Das übergeordnete Ziel dieser Methode ist es, konsistente sekundäre Lymphödeme im Hinterglied von Mäusen zu induzieren, ohne eine schwere Morbidität zu verursachen. Diese Methode kann verwendet werden, um sekundäre Lymphödeme im Hinterglied von Mäusen zu induzieren. Der Hauptvorteil dieser Methode ist, dass es unbedeutende Lymphödeme löst, die mindestens acht Wochen dauern, ohne eine schwere Morbidität zu verursachen.
Jemand, der neu im Verfahren ist, kann mit den mikrochirurgischen Techniken zu kämpfen haben. Wir empfehlen daher eine mikrochirurgische Ausbildung und mehrere Praxisverfahren, um ein erfolgreiches Ergebnis zu gewährleisten, aber auch, um den Forscher darauf vorzubereiten, dass er oder sie das Verfahren effizienter durchführen kann. Richten Sie die Strahlungsquelle ein und befeuchten Sie die Maus, wie im Protokoll beschrieben.
Legen Sie ein 1,5 Millimeter dickes Bleipolster, um sicherzustellen, dass nur der Bereich, der operiert wird, bestrahlt wird. Das gezeigte Beispiel ist eine Post-Chirurgie-Maus, um den Bereich zu klären. Verabreichen Sie eine Dosis von 10 grauer Bestrahlung.
Die Forscher müssen Vorsichtsmaßnahmen treffen, wenn sie mit Strahlung arbeiten. Während dieses Experiments wurde die gesamte Bestrahlung in einem strahlungsisolierten Raum durchgeführt. Und die Strahlungsquelle wurde erst eingeschaltet, als alle Mitarbeiter den Raum verlassen hatten.
Wiegen Sie die Maus vor der Operation. Untersuchen Sie die Anästhesietiefe durch Pfoten- oder Schwanzpinch-Test. Rasieren Sie das für das Verfahren gewählte Bein.
Stellen Sie den Sauerstofffluss auf 0,8 Liter pro Minute ein. Verbinden Sie es mit einem Nasenkegel. Ophthalmologische Salbe auftragen.
Injizieren Sie 0,5 Milliliter Saline subkutan, vorzugsweise in den Scruff der Maus, um Hypovolämie während der Operation zu verhindern. Legen Sie die Maus auf das chirurgische Tuch in Supine-Position. Legen Sie den Nasenkegel über die Schnarbe.
Fixieren Sie das Ende der Hinterbeine vorsichtig mit Klebeband, um zu verhindern, dass sich die Maus während der Operation verschiebt. Heben Sie die Haut mit glatten Zangen an und schneiden Sie eine kleine Öffnung etwa fünf Millimeter proximal zur poplitealen Fossa. Schieben Sie eine scharfe Schere in die Öffnung und clip in Richtung knie, so dass der Schnitt endet knapp über dem Knie.
Achten Sie darauf, die darunter liegenden Gefäße nicht zu durchstechen, indem Sie die Haut beim Schneiden mit Zangen heben. Bewegen Sie die Maus in eine anfällige Position und schließen Sie den Umfangsschnitt ab. Sezieren Sie die Haut auf ein paar Millimeter über dem Winkel.
Denken Sie daran, das Gewebe feucht mit steriler Saline während des gesamten Verfahrens zu halten. Ziehen Sie die Haut der proximalen Wunde mit einem elastischen Retraktor zurück. Und stellen Sie sicher, dass die Ischiasvene sichtbar ist, wie gezeigt.
0,01 Milliliter Patent Blue V subkutan zwischen dem zweiten und dritten Zehen injizieren. Drücken Sie vorsichtig ein paar Mal die Pfote, um das Patent Blue V zu verteilen. Die Verteilung des Patent Blue V kann durch das Mikroskop gesehen werden. Die zu visualisierenden Strukturen sind das proximale Lymphgefäß, PLV, der popliteale Lymphknoten, PLN, das erste distale Lymphgefäß, DLV1, und das zweite distale Lymphgefäß, DLV2.
Vergrößern Sie, um die PLV zu visualisieren und mit einer 10-0 Nylon-Nähte zu ligisieren. Drücken Sie die Pfote, um sicherzustellen, dass kein Patent Blue proximal an die Ligatur übergeht. Ligate die beiden distalen Lymphgefäße, wie gezeigt.
Drücken Sie die Pfote mehrmals, um sicherzustellen, dass kein Patent Blue V proximal an die Ligatur übergeht. In diesem Beispiel ist zu sehen, dass eines der Lymphgefäße aufgrund der Ligatur platzt, die den Lymphfluss behindert. Entfernen Sie den poplitealen Lymphknoten, der Lymphknoten hat eine glatte perlähnliche Oberfläche und wird durch das Patent Blue V im Gegensatz zum umgebenden Fettgewebe gefärbt.
Bevor Sie das Leistenfettpad entfernen, kauterisieren Sie dieses Gefäß wie gezeigt. Dann entfernen Sie das Fettpolster in einem Stück. Stellen Sie sicher, dass es keine aktive Blutung gibt.
Dies ist ein Beispiel für einen lokalisierten Leisten-Lymphknoten. Der Lymphknoten im Leistenfettpad wird selten vom Patent Blue V gefärbt und kann schwer vom Fett zu unterscheiden sein. Das Entfernen des Fettpolsters in einem Stück ist der beste Weg, um sicherzustellen, dass der Lymphknoten entfernt wurde.
Die Hautränder bis zur Muskelfaszie mit einer 6-0 Nylonnaht mit Zangen und Nadelhalter, die einen Abstand von zwei bis drei Millimetern hinterlässt, um den oberflächlichen Lymphfluss zu beschränken, zu befestigen. Dies ist ein Beispiel für die fertigen Nähte, in der poplitealen Fossa, der seitlichen Seite des Hintergliedes, über dem Knie, und der medialen Seite des Hinterbeins. Verabreichen Sie Analgesie und wiegen Sie die Maus nach der Operation, dann legen Sie es in einem Schrank für die Genesung erhitzt.
Wiederholen Sie den Vorgang für die Bestrahlung vor der Operation. Diese Grafik zeigt das kombinierte mittlere Hintergliedvolumen von drei separaten Studien in den acht Wochen nach der Operation. Insgesamt wurden 31 Mäuse aufgenommen.
Die x-Achse steht wochenlang nach der Operation für. Die y-Achse stellt das Hintergliedsvolumen in Kubikmillimetern dar. Die Pfeilleisten stellen die Standardabweichung dar.
Es ist zu erwarten, dass die Schwellung aus der Operation und das induzierte Lymphödem in den ersten vier Wochen abnehmen wird. Nach den ersten vier Wochen sehen wir einen relativ stabilen Zustand des Lymphödems. Das Volumen der Kontrolle hinterdlimb steigt während der acht Wochen, so streng sagen, die Differenz zwischen dem Lymphödem hinterdlimb und der Kontrolle hinter, war dies unerwartet.
Die Ursache wird spekuliert, dass die Mäuse ihre nicht operierte Hinterbeine in den Wochen nach der Operation mehr als die operierte Hinterbeine benutzten. Dies könnte zu einer Hypertrophie der Kontrolle hinterdlimb führen und vielleicht die Zunahme des Volumens erklären. Für einzelne Zahlen zu den drei enthaltenen Studien lesen Sie bitte das Protokoll.
Diese Tabelle zeigt Sidaks Mehrfachvergleichstest für die kombinierten Volumenmessungen der drei enthaltenen Studien. Der berechnete P-Wert zeigt, dass es während aller acht Wochen der Nachbeobachtung statistisch signifikante Unterschiede zwischen den Hinterbleibsen mit induziertem Lymphödem und den Kontrollhinterbeinen gibt. Für individuelle statistische Analysen zu den drei enthaltenen Projekten lesen Sie bitte das Protokoll.
Diese Methode induziert statistisch signifikante Lymphödeme, die mindestens acht Wochen dauern. Das Verfahren kann verwendet werden, um die Petrifizialität von Lymphödemen zu untersuchen und neue Behandlungsmöglichkeiten zu erforschen. Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein Verständnis dafür gewonnen haben, wie man sekundäres Lymphödem im Hinterglied von Mäusen induziert, indem Sie eine Kombination aus Mikrochirurgie und vor- und nach-chirurgischer Bestrahlung verwenden.
Nach der Beherrschung kann der chirurgische Eingriff in 45 Minuten durchgeführt werden.
