Wir implementieren microCT mit Phosphotungssäure, um den Weichteilkontrast in der nicht-invasiven Untersuchung des menschlichen Orbicularis-Rückhaltebandes zu verbessern, einer empfindlichen Struktur innerhalb des Orbitbereichs. Dieses Protokoll wurde optimiert, um Forscher bei der nicht-invasiven Untersuchung von menschlichen Weichteilen zu unterstützen und ist einfach mit einem angemessenen Aufwand durchzuführen. Um die Proben zu erhalten, verwenden Sie zunächst einen Buntstift, um die Schnittfläche auf der Haut für die Probenernte anzuzeigen.
Bestätigen Sie, dass sich die markierte Linie medial zu einem medialen Campus erstreckt, seitlich zu einem seitlichen Campus, überlegen zu einer höheren Grenze des unteren Augenlids und schlechter zu einem Zentimeter unter der Linie vom Orbitalrand. Als nächstes verwenden Sie eine Klinge, um das Gesichtsgewebe entlang der markierten Linie zu schneiden, um sicherzustellen, dass der Schnitt tief genug ist, damit die Klingenspitze den Knochen berührt. Die geerntete Probe muss die Haut, das Unterhautgewebe, den Muskel, das Fett und das Periost enthalten.
Nach der Entnahme die Probe sofort in 10% formalin für fünf bis sieben Tage bei Raumtemperatur fixieren. Am Ende der Fixierungszeit die Probe in drei fünf bis sieben Millimeter dicke Stücke schneiden. Verwenden Sie eine Nadel und ein schwarzes Gewinde, um die superolaterale Seite jeder Probe so zu nähen, dass die Richtung der Probe zu späteren Zeitpunkten bestimmt werden kann.
Dehydrieren Sie die Probe in einer aufsteigenden Ethanolkonzentrationsreihe für einen Tag pro Konzentration, sodass die Proben in der 70%ethanol Lösung bleiben, bis sie färben. Eine Woche vor dem geplanten Scannen der Mikrocomputer-Tomographie 2,1 Gramm PTA auf 210 Milliliter 70% Ethanol hinzufügen und die Lösung auf einen Shaker bei 55 bis 60 Umdrehungen pro Minute legen. Bereiten Sie drei 70-Milliliter-Kunststoffbehälter für jedes geschnittene Stück vor.
Wenn sich der Farbstoff in die Alkohollösung aufgelöst hat, füllen Sie die Behälter mit der Lösung. Legen Sie eine Probe in jeden Behälter mit 1%PTA und schütteln Sie die Proben fünf bis sieben Tage lang mit 55 bis 60 Umdrehungen pro Minute. Wenn die Färbung abgeschlossen ist, lagern Sie die Proben in frischem 70% Ethanol für eine Woche, um sich auf das Scannen vorzubereiten.
Um das Trocknen zu verhindern, wickeln Sie die Proben in Parafilm und legen Sie eine Probe auf das Scannerfach. Stellen Sie die Quellspannung des Scanners auf 70 Kilovolt, den Quellstrom auf 114 Mikroampere, den Aluminiumfilter auf 0,5 Millimeter, die Bildpixelgröße auf 20 quadratische Mikrometer, die Pixel auf 2, 240 x 2, 240, die Belichtung von 500 Millisekunden und den Rotationsschritt auf 0,3 Grad. Starten Sie dann den Scanvorgang.
Wenn der Scanvorgang abgeschlossen ist, öffnen Sie die Rekonstruktionssoftware, und wählen Sie Aktionen und Dataset öffnen aus, um die gescannten Dateien zu starten. Wählen Sie die Registerkarte Einstellungen aus, und legen Sie die Ringartefakte reduktion auf sieben und die Strahlhärtekorrektur fest. Um mit der Rekonstruktion zu beginnen, wählen Sie Start aus.
Die endgültigen Daten werden im angegebenen Ordner gespeichert. Öffnen Sie am Ende der Rekonstruktion die Dateigrößenänderungssoftware, und wählen Sie Quelldatensatz aus, um die rekonstruierten Dateien zu starten. Wählen Sie jpg auf der Registerkarte Zieldatensatz und wählen Sie die 1/2-Größenänderungsoption mit der Option Qualität "Keine Interpolation" Dann passen Sie die Schiebeleiste auf 100 auf der Registerkarte Bildkomprimierung an und starten Sie die Konvertierung.
Öffnen Sie für die 3D-Rekonstruktion die 3D-Volume-Rendering-Software, und wählen Sie Aktionen und Volumedaten laden aus. Um die Helligkeit und den Kontrastpegel anzupassen, ändern Sie die Formübertragungsfunktion im Histogramm auf der Registerkarte Übertragungsfunktion. Wählen Sie als Nächstes Optionen und Beleuchtung aus, und wählen Sie die Symbole Schatten und Flächenbeleuchtung aus, um einen realistischen Modellierungston zu erzielen.
Klicken und ziehen Sie mit der rechten Maustaste und ziehen Sie, um das 3D-Bild zu verschieben und zu drehen, um die beste Ansicht zu finden, und scrollen Sie, um wie gewünscht zu vergrößern oder zu verkleinern. Klicken Sie auf Umschalttaste und Ziehen, um die Stelle zu verschieben, an der die Schnittbilder angezeigt werden. Schalten Sie das Lichtsymbol ein, und passen Sie die Anzeigeleiste an, um die beste Anzeige zu finden, schalten Sie dann das Lichtsymbol aus und schließen Sie die Registerkarte Beleuchtung.
Wählen Sie auf der Registerkarte Optionen die Option Anzeigen und Zuschneiden aus, um das Feld für das endgültige Bild auszublenden. Wählen Sie dann Aktionen und Bild speichern aus, um das Bild zu speichern. Diese detaillierte Rekonstruktion des ORL wurde durch mikroCT mit PTA-Präparat erreicht, wie gezeigt, was die Visualisierung einer bandförmigen fibromuskären Struktur ermöglicht, die sich schräg zwischen der Dermis und dem Periost eitern.
In der koronalen Ansicht erhöht sich die Menge und Komplexität der Fasern seitlich. In der horizontalen Ansicht wird ein ausgeklügeltes Netz mit einer arborisierten Formation beobachtet. In der sagittalen Ansicht nimmt die Dicke der ORL-Fasern schlechter ab.
Insgesamt beweist diese multidirektionale Beobachtung, dass der ORL aus einem mehrschichtigen Netz aus kontinuierlichen Platten mit Variationen in Anzahl und Dicke der Fasern je nach Position besteht. Wenn die Dauer der Färbung im Vergleich zum Volumen einer Probe nicht ausreicht, kann das endgültige Bild ein leeres Loch im zentralen Bereich der Probe enthalten. Andere Agenten neben PTA können verwendet werden und verschiedene Agenten haben unterschiedliche Verdienste oder Färbung Eigenschaften Interessen.
Daher ist es sinnvoll, den Färbebereich entsprechend Ihrem Experiment zu optimieren.
