Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, Follikelzellen und Oozyten im Eierstock-Follikel von Zebrafischen zu trennen. Der Follikulus ist die Grundeinheit des Eierstocks, die aus den Oozyten und den umgebenden Follikelzellen besteht. Es ist das breite Werkzeug, um sowohl die Follikelzelle als auch die äußeren Kompartimente für eine gut erforschte Politik zu trennen, einschließlich der primären Erfassung von Follikelzellen und steigt auf Genexpression, alle Sättigung und In-vitro-Fertilisation.
Kürzlich ist der Zebrafisch zu einem leistungsstarken Modell von Nissan geworden, das eine Kontrolle der bereits Entwicklung untersucht. Hier präsentieren wir eine einfache Methode, so trennt Follikelzellen und Eizellen von Zebrafisch Follilikel, die Untersuchungen der bereits Entwicklung in Zebrafisch erleichtern Die kommerzielle, keine Masse oder die beiden trennt sich über Follikelzellen und alle Seiten von Spins die verwenden Post, die ein Labyrinth hat, zeitaufwändig und hatte hohe Schäden an der Außenseite. Hier haben wir eine einfache Methode zu zwei separaten Fächern mit oder Teilgläser Tamela Rate unter einem reinen Riff etabliert.
Unser Metro-Bereich, sowohl außen als auch die Follikelzellen, kann leicht durch Eingabe der gezogenen Glaskapillare hergestellt werden. Zuerst bereiten Sie eine Dichterglaskapillare vor. Schlagen Sie den Kopf der Glaskapillare auf den Alkoholbrenner.
Verwenden Sie eine vier Seiten, um die Glaskapillare auf den Rave-Kartendurchmesser zu dehnen. Zweitens, desect, die von den erwachsenen weiblichen Fischen überfischen, isolieren Eierstockfollikel aus dem Eierstock. Schließlich verwenden Sie eine abgewogene Glaskapillare, um Follikel und Oozyten von Eierstockfollikel zu trennen.
Bereiten Sie die Glaskapillare, scharfen Behälter, reichlich Cutter, Alkoholbrenner, und eine Zange. Legen Sie den Alkoholbrenner, nehmen Sie ein Glas Kapillare mit nach Hause und erhitzen Sie ein Ende der Glaskapillare auf dem Feuer des Alkoholbrenners. Verwenden Sie eine Zange, um ein weiteres Ende der Glaskapillare zu halten, bebetonen Sie die Glaskapillare schnell und sanft.
Legen Sie den Glasabfall in den scharfen Behälter. Verwenden Sie den reichlichen Cutter Gretch am Pool mit Glas. Dann brechen Sie durch die Zange Sanft, um eine glatte Öffnung des Hafenblicks schnell brennen das Ende der Glaskapillare auf Alkoholbrenner mehrmals und reiben Sie das offene Ende durch reichlich Cutter sorgfältig.
Nehmen Sie, wie der Fischtank aus dem kultivierten Wassersystem. Und jetzt bindet die erwachsene Weibchen, indem sie Fische mindestens zwei bis fünf Minuten auf das Eiswasser legen, bis Fische die Gill-Bewegung stoppen. Nehmen Sie den Fisch aus der Eiskiste und entfernen Sie den restlichen Wasserfischkörper mit dem Handtuch, legen Sie einen Fisch auf die D-Sektionsplatte mit vier Sätzen.
Fische wurden enthauptet, indem sie Spang Akkord mit ihrer scharfen Schere servierten, um den Tod zu sichern. Verwenden Sie sezierende Schere wie folgt zu schneiden. Sezieren Sie von der Chloe Schnitt zu den Kiemen entlang der Mittellinie des Bauches, von der Bank der Chloe geschnitten, von der vorderen Spitze auf die dorsale Seite geschnitten.
Entfernte vorsichtig die Haut und Muskeln auf einer Seite des Körpers, belichte die inneren Organe und nehmen gesunde ganze Eierstöcke mit vier Schritten. Die Eierstöcke wurden sofort in den 100 Millimeter in Kultur, Tellerbehälter 60%L 50 Median gelegt. Gesendet ein Sezieren Mikroskop mit Durchlichtoptik basierend auf der Größe und Morphologie der Eierstockfollikel verschiedener Stadien.
Isolieren Sie diese Ovarialfollikel manuell mit einem Bier von vier Sätzen. Sammeln Sie die isolierten Ovarialfollikel und legen Sie sie in eine andere kultivierte Schale mit 60%L 50 Medium, schöne isolierte Eierstockfollikel werden verwendet, um für die Trennung von Follikelzellen und Oozyten zu trennen. Stellen Sie dann ein Gerät für die Trennung ein.
Verwenden Sie ein 30 Zentimeter langes Kunststoffrohr. Ein Ende ist mit einer Ein-Milliliter-Pipettenspitze mit einem Filterelement verbunden. Ein weiteres Ende ist mit einer 200-Mikroliter-Pipettenspitze verbunden.
Unter dem Trennmikroskop, verwenden Sie den Mund, um den Luftstrom zu steuern, um den defekten geht in den Pool mit Glaskapillare dann blasen die Torheit geht aus der Glaskapillare. Dabei können Follikelzellen und Oozyten von Eierstockfollikel getrennt werden. Dies ist ein Trennprozess für einen reifen Stadiumfollikel.
Während des Inhalationsprozesses wird die follikelzellige Schicht von der Oozyte gelöst, tut dies nach dem Ausblasen der Follikelzelle und Oozyte kann getrennt werden. Dies ist ein vollständiger Bodenstadium Follikel. Wir können sehen, dass die follikelische Zellschicht von der Oozyte gelöst ist.
Diese Methode kann auch in der Frühphase Der Eierstockfollikel angewendet werden. Dies ist ein Follikel im mittleren Latella Genesis Stadium. Dies ist ein Follikel im frühen vatella Genesis Stadium.
Dies ist ein Follikel in einem Pre-vatalla Genesis Stadium. Aus diesem Bild können Sie den Prozess der Trennung sehen. Panel eins zeigt einen intakten Follikel bei ausgewachsenem Bühnenpanel.
Panel zwei zeigt die Winkelung dieses Follikels in gezogene Glaskapillare. Panel drei zeigt, dass der Follikel aus der gezogenen Glaskapillare herausgeblasen wurde. Panel vier zeigt die erfolgreiche Trennung F denuded Oocyte und Follikuläre Zelle.
Auch bei dieser Methode kann die Trennung der Follikelzelle in Oozyte an verschiedenen Stadiumfollikelen durchgeführt werden. Untersuchen Sie, ob die Follikelzellen von den intakten Follikel getrennt wurden. Intakt ein Follikel und ist von verschiedenen Stadien der Follikel von BV-Stadium zu FG-Stufe getrennt wurden mit DAPI gefärbt.
Der Kern der Follikelzellen kann durch DAPI gefärbt werden. Das blaue Signal von DAPI wurde in intakten Follikel beobachtet, aber nicht denuded Oocytes in diesen verschiedenen Stadium Follikel. Um die klare Trennung weiter zu bestätigen, wurden die intakten Follikel und getrennten Oozyten zu den histologischen Abschnitten entkernt.
DAPI-Angaben zeigten, dass Follikelzellen eindeutig entfernt und Oozyten denudiert wurden. Mit dieser Methode wurden denuded Oocytes getrennt von ausgewachsenen Stadium Follikel gefunden, um die spontane Oozytenreifung zu durchlaufen. ohne Behandlung nach vier Stunden Inkubation.
Nach aktivierung durch Wasser können diese gereiften Oozyten die volle Chorionexpansion durchlaufen. Dieses Ergebnis zeigt den geringen Schaden an der Oozyte mit dieser Methode an. So kann dieser Senf verwendet werden, um die denuded Oocyte für das Studium der Oocyte gereiften Ration von Zebrafischen zu erhalten.
Die Follikelschicht des Follikel kann durch ein Kapillarglasrohr entfernt werden. Diese können befruchtet werden und in die Schraffurphase delegiert werden. Die Ergebnisse deuten darauf hin, dass diese Methode für die In-Vitro-Fertilisation bei Zebrafischen verwendet werden kann.
Wir beschreiben hier eine neuartige Methode für die schnelle und einfache Trennung von Follikelzelle und Oozyte von Zebrafischen Eierstockfollikel. Diese Methode hat mehrere wesentliche Vorteile, gekippte Methoden. In erster Linie besteht die Seisgefahr bei der Trennung, da nur eine einzige und externe Manipulation erforderlich ist.
Die erhöhte Leichtigkeit der Trennung erhöht die Verfügbarkeit dieser Methode für die Forscher, die nicht in Mikrodissektion qualifiziert sind. Zweitens kann diese Methode verwendet werden, um Follikelund und Oozyte von Eierstockfollikel und frühen Entwicklungsstadien, einschließlich PV, EBV MV-Stadium, zu trennen, eine solche Trennung kann nicht im frühen Stadium Follikel mit aktuellen Methoden durchgeführt werden. Drittens führt diese neue Methode zu weniger Schaden an den Oozyten.
Die durch diese Methode getrennten denuded Oocytes können der Oozytenreifung unterzogen und befruchtet werden. Darüber hinaus kann diese Methode auch bei anderen Fischen angewendet werden.
