal, primero abra la piel desde la línea media de la espalda en el segmento l4 a l5.
A continuación, retire el proceso de bor vertebral y transversal del proceso de la columna vertebral de los músculos usando un rongeur óseo, y exponga el cuerpo de la médula espinal NDRG. Cubra la médula espinal expuesta, NDRG, con algodón empapado con la solución extracelular normal de Ringer para mantener la actividad neuronal. Detenga el sangrado y extraiga la sangre según sea necesario.
Posteriormente, utilizando tijeras oftálmicas, retire l4 a la estructura ósea s1 por encima del foramen vertebral con el fin de exponer el DRG y el nervio espinal conectado. Haz un corte en la piel para exponer el nervio ciático en el muslo medio. Separe y desconecte el nervio ciático del extremo distal del nervio donde va dentro del músculo.
Y ligar el tronco nervioso con línea quirúrgica al final del nervio antes del corte. Luego, separe el nervio ciático del tejido conectivo subyacente levantando el punto de ligadura nerviosa. Retire la dura de la médula espinal y separe el DRG del tejido conectivo subyacente hasta que llegue a la parte adyacente del nervio ciático.
Por lo tanto, aislar toda la preparación de DRG con un nervio ciático adjunto. Para limpiar la superficie del DRG, a 4x aumento, retire cuidadosamente la duración espinal en la superficie de l4 a l6 DRG usando pinzas. Coloque el DRG con nervio ciático unido en un tubo de vidrio que contenga un mililitro de enzimas mixtas.
Digerir en un baño de agua Celsius de 37 grados durante 15 minutos. Después de 15 minutos, levante el extremo de la línea quirúrgica y mueva la preparación a un plato lleno de la solución extracelular normal de Ringer para lavar la enzima. A continuación, transfiera el DRG digerido a un recipiente lleno de solución extracelular de Ringer oxigenada para su grabación.
Para realizar la grabación, prepare la solución intracelular y guárdela en grados Celsius de grado cero hasta su uso. Usando un ancla de corte, estabilice los ganglios y conecte el extremo nervioso a un electrodo estimulante de succión. Con un aumento de 40x, visualice y seleccione una neurona DRG con un objetivo de emersión de agua.
Doblar un electrodo y llenarlo con solución intracelular. Fije el electrodo en el soporte y aplique presión positiva en la pipeta con una resistencia final de cuatro a siete megaohms. A continuación, lleve el electrodo a la superficie de la célula.
A continuación, aplique presión negativa a la tubería para formar un sello. Una vez que se alcanza un sello de gigaohm, establezca el potencial de membrana en aproximadamente menos 60 milivoltios y establezca todo el modo de grabación celular. Posteriormente, entregar estímulos repetitivos de 5 a 50 hercios al nervio ciático a través del electrodo de succión para detectar fallos de conducción.
Mida la amplitud de AHP desde la línea de base hasta el pico y la duración del 80%AHP. Esta figura muestra las grabaciones consecutivas originales de disparos de ratas individuales c5 en respuesta a la estimulación eléctrica de 10 hercios. Cada vigésimo barrido se muestra y se muestra de arriba a abajo.
El inserto muestra un potencial de acción representativo. Aquí están las grabaciones de fibras c individuales de ratas inyectadas por CFA en respuesta a la misma estimulación que el panel anterior. Esta figura muestra las grabaciones continuas de respuestas de disparo en serie a la estimulación de cinco hercios en condiciones de control, o la administración de diferentes concentraciones de ZD7288 en una neurona DRG de diámetro pequeño de ratas con calificación CFA.
Los insertos muestran trazas expandidas para los períodos de grabación especificados. Las manchas oscuras representan errores de pico. El AHP mostró una pendiente creciente más grande en el control.
Mientras que una pendiente ascendente más pequeña se observó después de 125 micromolares en la aplicación ZD7288. Cuando una sola grabación de cinco tiempos, creo que es importante cortar la fibra mantendrá los animales es buena cualquier condición de seguridad. Y microambiente alrededor del neutrón.
La combinación de registro de fibra única y aplicación de DRG intacto unido con el nervio ciático, mejoró nuestra comprensión del sistema nervioso periférico perteneciente al dolor.
