A gravação de fibra única desempenha um papel importante no registro das atividades das fibras nervosas. Especialmente atividades que transmitem sensação periférica de campos receptivos a neurônios em gânglio raiz dorsal. Em ondas de gravação de fibras, fornece tempo de duração com capacidade para registrar respostas aos estímulos da natureza, e posteriormente foi perturbação do ambiente intercelular.
Em uma única gravação de fibra requer neutron automático bom para a situação. O terapeuta chama a exigência para a elaboração de testes drg integrados o nervo ciático está integrado. O resultado da situação demo mostra quase todos os detalhes dos nervos em bom estágio de decalque físico.
E terceiro, toda a preparação do DRG, como estão integrados. Para iniciar este procedimento, prepare e desinfete todos os instrumentos cirúrgicos antes da cirurgia. Em seguida, prepare de um a dois litros da solução extracelular normal do Ringer e armazene a quatro graus Celsius até usar.
Para expor o tronco do nervo ciático para gravação, primeiro, abra a pele e os músculos do rato anestesiado na parte dorsal da coxa. Em seguida, realize uma dissecção contundente ao longo dos bíceps femorais. Isole cuidadosamente o tronco do nervo ciático usando uma tesoura oftálmica e uma agulha de separação de vidro, e mantenha o tecido úmido usando a solução de Ringer.
Em seguida, fixe o animal em um aro de metal caseiro costurando a pele na fenda ao seu redor. Puxe a pele ligeiramente para cima para estabelecer um banho de fluido. Exponha um centímetro de tronco de nervo ciático no lado proximal.
Coloque uma pequena plataforma marrom sob o tronco nervoso para melhorar o contraste, a fim de observar claramente o tronco nervoso fino. Posteriormente, aplique alguma parafina líquida quente na parte superior do tronco nervoso para evitar a secagem da superfície da fibra. Remova o fluido se houver uma exsução ao redor do tronco nervoso.
Para realizar a gravação, selecione o filamento de platina como o eletrodo de gravação. Coma e crie um pequeno gancho no final. Depois, conecte o eletrodo a um micromanipulador.
No banho, coloque um eletrodo de referência ao lado do tecido subcutâneo. Divida a dura espinhal e a pia mater e obtenha o nervo ciático. Sob um microscópio estéreo a 25% de ampliação, pegue um fascículo fino e suspenda a extremidade aproximada do axônio no gancho do eletrodo de gravação.
Identifique o campo receptivo de uma única fibra c nãoconceptiva usando um simulis mecânico e estímulo térmico. Se o disparo da fibra nervosa responder aos estímulos mecânicos e à água quente, então considere-a como uma fibra c polimoto, nãoconceptiva. Em seguida, insira dois eletrodos de estímulo de agulha com um intervalo de dois milímetros na pele do campo de identificação para a entrega dos estímulos elétricos.
Exiba a forma de onda de um potencial de ação no osciloscópio e empregue um computador com uma taxa de amostragem de sinal de 20 kilohertz. Em seguida, registo os picos usando software de aquisição de dados e analisá-los posteriormente com software profissional. Para medir a falha de condução, entregue os estímulos eletrodos repetitivos em diferentes frequências a uma fibra c por 60 segundos.
Permita um intervalo de 10 minutos para que a fibra relaxe entre os estímulos. Em seguida, calcule a razão do número de falhas ao número de pulsos de estímulo repetitivo entregues e multiplique em 100% para obter o grau de falha de condução. Para expor o gânglio raiz dorsal, primeiro corte a pele da linha média da parte de trás no segmento l4 para l5.
Em seguida, remova o processo de boro vertebral e processo transversal da coluna vertebral usando um rongeur ósseo, e exponha o corpo NDRG da medula espinhal. Cubra a medula espinhal exposta, NDRG, com algodão encharcado com a solução extracelular normal de Ringer para manter a atividade neural. Pare o sangramento e remova o sangue conforme necessário.
Posteriormente, utilizando uma tesoura oftálmica, remova a estrutura óssea l4 a s1 acima do foie vertebral, a fim de expor o DRG e o nervo espinhal conectado. Faça um corte na pele para expor o nervo ciático na coxa média. Separe e desconecte o nervo ciático da extremidade distal do nervo onde ele vai para dentro do músculo.
E ligadurar o tronco nervoso com linha cirúrgica na extremidade do nervo antes de cortar. Em seguida, separe o nervo ciático do tecido conjuntivo subjacente levantando o ponto de ligadura nervosa. Remova para dura da medula espinhal, e separe o DRG do tecido conjuntivo subjacente até atingir a parte adjacente do nervo ciático.
Assim, isole toda a preparação do DRG com um nervo ciático ligado. Para limpar a superfície do DRG, a 4x de ampliação, remova cuidadosamente a dura espinhal na superfície de L4 a L6 DRG usando pinças. Coloque o DRG com nervo ciático ligado em um tubo de vidro contendo um mililitro de enzimas mistas.
Digerir em um banho de água Celsius de 37 graus por 15 minutos. Após 15 minutos, levante a extremidade da linha cirúrgica e mova a preparação para um prato cheio de solução extracelular normal de Ringer para lavar a enzima. Em seguida, transfira o DRG digerido para um recipiente cheio de solução extracelular de Ringer oxigenada para gravação.
Para realizar a gravação, prepare a solução intracelular e armazene-a a zero grau Celsius até o uso. Usando uma âncora de fatia, estabilize o gânglio e conecte a extremidade nervosa a um eletrodo estimulante de sucção. Na ampliação de 40x, visualize e selecione um neurônio DRG com um objetivo de emersão de água.
Dobre um eletrodo e encha-o com solução intracelular. Coloque o eletrodo no suporte e aplique pressão positiva na tubulação com uma resistência final de quatro a sete megaohms. Em seguida, traga o eletrodo para a superfície celular.
Em seguida, aplique pressão negativa na tubulação para formar uma vedação. Uma vez que uma vedação gigaohm é atingida, ajuste o potencial da membrana em cerca de menos 60 milvolts e estabeleça todo o modo de gravação celular. Posteriormente, entregue estímulos repetitivos de 5 a 50 hertz ao nervo ciático através do eletrodo de sucção para testar a falha de condução.
Meça a amplitude de AHP da linha de base ao pico e a duração de 80% AHP. Esta figura mostra as gravações consecutivas originais de re-disparos de c5 único de ratos em resposta a 10 hertz estimulação elétrica. Cada vigésimo varredura é mostrada e exibida de cima para baixo.
A inserção mostra um potencial de ação representativa. Aqui estão as gravações de fibras c únicas de ratos injetados CFA em resposta à mesma estimulação do painel anterior. Esta figura mostra as gravações contínuas de respostas de disparo em série a cinco estímulos hertz sob condições de controle, ou administração de diferentes concentrações de ZD7288 em um neurônio DRG de pequeno diâmetro de ratos classificados cfa.
Os insets mostram traços expandidos para os períodos de gravação especificados. Manchas escuras representam falhas de pico. A AHP mostrou uma inclinação maior no controle.
Enquanto uma inclinação de elevação menor foi observada após 125 micromolars na aplicação ZD7288. Quando uma única gravação de cinco anos, eu acho que é importante cortar a fibra vai manter os animais é bom qualquer condição de segurança. E microambiente ao redor do nêutron.
A combinação de gravação única de fibras e aplicação de DRG intacto ligado ao nervo ciático, melhorou nossa compreensão do sistema nervoso periférico relativo à dor.
