Dieses Protokoll ist wichtig, weil es das erste Modell der Entzündung sensibilisierte vorzeitige Hirnverletzungen in den Frettchen bietet, die zu erheblichen und anhaltenden Verletzungen führt. Diese Technik beinhaltet eine längere Beleidigung, die viele der Auslöser und biochemischen Mechanismen enthält, die gedacht werden, um zu den Arten von Hirnverletzungen bei vorgeborenen menschlichen Säuglingen zu beitragen. Die Demonstration des Gehirnmessverfahrens wird Kylie Corry, eine Forscherin in unserem Labor, und Olivia White, studentische Studentin, demonstrieren.
Dreißig Minuten vor Beginn der Operation, verabreichen Drei Milligramm pro Kilogramm LPS IP kits in der Verletzungsgruppe und ein äquivalentes Volumen von steriler Saline von drei Mikroliter pro Gramm, um Tiere zu kontrollieren. Vor Beginn des Verfahrens, verwenden Sie kleine Tier-Clippers, um alle Haare auf dem ventralen Halsbereich des Frettchens in einem rechteckigen Muster zu entfernen, achten Sie darauf, zu vermeiden, die Haut zu nicken oder Wärmeausschlag zu erzeugen. Lokale Anästhesie auf den rasierten Bereich verabreichen und die Haut mit drei abwechselnden Tupfern Povidonjod und siebzig Prozent Ethanol desinfizieren.
Nachdem Sie eine angemessene Sedierung durch Zehenstich bestätigt haben, bedecken Sie das Tier mit sterilen, ausgeschnittenen Einwegvorhängen, die den Nackenbereich freilegen. Für bilaterale Karotisarterieligation, verwenden Sie eine einverwendungszahl zehn Skalpellklinge, um einen 1,5 Zentimeter Mittellinienschnitt in der Mitte des Halses zu machen und verwenden Sie feine Hämostate und gekrümmte Zangen, um sich unverblümt auf die linke Halsschlagader zu sezieren. Sezieren Sie die exponierte Arterie weg vom zugehörigen neurovaskulären Bündel.
Und verwenden Sie ein Paar gekrümmte feine Zange, um eine geschleifte zehn Zentimeter Lange sterile 5/0 Seidennaht unter der Arterie zu passieren. Schneiden Sie die Naht in die Hälfte und binden Sie beide Längen der Naht sicher, um die Arterie zu ligte, so dass mindestens zwei Millimeter zwischen den Knoten. Transect die linke Halsschlagader zwischen den Nähten, wobei darauf geachtet wird, den Nerv intakt zu lassen und die Sezierung auf der rechten Seite zu wiederholen.
Reversibel ligate die rechte Halsschlagader mit einer einzigen sterilen 1/8 Zoll Nabelkrawatte. Und schließen Sie die Wunde mit chirurgischen Hautclips. Dann lassen Sie das Tier in einem temperaturgeregelten Wasserbad für mindestens dreißig Minuten mit Überwachung vor Hypoxie erholen.
Zur sequenziellen Hypoxie-, Hyperoxia- und Hypoxiebehandlung, legen Sie die Tiere in der Verletzungsgruppe in eine luftdichte Kammer innerhalb eines Wasserbades. Kontinuierliche Überwachung der Sauerstoffkonzentration in der Kammer sowie der Rektaltemperatur in mindestens einem Sentineltier. Spülen Sie die Kammer mit befeuchtetem neun Prozent Sauerstoff und 91 Prozent Stickstoff und halten Sie eine Durchflussrate von drei bis fünf Litern pro Minute, abhängig von der Kammergröße.
Sobald die Sauerstoffkonzentration in der Kammer neun Prozent erreicht hat, setzen Sie die Lieferung für dreißig Minuten fort. Am Ende der Hypoxie-Behandlung die Gasversorgung auf 80 Prozent befeuchten Sauerstoff und 20 Prozent Stickstoff umstellen. Nach dreißig Minuten Hyperoxie, öffnen Sie die Kammer, damit sie schneller zu Normoxia erreichen, durch Ausgleich mit Raumluft, vor dem Abdichten der Kammer und Spülen mit neun Prozent befeuchtetem Sauerstoff wieder.
Kontinuierliche Überwachung aller Tiere während dieser zweiten Runde der Hypoxie, beachten Sie alle Tiere, die Bradypnoe zeigen. Sobald die Sauerstoffkonzentration in der Kammer neun Prozent erreicht hat, setzen Sie die Hypoxie-Behandlung für dreißig Minuten fort. Am Ende der Behandlung, verwendet gekrümmte Zange zu identifizieren und binden Sie das Nabelband von der rechten Halsschlagader.
Schließen Sie die Wunde mit chirurgischen Hautclips wieder ab. Dann geben Sie alle Kits für 60 Minuten für die Pflege und Genesung an die Jills zurück. Am Ende der Erholungsphase bringen Sie die verletzten Tiere für sechs Stunden bei 37 bis 40 Grad Celsius in die Wasserbäder zurück und passen die Wassertemperatur nach Bedarf an, um die rektalen Temperaturen von 36 bis 37 Grad Celsius aufrechtzuerhalten.
Dann, rückkehr ekits wieder zu ihren Jills. Legen Sie nach der Gehirnernte und Fixierung am entsprechenden experimentellen Endpunkt die Spitzen eines elektronischen Bremssattels auf die dorsalen und ventralen Aspekte jedes Gehirns, um die Höhe jedes verletzten und nicht verletzten Gehirns zu messen. Platzieren Sie die Spitzen des Bremssattels an den seitlichsten Teilen der zeitlichen Lappen, um die Breite jedes Gehirns zu messen und jedes Gehirn zu wiegen.
Verwenden Sie den Bremssattel, um die Längsspalte, den gesamten Sulci vom Anfang und Ende des unterschiedlichsten Teils des entsprechenden Sulcus und den gesamten Gyri aus dem breitesten Aspekt jedes entsprechenden Gyrus zu messen. Legen Sie dann eine Spitze des Bremssattels an der hintersten Stelle der Längsspalte und die andere Spitze des Bremssattels am hintersten Teil des Kleinhirns, um die Menge des exponierten Kleinhirns zu messen. Von den 34 Tieren aus sechs Würfen, die in dieser Studie der Beleidigung ausgesetzt waren, erlitten fünf Tiere mittelschwere Verletzungen und vier Tiere schwere Verletzungen.
Mit zunehmender Verletzung wird eine Verengung des Gyri in den zeitlichen und/oder okzipitalen Lappen beobachtet, mit einer damit verbundenen Sulculverkürzung und Verbreiterung der Längsspalte und größeren Bereichen des zystischen Gewebeverlusts bei den am schwersten verletzten Tieren. Während der Reflextestphase zeigen die verletzten Tiere eine langsamere Zeit, um sich in der negativen Geotaxis-Aufgabe zu drehen. Eine langsamere Zeit, um sich von der Kante in der Cliff Aversion-Aufgabe zu drehen, und eine langsamere Zeit nach rechts.
Auf dem Laufsteg zeigen verletzte Tiere eine ähnliche Durchschnittsgeschwindigkeit wie Kontrollen, zeigen aber bei jedem Lauf eine deutlich größere Geschwindigkeitsvariation. Der gewichtsangepasste Abstand zwischen den Pfoten und Hinterpfoten ist bei verletzten Tieren deutlich größer, wobei weniger Druck pro Pfotenfläche durch die vier Pfoten ausgeübt wird. Auf dem freien Feld legen die verletzten Tiere weniger Gesamtdistanz zurück, halten häufiger an und verbringen deutlich mehr Zeit in der Mitte des Feldes und weniger Zeit in den Ecken.
Hier können repräsentative Heatmaps von Kontroll- und verletzten Tieren beobachtet werden. Achten Sie darauf, die Arterie vom begleitenden Nerv zu sezieren und die maximal mögliche Hypoxiezeit zu ermöglichen. Diese Schritte werden sicherstellen, dass die Mehrheit der Tiere überleben, während auch eine Verletzung zu tragen.
Nach diesem Verfahren können alle biochemischen, pathologischen oder Verhaltensergebnisse bewertet werden, einschließlich Bewertungen, die normalerweise auf Nagetiermodelle von Hirnverletzungen beschränkt sind.
