Dieses Protokoll zielt darauf ab, die klinische Einstellung von Resterkrankungen nach einer Tumorentwirrungsoperation nachzuahmen und ermöglicht es uns daher, neue Krebstherapien im Rahmen der postoperativen Wundheilung zu testen. Der Vorteil dieser Technik ist, dass sie eine Standardisierung der zugefügten Wunde und der Menge des Tumors ermöglicht. Diese Technik ist besonders wichtig für präklinische Studien, da sie neue Behandlungen für Krebserkrankungen identifiziert, dass sie lokal ein Beispiel dafür ist, ist Weichteilsarkom.
Diese visuelle Demonstration ist entscheidend, um die Inversionstechnik zu demonstrieren, die es uns ermöglicht, den Tumor, der an der Hautseite befestigt ist, freizulegen. Beginnen Sie dieses Verfahren mit der subkutanen Impfung von präparierten Krebszellen bei Mäusen, wie im Textprotokoll beschrieben. Am 12. Tag, nach der Impfung, wenn Tumore eine Größe von etwa 50 Quadratmillimetererreichten erreicht haben, dosieren Mäuse mit 100 Mikroliter Buprenorphin subkutan in der Halsschnappung, 30 Minuten vor der Operation.
Richten Sie den Operationsbereich mit dem mit Banklack überzogenen Wärmepolster ein und richten Sie einen Nasenkegel für die Anästhesie ein. Ordnen Sie saubere chirurgische Geräte so an, dass sie in Reichweite sind, einschließlich Chlorhexadin, Tupfer, Gaze, Augengel, zwei gekrümmte Zangen, Scheren, Clip-Applikator, Clip-Entferner und Clip-Nachfüllungen. Erwärmen Sie die Heizkammer auf 37 Grad Celsius und richten Sie ein weiteres Wärmepolster für die Erholung ein.
Beachten Sie, dass für dieses Verfahren zwei Personen erforderlich sind. Ein Assistent muss die Atmung der Maus während des Eingriffs genau überwachen. Führen Sie nach der Anästhesisierung der Maus, wie im Textprotokoll beschrieben, einen Pinch-Test und einen Hornhautreflextest durch, um sicherzustellen, dass die Maus vor Beginn der Operation vollständig beästhetisiert wird.
Bedecken Sie die Augen der Maus mit einer kleinen Menge ophthalmologischem Gel, um Augentrockenheit zu vermeiden. Beginnen Sie diese Operation, indem Sie den chirurgischen Bereich mit Chlorhexadin abwischen. Mit Zangen und einer Schere machen einen Zentimeter gerade einSchnitt entlang der Rückenseite, drei Millimeter vom Tumor entfernt.
Schneiden Sie die Haut nicht direkt ab, da sie nicht gut verheilt. Vermeiden Sie es, ein Skalpell zu verwenden, um den Tumor zu schneiden und verwenden Sie eine Pinzette, um die Stücke zu schaufeln. Mit einer Pinzette die Faszien und das subkutane Fettgewebe zwischen Tumor und Peritoneum wegziehen.
Der subkutane Tumor ist normalerweise an der Hautseite befestigt. Öffnen Sie die Wunde, indem Sie die Haut vorsichtig auf der Tumortragenden Seite mit einer Pinzette halten und den Tumor umkehren, so dass er außen sichtbar ist. Schneiden Sie die Tumorkapsel mit einer Schere von der Hälfte ab, um sie zu entfernen, beginnend mit der Basis des Tumors, die der Öffnung am nächsten liegt.
Für 50%Debulk-Chirurgie, schnitt über die Mitte des Tumors. Mit gekrümmten Zangen schaufeln Sie den Abschnitt des Tumors, der entfernt werden soll. Schaufeln Sie alle Reste aus dem Debulk-Bereich.
Für 75%debulk, beginnen Sie mit der Durchführung einer 50%Tumor-Debulk dann in die Hälfte der verbleibenden 50% des Tumors schneiden. Scoop bis 25% des Tumors mit gekrümmten Zangen. Um die chirurgische Stelle zu schließen, legen Sie den verbleibenden Tumor wieder unter die Haut und mit Zangen, ziehen Sie die Hautklappen zusammen und richten Sie die Haut entlang der Wunde.
Halten Sie die Haut fünf Millimeter vom Rand der Wunde zusammen und verwenden Sie chirurgische Clips, um die Wunde zu schließen, die auf der Seite beginnt, die der Zange am nächsten ist. Tragen Sie so viele Clips wie nötig auf, um sicherzustellen, dass kein darunter liegendes Gewebe exponiert wird. Im Allgemeinen werden drei bis vier Clips mit zwei Millimeter Naben zwischen Clips aufgebracht.
Lassen Sie die Mäuse sich erholen, indem Sie sie in die warme Heizkammer legen. Legen Sie den Käfig der Maus auf das Heatpad. Überwachen Sie die Mäuse in der Heizkammer, bis sie sich vom Anästhetikum erholt haben.
Dann legen Sie die Mäuse wieder in den Käfig, lassen Sie den Käfig auf dem Wärmepolster für weitere 10 Minuten, bis die Mäuse aktiver geworden sind. Geben Sie den Mäusen feuchte und weiche Nahrung. Überwachen Sie die Mäuse eine Stunde nach der Operation auf Genesung.
Überwachen Sie die Mäuse am Ende des Tages und am nächsten Morgen erneut und stellen Sie sicher, dass die Clips an Ort und Stelle bleiben. Behandeln Sie Mäuse perioperativ mit Advents- oder neoadjuvanten Therapie zu einem bestimmten Zeitpunkt, je nach Behandlung von Interesse. Behandeln Sie beispielsweise Mäuse mit einer Dosis von 100 Mikrogramm Anti-CTLA-4 intraperitoneal am 15. Tag nach der Impfung.
Alternativ behandeln Sie die Mäuse mit drei Dosen von 200 Mikrogramm Anti-PD-1 intraperitoneal an Tagen, 15, 17 und 19 nach der Impfung. Die unvollständige chirurgische Resektion von 50 Quadratmillimeter-Tumoren, die hier durch die gepunktete Linie angezeigt wird, führt zu einem 100%reproduzierbaren Nachwachsen der Tumoren in Abwesenheit einer adjuvanten Immuntherapie. Daher ist das Tumorwachstum auf eine Größe von 50 Quadratmillimetern eine ideale Größe für die teilweise Ablagerung.
Das Modell wurde dann verwendet, um adjuvante Immuntherapien mit Antikörpern gegen Checkpoint-Module, zytotoxischeT T-Lymphozyten-assoziiertes Protein vier und programmierten Todesrezeptor eins zu testen. Die Behandlung von Mäusen mit Anti-CTLA-4 führte zu einer Heilungsrate von 80%, während die Behandlung von Mäusen mit Anti-PD-1 zu einer Heilungsrate von 25% führte. Es ist wichtig, dass der verbleibende Tumor an der Haut befestigt bleibt, sonst wird die Blutzufuhr abgeschnitten und der Tumor wird zum Nekrotikum.
Nach diesem Verfahren können Tumoren mit einer Vielzahl von Methoden analysiert werden, wie z. B. durchFlusszytometrie, um zu beurteilen, wie sich die Operation auf tumorinfiltrierende Zellen auswirkt. Dieses Mausmodell hat es uns ermöglicht zu erforschen, wie sich die Wundheilung auf Krebsimmuntherapien auswirkt.
