Dieses Protokoll ist von Bedeutung, da unsere Gefriermethode ein geeignetes Verfahren zur Herstellung biokompatibler Hydrogele für den Einsatz in biomedizinischen, pharmazeutischen oder kosmetischen Anwendungen ist. Der Hauptvorteil dieser Methode ist, dass sie keine chemischen Vernetzungsmittel verwendet, die einen Geburtsfehler verursachen können. Auch die Gefrierbedingung, die bei dieser Methode verwendet wird, steuert die endgültige Eigenschaft von Hydrogelen wie Grad.
Diese Methode kann auf Hydrogele mit anderen Anwendungen angewendet werden. Dies wird zur Behandlung der Wasserverschmutzung verwendet. In der Tat könnte es verwendet werden, um Polymerperlen zu produzieren, die als Wasserbehälter für eine neue Kultur verwendet werden.
Es ist wichtig, die von ihm misstpolymere Lösung vollständig zu homogenisieren. Andernfalls weisen die Hydrogele Knackpunkte auf. Außerdem müssen Sie mit den Gefrierzeiten in jedem Zyklus vorsichtig sein.
Um dieses Verfahren zu beginnen, lösen Sie 0,2 Gramm Chitosan und 10 Milliliter 0,1 Molessigsäure bei Raumtemperatur und halten Sie kontinuierlichemechanische Rührung über Nacht, um eine 2%Chitosan-Lösung vorzubereiten. Am nächsten Tag ein Gramm PVA und 10 Milliliter destilliertes Wasser auflösen und bei 80 Grad Celsius eine Stunde rühren. Verwenden Sie einen Magnetischen Rührer, um eine gleiche Menge beider Lösungen bei Raumtemperatur zu mischen, bis sie homogen sind.
Gießen Sie die Mischungen auf Petri-Gerichte. Lassen Sie die Proben bei atmosphärischem Druck für zwei Stunden, um zu entgasen. Die Hydrogele bei minus vier Grad Celsius, minus 20 Grad Celsius oder minus 80 Grad Celsius für 20 Stunden und vier Zyklen einfrieren.
Einfrieren eines anderen Hydrogels bei minus 80 Grad Celsius für 20 Stunden mit fünf oder sechs Gefrierzyklen. Nach dem dritten Gefrierzyklus die Hydrogele mit entionisiertem Wasser waschen. Am Ende des letzten Gefrierzyklus trocknen sie 48 Stunden lang bei minus 50 Grad Celsius und rühren zur weiteren Charakterisierung.
Wenn Sie bereit sind, die FT-IR-Charakterisierung durchzuführen, platzieren Sie ein kleines Stück Hydrogel im FT-IR Spektralphotometer im ATR-Modus. Nehmen Sie das FT-IR-Spektro von 4000 bis 600 Wellenlängen. Schneiden Sie zunächst Scheiben aus dem Hydrogel aus, die 13 Millimeter im Durchmesser und 10 Millimeter in der Höhe sind.
Wiegen Sie sie. Inkubieren Sie die Scheiben in 50 Milliliter entionisiertem Wasser bei 25 Grad Celsius beim Schütteln. Alle 30 Minuten die Probe vom Medium entfernen.
Blot die Probe, um überschüssiges Wasser zu beseitigen und wiegen. Berechnen Sie dann den Schwellungsgrad und führen Sie elektronische Mikroskopie und Porenasymmetrie durch, wie im Textprotokoll beschrieben. Vor dem Beladen vier Liter Diflunisallösung bei 15 Milligramm pro Liter vorbereiten und über Nacht rühren.
Bestätigen Sie die Konzentration der Lösung durch UV-Vis-Spektroskopie. Dann schwellen 400 Milligramm gefriergetrocknete Hydrogelproben und sechs Milliliter destilliertes Wasser für 24 Stunden an. Zum Beladen einen Kolben mit 50 Millilitern Diflunisallösung füllen und bei 25 Grad Celsius unter ständigem Rühren halten.
Tauchen Sie jedes angeschwollene Hydrogel in den Kolben. Als nächstes nehmen Sie 2 Milliliter Aliquots der verbleibenden Diflunisallösung zu verschiedenen Zeiten, um den Plateaubereich der Kurve zu bestimmen. Ersetzen Sie die Lösung nach 24 Stunden durch eine frische Lösung.
Messen Sie die Absorption jedes Aliquotbeis bei 252 Nanometern und bestimmen Sie die Konzentration von Diflunisal, die in der Lösung vorhanden ist, indem Sie die Kalibrierkurve von Diflunisal verwenden. Bestimmen Sie die im Hydrogel zurückgehaltene Diflunisalmenge und die im Textprotokoll beschriebene Verkapselungseffizienz. Dann frieren Sie die geladenen Hydrogele bei minus 80 Grad Celsius ein und lyophilisieren Sie sie bei minus 50 Grad Celsius.
Zur Wirkstofffreisetzung 300 Milligramm gefriergetrocknete Diflunisal-belastete Hydrogele und 50 Milliliter Phosphatpuffer bei pH 7,4 und bei 25 Grad Celsius untertauchen. Halten Sie ständiges Rühren. Ziehen Sie zwei Milliliter Aliquots zu verschiedenen Zeiten zurück und ersetzen Sie sie durch ein frisches Medium, um ein konstantes Volumen zu halten.
Bestimmen Sie die diflunisale freigesetzte spektrophotometrisch bei 252 Nanometern gemäß einer Kalibrierkurve. Danach, folgern Sie den vorherrschenden Wirkstofffreisetzungsmechanismus in den Hydrogelen, wie im Textprotokoll beschrieben. Hier werden CSPVA-Hydrogele ohne Vernetzungsmittel nach einer Gefrierauftaumethode hergestellt.
Das FT-IR-Spektro zeigt sieben charakteristische Signale beider Polymere. Alle CSPVA-Hydrogele weisen eine stark poröse Oberfläche auf und je nach Präparationsbedingungen werden markante Veränderungen beobachtet. Hydrogele, die bei minus vier Grad Celsius präpariert werden, stellen die größten Poren dar.
Die bei minus 80 Grad Celsius hergestellten Hydrogele scheinen ein poröseres Netzwerk zu haben, und die Anzahl der Gefrierzyklen scheint definiertere und kreisförmige Poren zu fördern. Hydrogele, die mit sechs Gefrierzyklen bei minus 80 Grad Celsius präpariert werden, zeigen jedoch eine geringere Durchlässigkeit als solche, die mit vier Gefrierzyklen bei minus 80 Grad Celsius zubereitet werden, wahrscheinlich aufgrund ihrer hohen Tortuosität, was sich im geringeren Gesamteindringvolumen widerspiegelte. Bei Quellverhalten absorbieren Hydrogele schnell große Mengen Wasser und behalten das Zehnfache ihres Gewichts für die ersten fünf Stunden und bis zum 15-fachen ihres Gewichts nach 20 Stunden.
Bei der Beobachtung der Wirkung der Temperatur wird festgestellt, dass das mit vier Gefrierzyklen bei minus 80 Grad Celsius präparierte Hydrogel in den ersten fünf Stunden eine geringere Quellkapazität zeigt. Die Anzahl der Gefrierzyklen wird zu keinem Zeitpunkt als Unterschied angesehen. Die Freisetzungskinetik von Diflunisal aus Hydrogelen wird in allen Fällen für ca. 30 Stunden aufrechterhalten, wobei das Hydrogel mit vier Gefrierzyklen bei minus 80 Grad Celsius hergestellt wird, wodurch die höchste Menge freigesetzt wird.
Es gibt keinen Unterschied in der Freisetzung zwischen dem Hydrogel, das mit vier Gefrierzyklen bei minus 80 Grad Celsius hergestellt wird, und dem Hydrogel, das mit sechs Gefrierzyklen bei minus 80 Grad Celsius zubereitet wird. Das Wichtigste, was man beim Versuch dieses Verfahrens beachten sollte, sind die Einfrierenbedingungen. Sie müssen von fast drei Gefrierzyklen beginnen, um ein abgeschlossenes, gebildetes Hydrogel zu erhalten.
Diese Methode könnte mit der Zellkultur kombiniert werden, um die In-vitro-Biokompatibilität zu bewerten. Es könnte auch mit Abbaustudien kombiniert werden. Nach der Entwicklung dieser Verfahren erkannten wir, dass wir die Möglichkeit der Integration anderer Polymere in das Gemisch oder sogar natürliche Verbindungen wie Aloe Vera erkunden konnten.
Dies würde es uns ermöglichen, neue Eigenschaften in diese Materialien zu integrieren.
