Mein Labor interessiert sich für Mechanobiologie, die untersucht, wie Zellen sich ausüben und von mechanischen Kräften beeinflusst werden. Eine Möglichkeit, die Mechanobiologie zu quantifizieren, ist die Messung der Zellkontraktilität. In anhaftenden Zellen manifestiert sich Kontraktilität in Zugkräften, die auf das Zellsubstrat ausgeübt werden. Wir quantifizieren diese Kräfte anhand einer Methode, die allgemein als Traktionskraftmikroskopie oder TFM bezeichnet wird. Und TFM ist in einer Vielzahl von verschiedenen Methoden implementiert, aber ein gemeinsamer Aspekt ist, dass es eine ziemlich serielle und langsame Labortechnik ist, die typischerweise in einem einzigen Gericht wie diesem hier durchgeführt wird. Dies beschränkt uns auf die Bewertung einer Population oder eines Zustands zu einem Zeitpunkt. Überall in der Zellkultur wurde vor einiger Zeit verbessert, aber die Schaffung von Multiwell-Gerichte und wir dachten, wäre es nicht toll, es könnte wir TFM mit dem gleichen erhöhten Durchsatz und die gleiche Effizienz der Zeit und Reagenzien? Und das war unsere Lösung. Also haben wir eine 96-Well-Traktionskraftschale geschaffen. Und es sieht einem herkömmlichen 96-Well-Gewebe-Kulturgericht sehr ähnlich, aber mit diesem Gericht können wir nicht nur 96 verschiedene Zellkulturbedingungen untersuchen, sondern auch deren Zellkontraktilität quantifizieren. Dies stellt eine viel höhere Durchsatzlösung als Einzelschalenansätze dar, die es uns ermöglichen, verschiedene Zellbedingungen und kontraktile Reaktionen zu untersuchen. Während der Krebsmetastasierung wandern Krebszellen von ihrem primären Standort zu sekundären Standorten und verbreiten die Krankheit in unserem Körper. Dieses metastasierende Verhalten von Krebszellen macht 90% des krebsbedingten Todes aus. Einer der vorgeschlagenen Mechanismen für Epithelkrebszellen, um einen wandernderen und invasiveren Phänotyp zu erwerben, ist epithelial-mesenchymaler Übergang, EMT. Während der EMT werden sie wandernder und invasiver und verändern ihr körperliches Verhalten. Um diese Veränderungen im physikalischen Verhalten besser zu verstehen, nutzen wir unser weiches Siliziumsubstrat, um Veränderungen in der Kontraktilität von Maus-Brustdrüsenzellen mit EMT-Induktion durch TGF-In dieser Studie zu messen, untersuchten wir, wie unterschiedliche Konzentrationen und Inkubationszeit des physikalischen Verhaltens von TGF-beeinflussen. Polydimethylsiloxan ist ein sehr konformer Kautschuk mit dem niedrigsten Young-Modul von etwa 0,6 Kilopascal. Die Steifigkeit dieses Materials kann auch mit verschiedenen Konzentrationen von Vernetzen, einschließlich SYLGARD 184.To messen mechanische Eigenschaften von PDMS wir verwenden ein Rheometer. Nach dem Mischen von Teil A und Teil B des PDMS, in einem Eins-zu-Eins-Gewichtsverhältnis und Zugabe des Aushärtungsmittels mit dem angegebenen Gewichtsprozentsatz, laden Sie die vorbereitete Charge auf die Rheometerplatte. Achten Sie darauf, genügend probenweise zu laden, um den Spindelbereich vollständig abzudecken. Es ist wichtig, sicherzustellen, dass die Spindel die Probe vollständig berührt, ohne freien Platz an der Kante. Jede zusätzliche Probe sollte sorgfältig getrimmt und von der Platte abgewischt werden. Messen Sie den Endspeichermodul und die Zeitabhängigkeit der Viskoelastizität jeder Probe, indem Sie Zeit- und Frequenzsweeps bei einem oszillatonigen Scherstamm von 0,5%Newsha durchführen]Diese Grafik ist ein Beispiel für den Zeit-Seq-Test, der das rheologische Verhalten von Polydimethylsiloxan mit angewendetem Oszillator-Scherstamm von 0,5% und einer Temperatur von 100 gemessen hat.
